兩種不同試劑對SD大鼠血凝四項檢測結(jié)果的比對

高艷新,朱玉潔,李慕芳,楊照新,符 健

（1.承德市中醫(yī)院檢驗科，河北承德 067000；2.海南醫(yī)學(xué)院海南省藥物安評中心，?？?571199）

兩種不同試劑對SD大鼠血凝四項檢測結(jié)果的比對

高艷新1,朱玉潔2,李慕芳2,楊照新2,符 健2

（1.承德市中醫(yī)院檢驗科，河北承德 067000；2.海南醫(yī)學(xué)院海南省藥物安評中心，?？?571199）

目的 比對進口和國產(chǎn)兩種不同廠家品牌的血凝試劑對實驗動物SD大鼠和人血凝四項（PT、APTT、TT、FIB）檢測結(jié)果，觀察它們之間是否存在差異。方法 選用SPF級SD大鼠及人血凝標本，分別用國產(chǎn)和進口兩種不同品牌血凝試劑檢測PT、APTT、TT及FIB血凝四項指標。結(jié)果 兩種不同品牌血凝試劑對大鼠血凝四項指標檢測結(jié)果均存在差異，大鼠血凝指標PT、APTT、FIB國產(chǎn)試劑檢測結(jié)果高于進口試劑（P＜0.05）；大鼠血凝指標TT進口試劑檢測結(jié)果高于國產(chǎn)試劑（P＜0.05）；而人血凝標本未見明顯差異。結(jié)論 不同廠家品牌的血凝試劑檢測SD大鼠血凝四項（PT、APTT、TT、FIB）結(jié)果可存在差異，各實驗室應(yīng)根據(jù)需求建立相應(yīng)的背景數(shù)據(jù)。

凝血酶原時間；活化部分凝血酶時間；凝血酶時間；纖維蛋白原

抗凝和止血藥物的藥效學(xué)及毒理學(xué)研究往往需要檢測凝血酶原時間（PT）、活化部分凝血酶時間（APTT）、凝血酶時間（TT）及纖維蛋白原（FIB）等4項凝血實驗，它們不僅僅是出血和血栓性疾病的常規(guī)檢測項目，也是藥物篩選的重要試驗。檢測實驗動物血凝四項除可監(jiān)測抗凝藥物和止血劑的療效，也能觀察藥物的毒性反應(yīng)。因此在醫(yī)學(xué)實驗研究中，常需要觀察實驗動物的上述指標，但不同品牌的血凝試劑對實驗動物血凝四項檢測結(jié)果是否存在影響鮮有報道。本研究采用兩種不同品牌的血凝試劑對實驗動物SD大鼠及人的血凝四項指標進行檢測，比對它們之間是否存在差異。

1 材料和方法

1.1 實驗動物

SPF級SD大鼠36只購自湖南斯萊克景達實驗動物有限公司【SCXK（湘）2011-0003】，雌雄各半，體重200 g左右，6～7周齡。

1.2 人血標本

健康成年36人，體檢結(jié)果肝腎未見明顯異常，無明顯血液性疾病，年齡在24～42歲之間，男女各半，來源于海南省中醫(yī)院體檢中心志愿者。

1.3 主要試劑來源

國產(chǎn)某品牌血凝四項試劑，PT試劑盒批號50020801；APTT試劑盒批號2010098；TT試劑盒批號Y2020132；FIB試劑盒批號132050。進口某品牌血凝四項試劑，PT試劑盒批號545534；APTT試劑盒批號547177；TT試劑盒批號43154；FIB試劑盒批號538070。

1.4 主要儀器

SYSMEX CA-50型自動血液凝固分析儀；EPPENDORF 5810型離心機。

1.5 樣本采集方法

SD大鼠采用3％戊巴比妥鈉腹腔麻醉，經(jīng)腹主動脈精確采10％枸櫞酸鈉抗凝血標本2 mL，人血凝標本來自外周靜脈10％枸櫞酸鈉抗凝血，輕輕顛倒混勻，3000 r/min離心10 min，收集上層血漿待檢。

