免疫細胞化學EMA、CEA、CD68、Vimentin組合在胸腹水細胞塊病理診斷中的應用研究

陳建華，丁博，陳中，彭曉

(萍鄉(xiāng)市湘東區(qū)人民醫(yī)院病理科，江西 萍 鄉(xiāng)337016)

胸腹水細胞病理檢查是細胞病理學的重要組成部分，由于取組織活檢困難，臨床希望通過細胞學確診的愿望十分強烈；但細胞學在確診惡性腫瘤方面有其固有的局限性，即難以看到腫瘤的侵襲性的生物學行為；而侵襲性是惡性腫瘤區(qū)別于良性腫瘤的根本特點，也是診斷的關鍵所在；因此，細胞學常作為惡性腫瘤的初篩手段，確診主要依靠組織學。在細胞形態(tài)方面，胸腹水的異型間皮細胞、異型組織細胞、退變細胞很容易與腫瘤細胞混淆，只憑細胞涂片進行鑒別十分困難。脫落細胞在胸腹水中培養(yǎng)后形態(tài)發(fā)生改變，也給診斷增加了難度。可以說，胸腹水細胞學是細胞病理的難點之一。我科通過多年的探索研究，綜合運用細胞涂片、細胞塊切片、免疫細胞化學、臨床與影像資料進行胸腹水細胞病理診斷，提高了診斷準確性與確診率。

1 材料與方法

1.1 研究對象 收集湘東區(qū)醫(yī)院呼吸內(nèi)科與消化內(nèi)科2012年4月至2014年12月所有胸腹水病例共176例，萍礦湘雅醫(yī)院13例，共189例；其中惡性標本31例，診斷不明病例1例，陰性標本157例。

1.2 設備與材料 血漿凝固法細胞塊技術(shù)采用上海太陽生物技術(shù)有限公司TT試劑，H-E染色采用貝索試劑，免疫細胞化學采用福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司試劑，石蠟切片采用萊卡RM2235切片機。

1.3 方法 取3只試管各加入胸腹水10ml，普通低速離心機2000r/min離心5min，棄去上清液，取1只試管的沉渣涂片做瑞氏染色，1只試管沉渣涂片做H-E染色，1只試管沉渣采用血漿凝固法制成細胞塊，然后制成石蠟塊，切片做H-E染色，做免疫細胞化學 EMA、CEA、CD68、VIMENTIN 染色；細胞量較少的標本，可采用1只試管多次取樣離心，沉渣累加的方法增加細胞量[1]。結(jié)合胸腹水物理性狀(是否血性)，直接涂片瑞氏染色，直接涂片H-E染色，細胞塊石蠟切片H-E染色，細胞塊細胞化學EMA、CEA、CD68、VIMENTIN 染色，臨床與影像資料，進行綜合分析診斷。

2 結(jié)果

免疫細胞化學 EMA、CEA、CD68、VIMENTIN組合對鑒別胸腹水細胞來源有很大幫助，尤其是鑒別是否腺上皮來源幫助最大。所有30例腺癌標本的癌細胞有29例EMA陽性表達，1例弱陽性。有20例腺癌標本癌細胞CEA陽性表達，1例弱陽性，9例陰性。30例腺癌標本背景中的組織細胞、間皮細胞CD68、VIMENTIN陽性或弱陽性表達，CEA沒有陽性表達，2例表達弱陽性，EMA9例表達散在陽性，但與腺癌細胞團的明顯陽性表達有較大區(qū)別。157例陰性病例的背景細胞的免疫細胞化學表達情況也做了統(tǒng)計；具體見表1、表2、表3。所有30例腺癌標本均有細胞團和立體結(jié)構(gòu)，細胞塊H-E染色可見腺腔或腺泡結(jié)構(gòu)，細胞有不同程度的異型性。

