當(dāng)歸補(bǔ)血湯對輻射損傷小鼠的防護(hù)作用

馮 璟,于遠(yuǎn)望

（1.陜西中醫(yī)藥大學(xué)醫(yī)學(xué)技術(shù)學(xué)院，陜西咸陽 712046；

2.陜西中醫(yī)藥大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，陜西咸陽712046）

當(dāng)歸補(bǔ)血湯對輻射損傷小鼠的防護(hù)作用

馮 璟1,于遠(yuǎn)望2

（1.陜西中醫(yī)藥大學(xué)醫(yī)學(xué)技術(shù)學(xué)院，陜西咸陽 712046；

2.陜西中醫(yī)藥大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，陜西咸陽712046）

目的 觀察當(dāng)歸補(bǔ)血湯對60C0-γ射線輻照小鼠的防護(hù)作用。方法 將實(shí)驗(yàn)小鼠隨機(jī)分為5組（正常對照組、模型組、當(dāng)歸補(bǔ)血湯低、中、高劑量組），采用60C0-γ放射源照射除正常對照組外的各組小鼠，建立輻射損傷模型，測定各組小鼠外周血中性粒細(xì)胞數(shù)（NEUT）、骨髓有核細(xì)胞數(shù)（BMC）、血清超氧化物歧化酶（SOD）活性及血清丙二醛（MDA）含量。結(jié)果 輻射損傷小鼠的NEUT、BMC及SOD活性均明顯降低（P＜0.01），MDA含量增高（P＜0.01）。當(dāng)歸補(bǔ)血湯可升高輻射損傷后小鼠NEUT、BMC及SOD活性，降低MDA含量，且當(dāng)歸補(bǔ)血湯高劑量組對輻射損傷小鼠的保護(hù)作用更好（P＜0.01）。結(jié)論 當(dāng)歸補(bǔ)血湯對輻射小鼠的電離損傷有保護(hù)作用，且與劑量相關(guān)。

當(dāng)歸補(bǔ)血湯；輻射損傷；防護(hù)作用

金元時(shí)代李東垣創(chuàng)造的當(dāng)歸補(bǔ)血湯是著名的補(bǔ)血益氣良方，黃芪和當(dāng)歸按照5：1的比例組成，具有較好的益氣補(bǔ)血功效。研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)歸補(bǔ)血湯具有促進(jìn)造血、調(diào)節(jié)免疫、提高自由基清除水平，增強(qiáng)機(jī)體抵抗力等生物學(xué)活性［1]。本研究觀察了當(dāng)歸補(bǔ)血湯對輻射損傷小鼠NEUT、BMC、SOD活性及MDA含量的影響，探討其作用機(jī)制，為廣泛推廣使用當(dāng)歸補(bǔ)血湯提供有力的理論依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

健康雄性昆明種小鼠，SPF級，6 ～8周齡，體重18～22 g，由西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供【SCXK（陜）2013-001】。小鼠飼養(yǎng)環(huán)境為陜西中醫(yī)藥大學(xué)藥理實(shí)驗(yàn)室【SYXK（陜）2007-006】，按實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用的3R原則給予人道關(guān)懷。

1.2 儀器與材料

當(dāng)歸補(bǔ)血湯（自行煎制，將黃芪和當(dāng)歸按照5：1的比例［2]煎制為濃度3.6g/mL，此為高劑量濃度，用生理鹽水配制低劑量濃度0.9 g/mL和中劑量濃度1.8g/mL）。60C0-γ射線輻射源（第四軍醫(yī)大學(xué)輻照中心）；BC-2300全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀（深圳邁瑞生物醫(yī)療股份有限公司）；E220光學(xué)生物顯微鏡（Olympus公司）；SOD測試盒、MDA測試盒（南京建成生物工程研究所）、21R型高速冷凍離心機(jī)（美國Beckman公司）；UV3600型紫外分光光度計(jì)（日本島津公司）。

1.3 方法

1.3.1 動(dòng)物分組及給藥方式：將實(shí)驗(yàn)小鼠隨機(jī)分為5組，分別為正常對照組、模型組、當(dāng)歸補(bǔ)血湯低劑量組、當(dāng)歸補(bǔ)血湯中劑量組和當(dāng)歸補(bǔ)血湯高劑量組，每組10只。正常對照組與模型組在照射前、后均給予生理鹽水灌胃，其它各給藥組在照射前、后給予相應(yīng)濃度當(dāng)歸補(bǔ)血湯灌胃。灌胃給藥容量為0.1 mL/10 g，每日一次，照射前連續(xù)給藥10 d，照射后以同樣方法繼續(xù)給藥14 d。

1.3.2 造模方法：60C0-γ射線全身單次照射5 Gy，劑量率218.63 cGy/min，照射時(shí)間2 min 17 s，源皮距80 cm。

1.4 觀察指標(biāo)

1.4.1 外周血中性粒細(xì)胞數(shù)（NEUT）檢測：分別于照射前、照射當(dāng)天及照射后第5、10天，各取小鼠尾血一次，每次約20μL，滴入血細(xì)胞稀釋液內(nèi)混勻，用全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀測定小鼠外周血中性粒細(xì)胞數(shù)。

