人參皂苷水解產(chǎn)物DS-1227改善東莨菪堿致小鼠的學(xué)習(xí)記憶障礙

武宏偉，王克柱，馮 利，盧 聰，徐 攀，廖永紅，曲麗娜，李瑩輝，劉新民

（1.中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院藥用植物研究所，北京 100193；

2.中國(guó)航天員科研訓(xùn)練中心航天醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)與應(yīng)用國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京 100094）

人參皂苷水解產(chǎn)物DS-1227改善東莨菪堿致小鼠的學(xué)習(xí)記憶障礙

武宏偉1，王克柱1，馮 利1，盧 聰1，徐 攀1，廖永紅1，曲麗娜2，李瑩輝2，劉新民

（1.中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院藥用植物研究所，北京 100193；

2.中國(guó)航天員科研訓(xùn)練中心航天醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)與應(yīng)用國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京 100094）

目的研究人參皂苷水解產(chǎn)物DS-1227（Dammarane Sapogenins-1227）對(duì)東莨菪堿致小鼠學(xué)習(xí)記憶障礙的改善作用，為老年癡呆等疾病的藥物研究提供科學(xué)數(shù)據(jù)。方法 將60只ICR小鼠隨機(jī)分為空白對(duì)照組、模型組、陽(yáng)性對(duì)照組、DS-1227低、中、高劑量組共6組，每組10只。連續(xù)灌胃給藥2周后，檢測(cè)自主活動(dòng)，第15天開(kāi)始除空白對(duì)照組腹腔注射生理鹽水，其他各組均腹腔注射東莨菪堿（0.75 mg/kg），陽(yáng)性對(duì)照組在注射東莨菪堿5 min后另腹腔注射毒扁豆堿（0.3 mg/kg），給藥完成20 min后進(jìn)行物體認(rèn)知實(shí)驗(yàn)和Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)檢測(cè)動(dòng)物的學(xué)習(xí)記憶能力。結(jié)果 DS-1227對(duì)小鼠的自主活動(dòng)無(wú)顯著性影響。腹腔注射東莨菪堿后，小鼠的相對(duì)辨別指數(shù)降低，水迷宮定位航行實(shí)驗(yàn)中d1、d2、d3、d4和d5潛伏期均明顯延長(zhǎng)。DS-1227低、中、高劑量和給予M受體激動(dòng)劑毒扁豆堿均能不同程度增加?xùn)|莨菪堿致學(xué)習(xí)記憶障礙模型小鼠的相對(duì)辨別指數(shù)，縮短水迷宮定位航行潛伏期。結(jié)論 DS-1227有改善東莨菪堿致小鼠學(xué)習(xí)記憶障礙的作用。

DS-1227；東莨菪堿；學(xué)習(xí)記憶障礙

隨著老齡化社會(huì)的到來(lái)，阿爾茨海默?。ˋlzheimer’s disease，AD）的發(fā)病率逐年升高，嚴(yán)重威脅著人類(lèi)健康，給社會(huì)和家庭帶來(lái)沉重負(fù)擔(dān)。國(guó)內(nèi)外雖投入大量人力物力財(cái)力研究防治AD的藥物，但目前收效甚微，因此研究防治AD、改善學(xué)習(xí)記憶的藥物十分必要。AD是一種以進(jìn)行性認(rèn)知障礙和記憶力損害為主的中樞神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病［1］，早期主要表現(xiàn)為短時(shí)記憶損害、空間辨別能力障礙等。研究表明，AD患者認(rèn)知功能損傷與腦內(nèi)神經(jīng)遞質(zhì)乙酰膽堿（acetylcholine，Ach）水平下降密切相關(guān)，針對(duì)AD患者腦內(nèi)Ach水平下降這個(gè)特異性神經(jīng)化學(xué)變化，研究人員采用給予M膽堿受體阻斷劑東莨菪堿（scopolamine，SCOP），使腦內(nèi)Ach水平顯著下降，復(fù)制AD動(dòng)物模型，可穩(wěn)定誘導(dǎo)動(dòng)物的學(xué)習(xí)記憶障礙，該方法操作簡(jiǎn)便，是篩選防治AD藥物的較好動(dòng)物模型。