1.6 檢測方法

血凝指標PT、APTT及TT均采用凝固法，F(xiàn)IB采用Clauss法。

1.7 采用SPSS15.0對結(jié)果進行單因素方差分析，數(shù)據(jù)以均數(shù)±標準差（±s﹞表示。

2 結(jié)果

2.1 兩種不同血凝試劑對SD大鼠及人血凝PT檢測結(jié)果的比較

表1結(jié)果顯示：大鼠血凝指標PT兩種不同品牌試劑的檢測結(jié)果存在差異，國產(chǎn)試劑檢測結(jié)果高于進口試劑（P ＜0.05），人血凝指標 PT未見明顯差異。

2.2 兩種不同血凝試劑對 SD大鼠及人血凝APTT檢測結(jié)果的比較

表2結(jié)果顯示：大鼠血凝指標APTT兩種不同品牌試劑的檢測結(jié)果存在差異，國產(chǎn)試劑檢測結(jié)果高于進口試劑（P＜0.05），人血凝指標APTT未見明顯差異。

2.3 兩種不同血凝試劑對SD大鼠及人血凝TT檢測結(jié)果的比較

表3結(jié)果顯示：大鼠血凝指標TT兩種不同品牌試劑的檢測結(jié)果存在差異，進口試劑檢測結(jié)果高于國產(chǎn)試劑（P＜0.05），人血凝指標 TT未見明顯差異。

2.4 兩種不同血凝試劑對SD大鼠及人血凝FIB檢測結(jié)果的比較

表4結(jié)果顯示：大鼠血凝指標FIB兩種不同品牌試劑的檢測結(jié)果存在差異，國產(chǎn)試劑檢測結(jié)果高于進口試劑（P＜0.05），人血凝指標FIB未見明顯差異。

表1 各組PT檢測結(jié)果Tab.1 The results of PT at various groups

表2 各組APTT檢測結(jié)果Tab.2 The results of APTT at various groups

表3 各組TT檢測結(jié)果Tab.3 The results of TT at various groups

表4 各組FIB檢測結(jié)果Tab.4 The results of FIB at various groups

3 討論

凝血四項（PT、APTT、TT、FIB）檢測對診斷凝血系統(tǒng)異常的血液性疾病具有很大的意義，它不僅用于出凝血異常疾病的篩選與診斷，對抗凝藥物治療效果的監(jiān)測也起著重要作用。尤其是動物實驗的抗凝和止血藥物的藥效學(xué)及毒理學(xué)研究都需要檢測PT、APTT、TT、FIB等4項凝血實驗，除可監(jiān)測抗凝藥物和止血劑的療效，也能觀察藥物的毒性反應(yīng)。

由于血凝測定受多種因素的影響，例如儀器精度，標本狀況，環(huán)境溫度，試劑質(zhì)量等等，尤其是試劑質(zhì)量，因此血凝檢測臨床標準化問題也日益突出。目前大多數(shù)醫(yī)院所用的血凝分析儀的試劑大多是開放的，可根據(jù)自己的需求選擇不同廠家的試劑。但應(yīng)用不同廠家的血凝試劑，檢測同一樣本結(jié)果未必全部相同，尤其是實驗動物血凝標本，因為目前所有血凝試劑均是人臨床檢測試劑，并非實驗動物專用試劑。