1.4.2 骨髓有核細(xì)胞計(jì)數(shù)（BMC）：輻射后第14天頸椎脫臼處死小鼠并解剖，取其右側(cè)股骨，除凈肌肉組織，用6號針頭刺穿股骨末端，以2 mL生理鹽水沖洗骨髓至股骨為白色，將沖出的骨髓液充分混勻，靜置2 min，再次混勻后取少許滴入計(jì)數(shù)板的計(jì)數(shù)池內(nèi)，在顯微鏡下計(jì)數(shù)4個(gè)大格細(xì)胞數(shù)（N），依公式計(jì)算每毫升有核細(xì)胞數(shù)（C）：C=N×2.5×105/mL。

1.4.3 血清超氧化物歧化酶（SOD）測定：輻射后第14天取小鼠眼球血，2500 r/min離心15 min，分離血清，用試劑盒檢測SOD含量。

1.4.4 血清丙二醛（MDA）含量測定：輻射后第14天取小鼠眼球血，2500 r/min離心15 min，分離血清，用試劑盒測定MDA含量。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

所有數(shù)據(jù)采用SPSS16.0軟件包分析，以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，各組間比較采用單因素方差分析，P ＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 當(dāng)歸補(bǔ)血湯對小鼠外周血NEUT的影響

輻射前5組小鼠外周血中性粒細(xì)胞數(shù)無明顯差異（P ＞0.05）。輻射當(dāng)天，與正常對照組比較，模型組NEUT與其有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05），當(dāng)歸補(bǔ)血湯各組NEUT均有所降低，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。在輻射后第5天，各受輻射組小鼠NEUT均與正常對照組有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異 （P ＜0.01），當(dāng)歸補(bǔ)血湯高劑量組與模型組比較有顯著差異（P ＜0.01）。在輻射后第10天，與模型組比較，當(dāng)歸補(bǔ)血湯中劑量與其有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05），高劑量組差異明顯（P ＜0.01）（表1）。

2.2 當(dāng)歸補(bǔ)血湯對小鼠BMC的影響

與正常對照組比較，受輻射各組BMC與其均有顯著差異（P ＜0.01）；與模型組比較，當(dāng)歸補(bǔ)血湯高劑量組與其有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P ＜0.01）（表2）。

2.3 當(dāng)歸補(bǔ)血湯對小鼠血清SOD含量的影響

與正常對照組比較，各受照射組小鼠血清SOD含量均明顯減低（P ＜0.01）。與模型組比較，各給藥組SOD含量均有所增加，當(dāng)歸補(bǔ)血湯低劑量組與其有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P ＜0.05），高、中劑量組與其有顯著差異（P ＜0.01）（表3）。

2.4 當(dāng)歸補(bǔ)血湯對小鼠血清MDA含量的影響

與正常對照組比較，各組小鼠血清MDA含量均明顯增高（P ＜0.01）。與模型組比較，各給藥組MDA含量均顯著降低（P＜0.01），且以當(dāng)歸補(bǔ)血湯高劑量組MDA降低最為明顯（表3）。

表1 當(dāng)歸補(bǔ)血湯對小鼠外周血中性粒細(xì)胞數(shù)的影響（n=10，×109/L）Tab.1 Effect of Danggui Buxue decoction on mice peripheral blood neutrophil count（n=10，×109/L）

表2 當(dāng)歸補(bǔ)血湯對小鼠骨髓有核細(xì)胞計(jì)數(shù)的影響（×106/mL）Tab.2 Effect of Danggui Buxue decoction on the content of BMC（×106/mL）

表3 當(dāng)歸補(bǔ)血湯對小鼠血清SOD、MDA含量的影響Tab.3 Effect of Danggui Buxue decoction on serum SOD，MDA levels inmice

3 討論

當(dāng)歸補(bǔ)血湯中的黃芪與當(dāng)歸在配伍時(shí)黃芪為君，當(dāng)歸為臣，二者均具有補(bǔ)氣補(bǔ)血活血的作用，而黃芪多糖與當(dāng)歸多糖又是其重要的有效成分。有研究表明，多糖是多種中草藥的主要活性物質(zhì)之一，具有抗細(xì)菌、抗病毒、抗腫瘤、抗輻射、抗衰老等功效［3]。本實(shí)驗(yàn)主要觀察當(dāng)歸補(bǔ)血湯的抗輻射作用并探討其機(jī)制。