人參作為傳統(tǒng)中藥，是現(xiàn)代藥理研究最多和最充分的傳統(tǒng)中藥之一，長(zhǎng)期臨床實(shí)踐證明，人參有確定的益智作用，人參皂苷為人參的主要益智活性成分，人參皂苷對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)有多種調(diào)節(jié)作用，如抗抑郁、改善學(xué)習(xí)記憶障礙、鎮(zhèn)靜安神、興奮中樞等。人參皂苷不易被吸收，并且生物利用度較低［2-3］，然而人參皂苷去糖代謝后形成的苷元或次苷比皂苷本身更容易被機(jī)體吸收，而且活性增強(qiáng)，毒性降低［4-10］。因此，本研究采用東莨菪堿模型，通過(guò)動(dòng)物行為學(xué)對(duì)人參皂苷水解產(chǎn)物DS-1227改善學(xué)習(xí)記憶的作用進(jìn)行研究，為研制AD等的防治藥物提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及實(shí)驗(yàn)環(huán)境

60只SPF級(jí)雄性ICR小鼠，5～6周齡，體重（22 ±2）g，購(gòu)自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司，許可證號(hào)［SCXK（京）2012-0001］。實(shí)驗(yàn)在中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥用植物研究所進(jìn)行，飼養(yǎng)于本實(shí)驗(yàn)室的屏障環(huán)境［SYXK（京）2008-0019］，溫度（20～26）℃，12 h照明/12 h黑暗環(huán)境（8：00-20：00亮燈），飼養(yǎng)期間給予標(biāo)準(zhǔn)飼料及純凈水。本實(shí)驗(yàn)遵循實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理原則。

1.2 儀器與試劑

小鼠行為學(xué)檢測(cè)儀器包括自主活動(dòng)實(shí)驗(yàn)計(jì)算機(jī)圖像實(shí)時(shí)檢測(cè)分析處理系統(tǒng)、物體認(rèn)知檢測(cè)裝置、小鼠Morris水迷宮計(jì)算機(jī)自動(dòng)控制和圖像分析處理系統(tǒng)均由中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥用植物研究所和中國(guó)航天員科研訓(xùn)練中心聯(lián)合研發(fā)。

DS-1227，人參皂苷水解產(chǎn)物：原人參二醇［20（S）-aglycone protopanaxadiol，PPD］9.18％，原人參三醇 ［20（S）-aglycone protopanaxatriol，PPT］20.55％，人參皂苷Rh1（ginsenoside Rh1）18.8％，人參皂苷Rh2（ginsenoside Rh2）10.1％。由加拿大天馬藥業(yè)集團(tuán)惠贈(zèng)。東莨菪堿（Sigma公司產(chǎn)品，批號(hào)：4A96820）；毒扁豆堿（Sigma公司產(chǎn)品，批號(hào)：BCBF8289）

1.3 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

1.3.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組及給藥：ICR小鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)3 d后，隨機(jī)分為6組，每組10只，分組如下：空白對(duì)照組、模型組（東莨菪堿，0.75 mg/kg/d）、陽(yáng)性對(duì)照組（毒扁豆堿，0.3 mg/kg）、DS-1227低劑量組（25 mg/kg）、DS-1227中劑量組（50 mg/kg）、DS-1227高劑量組（100 mg/kg）?？瞻讓?duì)照組、模型組和陽(yáng)性對(duì)照組灌胃給予蒸餾水，灌胃體積均為0.2 mL/10 g體重，每天1次。行為學(xué)實(shí)驗(yàn)前連續(xù)灌胃給藥2周，于第14天檢測(cè)自主活動(dòng)，第15天開(kāi)始給予東莨菪堿造模并進(jìn)行物體認(rèn)知實(shí)驗(yàn)和水迷宮實(shí)驗(yàn)等行為學(xué)檢測(cè)。行為學(xué)檢測(cè)期間，每只動(dòng)物檢測(cè)前1 h給藥，給藥持續(xù)至行為學(xué)檢測(cè)完成。

行為學(xué)實(shí)驗(yàn)當(dāng)天，小鼠灌胃給藥40 min后，除對(duì)照組腹腔注射生理鹽水外，其余各組均腹腔注射東莨菪堿（0.75 mg/kg）。陽(yáng)性對(duì)照組在腹腔注射東莨菪堿5min后再腹腔注射毒扁豆堿（0.3 mg/kg）。腹腔注射東莨菪堿20 min后進(jìn)行行為學(xué)檢測(cè)。

