熒光原位雜交技術(shù)在尿路上皮癌診斷中應(yīng)用

吳麗華 ，姚 鋒 ，黃 華

（南通大學(xué)附屬醫(yī)院1病理科；2婦產(chǎn)科，江蘇226001）

尿路上皮癌在惡性腫瘤中有上升趨勢(shì)，目前膀胱鏡檢查及尿液液基脫落細(xì)胞學(xué)檢測(cè)是尿路上皮癌普遍使用的兩種診斷手段。然而，有創(chuàng)性的膀胱鏡檢查與尿液液基脫落細(xì)胞學(xué)檢查特別是對(duì)尿路上皮癌癌前期和早期病變的辨認(rèn)存在著局限性。

近年來(lái)，隨著對(duì)尿路上皮癌遺傳學(xué)改變的深入研究。研究者發(fā)現(xiàn)9號(hào)染色體部分（如p16位點(diǎn)）或全部丟失是最常見(jiàn)遺傳學(xué)改變，且這一改變與膀胱癌的早期發(fā)生密切相關(guān)。此外，膀胱癌的發(fā)展與染色體不穩(wěn)定性也緊密相連，特別是與3號(hào)、7號(hào)及17號(hào)染色體的非整倍性密切相關(guān)，檢測(cè)以上遺傳學(xué)改變的標(biāo)準(zhǔn)方法為熒光原位雜交技術(shù)[1]。收集我院2013年9月—2014年3月采用FISH檢測(cè)的疑似尿路上皮癌的尿液標(biāo)本121例，應(yīng)用熒光標(biāo)記的3號(hào)、7號(hào)、17號(hào)染色體著絲粒探針及p16位點(diǎn)探針，采用熒光原位雜交技術(shù)（fluorescence in situ hybridization，F(xiàn)ISH）檢測(cè)尿液標(biāo)本中脫落細(xì)胞的染色體變異，并通過(guò)對(duì)比液基細(xì)胞學(xué)檢查結(jié)果，評(píng)估FISH篩選尿路上皮癌中的作用。例；診斷為高級(jí)別尿路上皮癌為6例。尿液脫落細(xì)胞學(xué)檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性39例（圖2），陰性82例。陽(yáng)性結(jié)果中組織病理學(xué)診斷為低級(jí)別尿路上皮癌為2例；診斷為高級(jí)別尿路上皮癌為33例。陰性結(jié)果中組織病理學(xué)診斷為低級(jí)別尿路上皮癌為17例；診斷為高級(jí)別尿路上皮癌為14例。兩種方法聯(lián)合檢測(cè)均為陽(yáng)性的是26例；只有一種方法結(jié)果為陽(yáng)性的是40例；兩種方法檢測(cè)均為陰性的是55例（表1）。

圖1 FISH診斷檢測(cè)尿液標(biāo)本結(jié)果陽(yáng)性

1 資料與方法

1.1 標(biāo)本收集 疑似尿路上皮癌尿液標(biāo)本121例，年齡32～72歲，平均49.7歲，男52例，女69例。標(biāo)本尿液脫落液基細(xì)胞標(biāo)本，300mL晨尿，全部離心3500r/min，5min，部分尿液沉渣用于液基薄片制作，部分用于FISH檢測(cè)。

1.2 方法 液基薄片制作由全自動(dòng)液基制片染色儀（BD公司）完成。由病理科醫(yī)生統(tǒng)一完成液基細(xì)胞學(xué)結(jié)果判讀。FISH檢測(cè)的探針和試劑盒（北京金菩嘉公司）。實(shí)驗(yàn)應(yīng)用3號(hào)、7號(hào)、17號(hào)染色體著絲粒探針和9號(hào)染色體p16基因位點(diǎn)特異性探針。FISH操作按照公司提供的操作手冊(cè)進(jìn)行。FISH結(jié)果由經(jīng)過(guò)專業(yè)培訓(xùn)的研究人員統(tǒng)一判讀。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS19.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，對(duì)尿液脫落細(xì)胞學(xué)診斷及FISH尿路上皮癌的敏感性和特異性采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

121例患者均有組織病理學(xué)診斷結(jié)果：陰性標(biāo)本55例；低級(jí)別尿路上皮癌19例；高級(jí)別尿路上皮癌47例。FISH檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性54例（圖1），陰性67例。陽(yáng)性結(jié)果中組織病理學(xué)診斷為低級(jí)別尿路上皮癌為13例；診斷為高級(jí)別尿路上皮癌為41例。陰性結(jié)果中組織病理學(xué)診斷為低級(jí)別尿路上皮癌為6

圖2 尿液脫落細(xì)胞學(xué)檢查顯示異性尿路上皮細(xì)胞

兩兩比較，F(xiàn)ISH在診斷尿路上皮癌敏感性、尤其是低級(jí)別尿路上皮癌敏感性方面優(yōu)于尿路脫落細(xì)胞學(xué)診斷（P＜0.001）。FISH診斷的陰性預(yù)測(cè)值也較尿路脫落細(xì)胞學(xué)診斷高（P＜0.001）。如果使用FISH和尿路脫落細(xì)胞學(xué)聯(lián)合診斷，當(dāng)其中一種方法結(jié)果為陽(yáng)性，另一種結(jié)果方法為陰性時(shí)，以組織學(xué)診斷結(jié)果為準(zhǔn)。這樣計(jì)算出聯(lián)合診斷的各項(xiàng)指標(biāo)的敏感性和特異性也高于單一方法的檢測(cè)（表2）。