試劑是影響血凝比對試驗的關(guān)鍵，本研究結(jié)果表明，國產(chǎn)和進口血凝試劑對SD大鼠PT、APTT、TT、FIB四項指標檢測結(jié)果均存在差異，其中國產(chǎn)試劑TT檢測結(jié)果小于進口試劑，其余PT、APTT、FIB三項指標國產(chǎn)試劑均大于進口試劑（P ＜0.05）。這說明不同品牌的血凝試劑對SD大鼠血凝四項檢測結(jié)果可存在差異，而這種差異在人血標本并不明顯。因此，一個實驗室在進行同類實驗動物血凝檢測時，盡量使用同一廠家的凝血試劑來做凝血實驗。造成這種差異的原因可能是多方面的，首先品牌不同的試劑，制備標準不盡相同，并且所有血凝試劑均是人臨床檢測試劑，并非實驗動物專用試劑。因此這些人臨床檢測試劑在檢測人血標本時差異［1]并不明顯，而檢測大鼠血凝指標就可能會出現(xiàn)差異。其次有文獻報道PT檢測結(jié)果與促凝血酶原激酶和鈣離子的活性和含量都是相關(guān)聯(lián)的［2]，來源不同、制備標準不同的促凝血酶原激酶的活性會存在差異。鈣離子做為啟動劑，其濃度將直接影響著各凝血因子的一系列酶促反應(yīng)。因此不同凝血試劑的促凝血酶原激酶的活性和鈣離子濃度不同，可導(dǎo)致PT測定值有不同程度的差異［3-4]。其次實驗動物 SD大鼠凝血系統(tǒng)可能與人類不盡相同［5-6]，應(yīng)用人凝血試劑檢測大鼠凝血四項，部分方法和標準未必完全適用。因此各實驗室應(yīng)根據(jù)需求建立相應(yīng)的背景數(shù)據(jù)及相應(yīng)的實驗條件。

［1] 陳莉.兩種不同試劑對血凝四項檢測結(jié)果影響探討［J].檢驗醫(yī)學(xué)與臨床，2011，8（8）：928-931.

［2] 熬必蓉，周全昌，李坤等.各種不同凝血活酶試劑測定凝血酶原時間的研究［J].血栓與止血，2009，12（3）：129-131.

［3] 沈潔瓊.不同試劑對凝血酶原實驗的影響［J].臨床醫(yī)學(xué)工程，2011，11（18）：1718-1719.

［4] 季明德，王學(xué)燕，黃禮兵.不同批號凝血活酶試劑對PT、INR質(zhì)控圖的影響及處理對策［J].血栓與止血，2008，14（6）：281 -283.

［5] Yoshinaka Urasoko，Xi Jun He，et al.Changes in Blood Parameters and the Expression of Coagulation-Related Genes in Lactating Sprague– Dawley Rats［J].J Am Assoc Lab Anim Sci.2012，51（2）：144–149.

［6] Yoshinaka Urasoko，Xi Jun He，Tomonori Ebata，et al.Changes in Blood Parameters and Coagulation-Related Gene Expression in Pregnant Rats［J].JAm Assoc Lab Anim Sci.2009，48（3）：272–278.

Com parison of coagulation data measured w ith domestic produced and im ported coagulation testing solutions on SD rat

GAO Yan-xin1，ZHU Yu-jie2，LIMu-fang2，YANG Zhao-xin2，F(xiàn)U Jian2
（1.clinical laboratory，Chengde City Hospital of traditional Chinese Medicine，Hebei Chengde 067000，China；
2.Research Center for Drug Safety Evaluation，Hainan Medical College，Haikou 571199，China）

Objective To compare coagulation data measured with domestic produced and imported coagulation testing solutions on SD rat and human by testing prothrombin time（PT），activated partial thromboplastin time（APTT），thrombin time（TT），fibrinogen（FIB）.M ethods Blood samples were obtained from SPF SD rat and human.Domestic produced and imported coagulation testing solutionswere applied to test PT，APTT，TT，and FIB.Results Compared to rat data measured with imported coagulation testing solution，data measured with domestic produced coagulation testing solution of PT，APTT，F(xiàn)IB was significantly higher（P＜0.05），while，data of TT was statistically lower（P＜0.05），and there was no obvious difference in human blood coagulation.Conclusion The datameasured with different coagulation testing solution varies on SD rat，so the laboratories are required to establish reference data according to different products.

Prothrombin time；Activated partial thromboplastin time；Thrombin time（TT）；Fibrinogen

R-332

A

1671-7856（2015﹞10-0021-03

10.3969.j.issn.1671.7856.2015.010.005

海南省重大科技專項項目（ZDZX2013003）。

高艷新（1976-），女，主管檢驗師，學(xué)士，主要從事臨床檢驗數(shù)據(jù)分析與動物建模。E-mail：568659214@qq.com。

符健，男，教授，從事藥物安全性評價研究工作。Email：168494512@qq.com。

﹞2015-08-18

研究報告