1.3.2 自主活動(dòng)實(shí)驗(yàn)：采用王瓊等［11］研制的小鼠自主活動(dòng)實(shí)驗(yàn)計(jì)算機(jī)圖像實(shí)時(shí)檢測(cè)分析處理系統(tǒng)，將小鼠放入桶內(nèi)，設(shè)定實(shí)驗(yàn)參數(shù)后開(kāi)始測(cè)試。系統(tǒng)自動(dòng)記錄分析10 min動(dòng)物的自發(fā)活動(dòng)，如總路程、運(yùn)動(dòng)時(shí)間、靜止時(shí)間等。

1.3.3 新物體識(shí)別實(shí)驗(yàn)：利用宋廣青等［12］研制的物體認(rèn)知檢測(cè)裝置，參照王逸等［13］的實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)過(guò)程分為3個(gè)階段：適應(yīng)期、熟悉期和測(cè)試期。適應(yīng)期為3 d，每天將動(dòng)物依次放入沒(méi)有任何物體的實(shí)驗(yàn)箱內(nèi)，適應(yīng)環(huán)境10 min。第4天開(kāi)始熟悉期和測(cè)試期。熟悉期實(shí)驗(yàn)，將兩個(gè)完全相同的物體放入實(shí)驗(yàn)箱內(nèi)對(duì)稱(chēng)的位置處，此兩物體距離側(cè)箱壁、箱后壁的距離均為10 cm。記錄小鼠5 min內(nèi)對(duì)兩物體的總探索時(shí)間（s）。熟悉期后將動(dòng)物取出放入飼養(yǎng)籠，間隔20 min進(jìn)入測(cè)試期實(shí)驗(yàn)。測(cè)試期時(shí)，將其中一個(gè)熟悉期使用的物體換為另一個(gè)大小相近但形狀和顏色不同的新物體，分別記錄小鼠對(duì)新物體和已熟悉物體的探索時(shí)間（s），用相對(duì)辨別指數(shù)（relative discrimination index）來(lái)評(píng)價(jià)動(dòng)物的學(xué)習(xí)記憶能力。相對(duì)辨別指數(shù)的計(jì)算為（N-F）/（N+ F）×100％，其中 N（new）為新物體探索時(shí)間，F(xiàn)（familiar）為熟悉物體探索時(shí)間。

1.3.4 物體位置識(shí)別實(shí)驗(yàn)：實(shí)驗(yàn)方法和操作過(guò)程與新物體識(shí)別實(shí)驗(yàn)相似，只是在測(cè)試期時(shí)將熟悉期過(guò)程中的兩個(gè)完全相同物體中的一個(gè)移到另外新的位置，由原來(lái)兩物體相鄰變成相對(duì)，其他過(guò)程完全相同。

1.3.5 Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)：小鼠Morris水迷宮由一個(gè)不銹鋼噴塑圓柱形水池（直徑100 cm，高38 cm）和配有數(shù)碼攝像機(jī)的圖像實(shí)時(shí)采集分析系統(tǒng)組成。平臺(tái)直徑6 cm，高14 cm。按東西南北將水池劃分為4個(gè)象限（NE，SE，SW，NW），象限池壁圓弧中點(diǎn)為動(dòng)物入水點(diǎn)。向池中注水并用墨汁調(diào)黑，水溫控制在（25±2）℃。圖像采集系統(tǒng)記錄動(dòng)物游泳軌跡，用于后續(xù)指標(biāo)提取和分析。

該實(shí)驗(yàn)歷時(shí)5天，第1～5天：平臺(tái)固定于NE象限中心，水面下1.5 cm。實(shí)驗(yàn)室物品及人員位置固定作為小鼠空間參照物。每天訓(xùn)練2次，隨機(jī)選取兩個(gè)不同入水點(diǎn)（SE、SW、NW）將小鼠面向池壁放入水中。檢測(cè)時(shí)間90 s，小鼠在臺(tái)上停留超過(guò)2 s視為尋臺(tái)成功，每次測(cè)試前將小鼠放在臺(tái)上適應(yīng)10 s（前適應(yīng)），測(cè)試完畢無(wú)論尋臺(tái)是否成功均將其放在臺(tái)上適應(yīng)10 s（后適應(yīng)）。將小鼠入水到尋臺(tái)成功所需時(shí)間記作潛伏期，尋臺(tái)失敗潛伏期記90 s。記錄小鼠在90s內(nèi)的潛伏期。