表1 尿液標(biāo)本121例兩種檢測(cè)方法的診斷結(jié)果

表2 尿液標(biāo)本121例兩種檢測(cè)方法的臨床診斷價(jià)值比較

3 討 論

尿路上皮癌是世界第五大腫瘤，近80%的尿路上皮癌是非浸潤(rùn)性癌，而約20%的尿路上皮癌是浸潤(rùn)性癌。非浸潤(rùn)性的尿路上皮癌容易復(fù)發(fā)并進(jìn)展為浸潤(rùn)性尿路上皮癌[2]。因此非常有必要使用臨床檢測(cè)方法來(lái)監(jiān)測(cè)尿路上皮癌的復(fù)發(fā)和進(jìn)展。

病理組織學(xué)和尿路脫落細(xì)胞學(xué)是診斷和監(jiān)測(cè)尿路上皮癌的標(biāo)準(zhǔn)工具。病理組織學(xué)診斷雖然診斷的敏感性和特異性均較高，但是病理組織學(xué)是有創(chuàng)性檢測(cè)，不是所有患者都能接受。并且，病理組織學(xué)由于活檢的局限性容易漏診一些早期病變。雖然尿路脫落細(xì)胞學(xué)檢查有很高的特異性，并且是無(wú)創(chuàng)性的檢查，但是它的敏感性較低，尤其對(duì)低級(jí)別病變的腫瘤敏感性較低[3]。因此臨床研究者們急于尋找一種無(wú)創(chuàng)、高敏感性、高特異性的診斷或監(jiān)測(cè)尿路上皮癌的檢測(cè)方法。

有研究顯示：尿路上皮癌細(xì)胞常常有1號(hào)、3號(hào)、7號(hào)、9號(hào)、11號(hào)、17號(hào)染色體的非整倍體異常或者9號(hào)染色的部分或全部缺失[4-5]。FISH技術(shù)是用熒光標(biāo)記的DNA探針檢測(cè)腫瘤細(xì)胞基因或染色改變的方法。FISH技術(shù)在2000年得到發(fā)展，但是到了2005年才被批準(zhǔn)用于臨床。雖然很多研究結(jié)果支持這項(xiàng)技術(shù)，但是它依然不是臨床上醫(yī)生常規(guī)使用的技術(shù)。先前有報(bào)道FISH技術(shù)可以作為診斷尿路上皮癌的輔助技術(shù)[6-7]。然而，一些研究報(bào)道了FISH的敏感性和特異性均較低[8-9]。FISH技術(shù)是否可以診斷或監(jiān)測(cè)尿路上皮癌已經(jīng)成為研究的熱點(diǎn)。本研究中使用了四種探針進(jìn)行FISH檢測(cè)，它們分別針對(duì)3號(hào)、7號(hào)、17號(hào)染色體及9號(hào)染色體的P16區(qū)，并通過(guò)比較FISH技術(shù)診斷與尿路脫落細(xì)胞學(xué)診斷的敏感性、特異性、陰性預(yù)測(cè)值、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值來(lái)評(píng)價(jià)FISH技術(shù)在臨床使用中的價(jià)值。

本組實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示FISH診斷尿路上皮癌的敏感性為（81.82%）優(yōu)于尿路脫落細(xì)胞學(xué)診斷的敏感性（53.03%）。尤其是對(duì)低級(jí)別尿路上皮癌的診斷，F(xiàn)ISH診斷的敏感性（68.42%）優(yōu)于尿路脫落細(xì)胞學(xué)診斷的敏感性（10.53%）。而對(duì)于高級(jí)別尿路上皮癌的診斷，F(xiàn)ISH診斷的敏感性為（87.23%），與尿路脫落細(xì)胞學(xué)診斷的敏感性（70.21%）無(wú)明顯差異。FISH診斷的陰性預(yù)測(cè)值（96.49%）也較尿路脫落細(xì)胞學(xué)診斷陰性預(yù)測(cè)值（62.20%）高。FISH診斷的陽(yáng)性預(yù)測(cè)值（100.0%）與尿路脫落細(xì)胞學(xué)診斷陽(yáng)性預(yù)測(cè)值（89.74%）無(wú)明顯差異。FISH技術(shù)檢測(cè)對(duì)于高級(jí)別尿路上皮癌的敏感性（87.23%）要高于低級(jí)別尿路上皮癌敏感性（68.42%）。FISH在敏感性方面的結(jié)果與目前已有的研究報(bào)道接近[9]。當(dāng)檢測(cè)高級(jí)別尿路上皮癌時(shí)，聯(lián)合診斷時(shí)的敏感性（100.0%）優(yōu)于單獨(dú)使用一個(gè)診斷方法（87.23%，53.03%）。

綜上，F(xiàn)ISH技術(shù)是適用于尿路上皮癌患者的輔助診斷的技術(shù)。它具有無(wú)創(chuàng)、高敏感性、高特異性的特點(diǎn)，其中該檢測(cè)對(duì)于高級(jí)別尿路上皮癌的敏感度要高于低級(jí)別尿路上皮癌，在檢測(cè)低級(jí)別尿路上皮癌方面敏感性優(yōu)于尿路脫落細(xì)胞學(xué)診斷。熒光原位雜交技術(shù)和尿路脫落細(xì)胞學(xué)聯(lián)合診斷敏感性優(yōu)于單獨(dú)使用一個(gè)診斷方法。

由于實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的原因，我們的研究依然還有很多未能如意，比如未觀察FISH技術(shù)對(duì)遠(yuǎn)期尿路上皮癌患者腫瘤復(fù)發(fā)的診斷效能；也未觀察FISH技術(shù)對(duì)尿路上皮癌分期是否有幫助。這將是我們進(jìn)一步的研究方向。

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