機(jī)體受輻射后，造血系統(tǒng)最早出現(xiàn)形態(tài)變化，其主要原因是造血細(xì)胞分化程度低，對輻射損傷敏感。電離輻射可抑制或破壞造血干細(xì)胞和各系祖細(xì)胞的增殖能力［4-5]，因此外周血白細(xì)胞計(jì)數(shù)明顯減少［6]。中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)是白細(xì)胞分類中的重要一項(xiàng)，在環(huán)境醫(yī)學(xué)研究中是反應(yīng)白細(xì)胞分類變化的重要指標(biāo)之一。骨髓造血功能的損傷亦會(huì)影響中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)的變化。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在小鼠接受輻射當(dāng)天，當(dāng)歸補(bǔ)血湯各劑量組NEUT均降低，但與正常對照組無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05），說明在輻射前使用當(dāng)歸補(bǔ)血湯，可對早期輻射損傷引起的NEUT降低起一定程度的保護(hù)作用。在輻射后第5天，各受照射組NEUT均明顯降低（P＜0.01），與模型組比較，當(dāng)歸補(bǔ)血湯高劑量組有明顯差異（P＜0.01）。在輻射后第10天，各受照射組NEUT均較輻射損傷早期有所回升，與模型組比較，當(dāng)歸補(bǔ)血湯中、高劑量組與其有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（中劑量組P＜0.05，高劑量組P ＜0.01），說明當(dāng)歸補(bǔ)血湯有明顯的升中性粒細(xì)胞作用，且這一作用與使用當(dāng)歸補(bǔ)血湯的時(shí)間和濃度相關(guān)。

骨髓是輻射高度敏感的組織，小鼠骨髓有核細(xì)胞數(shù)可反映其造血功能［7]。骨髓有核細(xì)胞計(jì)數(shù)的減少表明機(jī)體造血功能障礙，這與機(jī)體內(nèi)造血干細(xì)胞或造血微環(huán)境受損有關(guān)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，小鼠骨髓有核細(xì)胞數(shù)在受60Co-γ射線輻射后顯著減少（P＜0.01），而高劑量當(dāng)歸補(bǔ)血湯在照射后期可明顯保護(hù)骨髓有核細(xì)胞，減少其破壞，促進(jìn)骨髓造血干細(xì)胞的修復(fù)。

自由基是吸收輻射能量和損傷生物分子的重要媒介，輻射使組織中自由基增加，SOD減少、活性降低［8]。SOD是機(jī)體中最重要的抗氧化酶，在清除自由基和脂質(zhì)過氧化物中起關(guān)鍵作用［9]。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，小鼠在受到輻射后組織中自由基增加，血清抗氧化酶SOD含量明顯減低，而當(dāng)歸補(bǔ)血湯可以提升照射后小鼠血清中SOD含量，具有保護(hù)機(jī)體免受自由基損害和抗氧化的作用，且這一作用與當(dāng)歸補(bǔ)血湯的濃度相關(guān)。

MDA是脂質(zhì)過氧化的主要產(chǎn)物，可反映機(jī)體自由基水平和氧化應(yīng)激水平［10]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，小鼠受輻射后血清MDA明顯增多，其主要原因是輻射致機(jī)體抗氧化機(jī)制被破壞，SOD活性明顯降低，細(xì)胞被自由基攻擊，導(dǎo)致大量脂質(zhì)過氧化物堆積，MDA含量增加［11]。而當(dāng)歸補(bǔ)血湯可明顯抑制輻射損傷小鼠的脂質(zhì)過氧化，顯著降低MDA含量，具有較好的抗輻射作用。

綜上所述，當(dāng)歸補(bǔ)血湯對輻射所致造血系統(tǒng)損傷具有保護(hù)和促進(jìn)修復(fù)的作用，且當(dāng)歸補(bǔ)血湯可明顯提升血清SOD含量，增強(qiáng)其活性，使機(jī)體組織細(xì)胞免受自由基攻擊，大大降低MDA含量，可起到保護(hù)機(jī)體、抗輻射的作用。

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The protective effect of Danggui Buxue decoction on radiation injury in m ice

FENG Jing1，YU Yuan-wang2
（1.School of Medical Techniques in Shannxi University of Chinese Medicine，Shanxi Xianyang 712046，China；
2.Basic Medical College of Shanxi University of Chinese Medicine，Shanxi Xianyang 712046，China）

Objective To observe the protective effectof Danggui Buxue Decoction on60Co-γray irradiatedmice.M ethods The experimentalmice were randomly divided into 5 groups（the normal control group，model group，Danggui Buxue Decoction of low，middle and high dose groups）.The mouse except the normal control group were irradiated by60Co-γray and established the radiation-damage model.Peripheral blood neutrophil count（NEUT），the number of bone marrow nucleated cells（BMC），the activity of serum superoxide dismutase（SOD） and the serum levels of malondialdehyde（MDA）weremeasured.Results Radiation injury in mice of NEUT，BMC and SOD were significantly decreased（P＜0.01），MDA were increased（P＜0.01）.Danggui Buxue Decoction can increase the levels of NEUT，BMC and SOD in mice after radiation injury，decrease the content of MDA.And protective effect of high dose group was better（P ＜0.01）.Conclusions Danggui Buxue Decoction has protective effect on radiation injury inmice.And there is a correlation between the protection effect and dose.

Danggui Buxue decoction；Radiation injury；Protective effect

R-332

A

1671-7856（2015﹞10-0055-04

10.3969.j.issn.1671.7856.2015.010.013

馮璟（1980-），女，碩士，講師，主要從事輻射損傷的研究。E-mail：44115692@qq.com。

﹞2015-07-22

技術(shù)方法