1.3.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，各組間比較采用單因素方差分析。實(shí)驗(yàn)結(jié)果以均值±標(biāo)準(zhǔn)誤（±s）表示，顯著性水平設(shè)置為0.05。

2 結(jié)果

2.1 DS-1227對(duì)小鼠自主活動(dòng)的影響

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，與空白對(duì)照組比較，DS-1227各給藥組的總路程、運(yùn)動(dòng)時(shí)間、靜止時(shí)間、中央?yún)^(qū)運(yùn)動(dòng)路程比率、中央?yún)^(qū)運(yùn)動(dòng)時(shí)間比率、外周區(qū)運(yùn)動(dòng)路程比率和外周區(qū)運(yùn)動(dòng)時(shí)間比率等指標(biāo)均無(wú)顯著性差異。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 DS-1227對(duì)小鼠自主活動(dòng)的影響（n=10，±s）Tab.1 Effect of DS-1227 on locomotor activity in the mice of different groups（n=10，±s）

表1 DS-1227對(duì)小鼠自主活動(dòng)的影響（n=10，±s）Tab.1 Effect of DS-1227 on locomotor activity in the mice of different groups（n=10，±s）

組別Groups劑量Doses（mg/kg）總路程/cm Total distance of movement運(yùn)動(dòng)時(shí)間/s Total duration of movement靜止時(shí)間/s Resting time中央?yún)^(qū)運(yùn)動(dòng)路程比率Ratio of movement distance in central area中央?yún)^(qū)運(yùn)動(dòng)時(shí)間比率Ratio of movement time in central area外周區(qū)運(yùn)動(dòng)路程比率Ratio of movement distance in peripheral area外周區(qū)運(yùn)動(dòng)時(shí)間比率Ratio of movement time in peripheral area對(duì)照組Control - 4563±236 254.9±16.3 345.2±16.3 63.9±1.0 24.6±1.5 0.77±0.18 0.56±0.15 DS-1227 25 4747±169 267.7±9.7 332.4±9.7 61.5±0.8 24.6±1.1 0.76±0.18 0.58±0.14 DS-1227 50 4489±155 251.1±12.7 349.0±12.7 62.9±1.7 24.1±1.6 0.66±0.21 0.44±0.14 DS-1227 100 4754±274 260.6±17.4 339.5±17.4 63.6±1.1 24.8±1.5 0.81±0.21 0.62±0.17

2.2 DS-1227對(duì)東莨菪堿致學(xué)習(xí)記憶障礙小鼠物體辨別記憶能力的影響

表2實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，在熟悉期前20 min注射東莨菪堿，與空白對(duì)照組比較，模型組探索總時(shí)間沒(méi)有明顯差異；與模型組比較，各給藥組探索總時(shí)間沒(méi)有明顯差異。

圖1實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，與空白對(duì)照組比較，模型組小鼠相對(duì)辨別指數(shù)降低（P＜0.05）；與模型組比較，DS-1227低劑量和中劑量均可增加?xùn)|莨菪堿致學(xué)習(xí)記憶障礙小鼠相對(duì)辨別指數(shù)（P＜0.05），毒扁豆堿也增加?xùn)|莨菪堿致學(xué)習(xí)記憶障礙小鼠相對(duì)辨別指數(shù)，但與模型組相比差異無(wú)顯著性。

2.3 DS-1227對(duì)東莨菪堿致學(xué)習(xí)記憶障礙小鼠物體位置辨別記憶能力的影響

表2 DS-1227對(duì)東莨菪堿致學(xué)習(xí)記憶障礙小鼠探索總時(shí)間的影響（n=10，±s）Tab.2 Effects of DS-1227 on total exploration time of scopolamine-induced learning and memory impairment in the mice（n=10，±s）

表2 DS-1227對(duì)東莨菪堿致學(xué)習(xí)記憶障礙小鼠探索總時(shí)間的影響（n=10，±s）Tab.2 Effects of DS-1227 on total exploration time of scopolamine-induced learning and memory impairment in the mice（n=10，±s）

組別Groups 劑量Doses（mg/kg）探索總時(shí)間/s Total exploration time空白對(duì)照組Control - 55.42±5.74模型組Model 0.75 53.82±5.92陽(yáng)性對(duì)照組Positive control 0.3 48.33±9.31 DS-1227 25 42.78±6.64 DS-1227 50 54.10±6.91 DS-1227 100 60.70±7.77

圖1 DS-1227對(duì)東莨菪堿致學(xué)習(xí)記憶障礙小鼠物體辨別記憶能力的影響（n=10，±s）Note.*P＜0.05，compared with the control group.#P＜0.05，compared with the model group.Note：Compared with the control group，*P＜0.05；compared with the model group，#P＜0.05.Fig.1 Effects of DS-1227 on object discrimination recognition ability of the mice with scopolamine-induced learning and memory impairment（n=10，±s）

圖2 DS-1227對(duì)東莨菪堿致學(xué)習(xí)記憶障礙小鼠物體位置辨別記憶能力的影響（n=10，±s）Note.*P＜0.05，Compared with the control group.#P＜0.05，compared with the model group.Fig.2 Effects of DS-1227 on object location recognition ability of the mice with scopolamine-induced learning and memory impairment（n=10，±s）

圖2實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，與空白對(duì)照組比較，模型組小鼠相對(duì)辨別指數(shù)降低（P＜0.05）；與模型組比較，DS-1227高劑量可增加?xùn)|莨菪堿致學(xué)習(xí)記憶障礙小鼠相對(duì)辨別指數(shù)（P＜0.05），毒扁豆堿也增加?xùn)|莨菪堿致學(xué)習(xí)記憶障礙小鼠相對(duì)辨別指數(shù)，但與模型組相比差異無(wú)顯著性。

2.4 DS-1227對(duì)東莨菪堿致學(xué)習(xí)記憶障礙小鼠水迷宮定位航行潛伏期的影響

表3實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，與空白對(duì)照組比較，模型組小鼠定位航行Day1、Day2、Day3、Day4和Day5潛伏期均明顯延長(zhǎng)（P＜0.01）；與模型組比較，DS-1227低劑量組Day4和Day5定位航行潛伏期均縮短（P＜0.05），DS-1227中劑量組Day4定位航行潛伏期縮短（P＜0.05），毒扁豆堿在Day1、Day2、Day3和Day5也縮短?hào)|莨菪堿致學(xué)習(xí)記憶障礙小鼠定位航行潛伏期（P＜0.05）。

3 討論

乙酰膽堿廣泛分布在腦內(nèi)，是參與學(xué)習(xí)記憶的重要神經(jīng)遞質(zhì)，中樞膽堿能系統(tǒng)可調(diào)節(jié)多種學(xué)習(xí)記憶能力［14］。研究表明，老年癡呆患者腦內(nèi)Ach合成分泌減少，其合成酶活性下降，且與癡呆嚴(yán)重程度密切相關(guān)［15-17］。SCOP為M受體阻斷劑，可以拮抗Ach與M受體的結(jié)合，阻斷大腦信息的傳遞，干擾短期記憶能力，引起記憶獲得障礙［18-19］。因此，在癡呆藥物的篩選和評(píng)價(jià)中得到了廣泛應(yīng)用。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)，ICR小鼠腹腔注射 SCOP 0.375、0.75和1.5 mg/kg均能顯著增加ICR小鼠水迷宮定位航行潛伏期，誘導(dǎo)小鼠空間學(xué)習(xí)記憶能力障礙，而在物體位置識(shí)別實(shí)驗(yàn)中，只有0.75和1.5 mg/kg兩個(gè)劑量顯著降低了ICR小鼠的辨別指數(shù)，導(dǎo)致小鼠短時(shí)空間記憶能力障礙。因此，本實(shí)驗(yàn)研究采用ICR小鼠腹腔注射SCOP 0.75 mg/kg復(fù)制小鼠學(xué)習(xí)記憶障礙模型。

自主活動(dòng)實(shí)驗(yàn)用于觀察動(dòng)物一定時(shí)間內(nèi)在特定陌生環(huán)境中的自主活動(dòng)行為。動(dòng)物由于對(duì)陌生環(huán)境的恐懼，主要在周邊區(qū)域活動(dòng)，在中央?yún)^(qū)域活動(dòng)較少，表現(xiàn)出焦慮行為。同時(shí)，動(dòng)物對(duì)陌生環(huán)境的好奇，又產(chǎn)生在中央?yún)^(qū)域活動(dòng)的動(dòng)機(jī)，顯示其探究特性。本研究結(jié)果顯示，與空白對(duì)照組比較，DS-1227各給藥組的運(yùn)動(dòng)總路程、運(yùn)動(dòng)時(shí)間、靜止時(shí)間、中央?yún)^(qū)運(yùn)動(dòng)路程比率、中央?yún)^(qū)運(yùn)動(dòng)時(shí)間比率、外周區(qū)運(yùn)動(dòng)路程比率和外周區(qū)運(yùn)動(dòng)時(shí)間比率等指標(biāo)均無(wú)顯著性差異，說(shuō)明DS-1227對(duì)小鼠自主活動(dòng)并沒(méi)有影響。

新物體識(shí)別試驗(yàn)顯示，DS-1227給藥組能改善對(duì)東莨菪堿致學(xué)習(xí)記憶障礙小鼠的相對(duì)辨別指數(shù)。新物體識(shí)別實(shí)驗(yàn)是一種應(yīng)用較為廣泛的認(rèn)知行為學(xué)檢測(cè)方法，用于檢測(cè)嚙齒類(lèi)動(dòng)物非空間、短期對(duì)物體的辨別記憶能力。本研究結(jié)果顯示，與對(duì)照組比較，模型組探索總時(shí)間沒(méi)有明顯差異，說(shuō)明東莨菪堿對(duì)ICR小鼠的運(yùn)動(dòng)能力沒(méi)有影響。與空白對(duì)照組比較，東莨菪堿所致學(xué)習(xí)記憶障礙小鼠相對(duì)辨別指數(shù)降低（P＜0.05）；與模型組比較，DS-1227低劑量和中劑量均可增加?xùn)|莨菪堿所致學(xué)習(xí)記憶障礙小鼠相對(duì)辨別指數(shù)（P＜0.05），毒扁豆堿也增加?xùn)|莨菪堿致學(xué)習(xí)記憶障礙小鼠相對(duì)辨別指數(shù)，但無(wú)顯著性差異。

表3 DS-1227對(duì)東莨菪堿致學(xué)習(xí)記憶障礙小鼠定位航行潛伏期的影響（n=10，±s）Tab.3 Effects of DS-1227 on the latency of water maze（place navigation）test in the mice with scopolamine-induced learning and memory impairment（n=10，±s）

表3 DS-1227對(duì)東莨菪堿致學(xué)習(xí)記憶障礙小鼠定位航行潛伏期的影響（n=10，±s）Tab.3 Effects of DS-1227 on the latency of water maze（place navigation）test in the mice with scopolamine-induced learning and memory impairment（n=10，±s）

注：與對(duì)照組比較，＊＊P＜0.01；與模型組比較，#P＜0.05，##P＜0.01。Note.＊＊P＜0.01，Compared with the control group.##P＜0.01，Compared with the model group.

組別Groups劑量Doses（mg/kg）時(shí)間（Days）Day 1 Day 2 Day 3 Day 4 Day 5空白對(duì)照組Control - 68.54±5.99 56.42±7.12 42.81±5.71 42.02±6.80 43.47±7.18模型組Model 0.75 89.58±0.02＊＊ 82.67±4.38＊＊ 71.22±6.40＊＊ 70.44±7.91＊＊ 77.40±4.98＊＊陽(yáng)性對(duì)照組Positive control 0.3 75.37±6.92# 48.44±8.20## 50.22±9.04# 65.35±10.06 53.46±3.69# DS-1227 25 81.33±4.57 73.20±8.21 75.25±5.85 44.19±9.60# 49.65±9.61## DS-1227 50 83.36±3.46 77.70±5.36 70.76±8.25 47.86±8.01# 59.22±3.34 DS-1227 100 79.40±6.49 77.78±7.92 71.70±6.80 61.52±6.78 48.85±11.62

物體位置識(shí)別實(shí)驗(yàn)顯示，高劑量DS-1227可增加?xùn)|莨菪堿致學(xué)習(xí)記憶障礙小鼠相對(duì)辨別指數(shù)。物體位置識(shí)別實(shí)驗(yàn)是在新物體識(shí)別實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上建立的一種方法，主要用于檢測(cè)嚙齒類(lèi)動(dòng)物對(duì)物體位置的辨別記憶能力。本研究結(jié)果顯示，與空白對(duì)照組比較，模型組小鼠相對(duì)辨別指數(shù)降低（P＜0.05）；與模型組比較，DS-1227高劑量可增加?xùn)|莨菪堿所致學(xué)習(xí)記憶障礙小鼠相對(duì)辨別指數(shù)（P＜0.05），毒扁豆堿也增加?xùn)|莨菪堿所致學(xué)習(xí)記憶障礙小鼠相對(duì)辨別指數(shù)，但無(wú)顯著性差異。

Morris水迷宮試驗(yàn)結(jié)果表明，DS-1227低、中劑量可使東莨菪堿致學(xué)習(xí)記憶障礙小鼠定位航行潛伏期顯著性縮短。Morris水迷宮主要用于檢測(cè)東莨菪堿對(duì)小鼠海馬依賴(lài)性空間學(xué)習(xí)記憶能力的影響。結(jié)果顯示東莨菪堿致學(xué)習(xí)記憶障礙小鼠定位航行Day1、Day2、Day3、Day4和Day5潛伏期與空白對(duì)照組比較均明顯增加（P＜0.01）；與模型組比較，DS-1227低劑量組和DS-1227中劑量組的定位航行潛伏期顯著性縮短（P＜0.05，P＜0.05），毒扁豆堿在Day1、Day2、Day3和Day5也縮短?hào)|莨菪堿致學(xué)習(xí)記憶障礙小鼠定位航行潛伏期（P＜0.05）。

以上結(jié)果表明，DS-1227口服給藥可以改善東莨菪堿致小鼠的學(xué)習(xí)記憶障礙，是開(kāi)發(fā)防治AD的有希望的藥物。

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Improving effect of the ginsenoside hydrolysis product DS-1227 on scopolamine-induced learning and memory impairment in mice

WU Hong-wei1，WANG Ke-zhu1，F(xiàn)ENG Li1，LU Cong1，XU Pan1，LIAO Yong-hong1，QU Li-na2，LI Ying-hui2，LIU Xin-min1
（1.Institute of Medicinal Plant Development，Chinese Academy of Medical Sciences＆Peking Union Medical College，Beijing 100193，China；2.China Astronaut Research and Training Center，State Key Lab of Space Medicine Fundamentals and Application，Beijing 100094）

Objective The aim of this experiment was to study the improving effects of a ginsenoside hydrolysis product DS-1227 on scopolamine-induced learning and memory impairment in mice.Methods Sixty healthy 5-6-week old male ICR mice（body weight 22±2 g）were randomly divided into control group，model group，three DS-1227 groups（25mg/kg，50 mg/kg，100 mg/kg），and positive control group（0.3 mg/kg）.Fourteen days after oral administration of DS-1227，an open-field test was conduct to determine the mouse locomotor activity.Fifteen days after oral administration of DS-1227，all experimental animals were intraperitoneally administered scopolamine（0.75 mg/kg）and the mice of control group

the same volume of saline.In addition to scopolamine，the mice of positive control group received intraperitoneal injection of physostigmine in a dose of 0.3 mg/kg.Twenty minutes after completion of all the drug administration，object recognition test and Morris water maze test were conducted to evaluate the learning and memory abilities of the mice.Results DS-1227 had no significant effect on locomotor activity of the mice.Scopolamine obviously decreased the discrimination indexes in object recognition test，and prolonged the escape latency of water maze place navigation test.While 25 mg/kg，50 mg/kg，100 mg/kg of DS-1227 increased the discrimination indexes and decreased the escape latency of place navigation in the mice.Conclusion DS-1227 can improve the learning and memory impairment induced by scopolamine in mice.

Ginsenoside hydrolysis product DS-1227；Scopolamine；Learning and memory impairment；Mice

R33

A

1671-7856（2015）04-0027-06

10.3969.j.issn.1671.7856.2015.004.006

重大新藥創(chuàng)制（編號(hào)：2012ZX09J12110-04C）；國(guó)際科技合作專(zhuān)項(xiàng)（編號(hào)：2011DFA32730）；全軍醫(yī)學(xué)科技“十二五”科研項(xiàng)目（編號(hào)：BWS11J052）。

武宏偉（1979-），女，研究方向：中藥藥理。E-mail：wuhongwei-2004@163.com。

劉新民（1962-），男，研究方向：神經(jīng)藥理，E-mail：liuxinmin@hotmail.com。

2014-12-29