表1 30例腺癌標本腺癌細胞EMA、CEA、CD68、Vimentin表達情況

表2 30例腺癌標本背景細胞(組織細胞、間皮細胞等)EMA、CEA、CD68、Vimentin 表達情況

表3 157例陰性標本背景細胞(組織細胞、間皮細胞等)EMA、CEA、CD68、Vimentin表達情況

3 討論

胸腹水惡性細胞80%以上為腺癌[2]，我院的統(tǒng)計為93.8%。腺癌細胞直接涂片的鏡下形態(tài)與異形或退變的間皮細胞不易區(qū)分[3]，而異形與退變的間皮細胞在胸腹水標本中很常見，所以兩者的鑒別非常重要。另外，異形的組織細胞也容易與腺癌細胞混淆，兩者的鑒別也很重要。在傳統(tǒng)直接涂片分析的基礎上，尋找新的診斷技術(shù)很有必要。

免疫細胞化學指標主要用于細胞來源的鑒別，EMA、CEA主要表達于腺癌細胞，CD68主要表達于組織細胞，VIMENTIN主要表達于間皮細胞。

EMA對腺癌的鑒別診斷幫助很大，我們所見到的30例腺癌細胞中，29例呈現(xiàn)腺癌細胞團的陽性表達，與背景細胞形成明顯對照，1例為弱陽性；CEA在腺癌細胞的陽性表達率為63.3%，有6.7%的病例弱陽性表達，在間皮細胞與組織細胞沒有陽性表達，因此對腺癌確診很有價值；CD68在組織細胞表達陽性，在腺癌細胞上沒有陽性表達，3.3%的病例表達弱陽性；VIMENTIN在間皮細胞表達陽性，在腺癌細胞上沒有陽性表達，6.7%的病例表達弱陽性。綜合 EMA、CEA、CD68、VIMENTIN 四項指標與鏡下構(gòu)形基本可以將腺癌細胞與間皮細胞、組織細胞區(qū)分出來。

在觀察分析免疫細胞化學指標表達時，要將腫瘤細胞與背景細胞分開進行分析，不可將背景細胞的表達誤認為腫瘤細胞的表達。背景細胞一般包括間皮細胞、組織細胞、中性粒細胞、淋巴細胞、漿細胞等。

腺上皮細胞的良惡性可以結(jié)合腺管與細胞的異型程度，脫落細胞團數(shù)量，腺性立體結(jié)構(gòu)等進行鑒別。下列指標高度提示腺癌：具有細胞內(nèi)黏液的異型細胞團，核仁明顯的異型細胞團，EMA強陽性的異型細胞團，CEA陽性的異型細胞團。細胞塊切片可見腺腔或腺泡結(jié)構(gòu)也提示腺癌，但應與間皮增生、間皮瘤的假腺樣結(jié)構(gòu)區(qū)別。間皮細胞在胸水中常出現(xiàn)印戒細胞樣形態(tài)，不要誤診為印戒細胞癌。

細胞團形態(tài)推論原有組織結(jié)構(gòu)[4]，血性胸腹水，壞死背景[5]，臨床表現(xiàn)，影像學資料均有助于腫瘤的良惡性鑒別。事實上，胸腹水中95%以上的腺上皮細胞為惡性，良性的腺瘤與乳頭狀增生不易形成胸腹水；在胸水中良性腺上皮更為罕見。在腹水、腹腔沖洗液中見到良性腺上皮的機會比胸水多一些。據(jù)熊閩春等報道,胸水染色體與腺苷脫氨酶檢驗對良惡性積液鑒別有一定診斷價值 ?！栋⒖寺饪撇±韺W》認為CEA、LEUM1、B72.3間皮陰性，腺癌陽性，可互為排除[7]；鈣網(wǎng)膜蛋白Calretinin被認為是間皮細胞的特異性較好的標記物。但根據(jù)我科的實踐，鈣網(wǎng)膜蛋白與LEUM1在鑒別間皮與腺癌上并不好用。武忠弼、楊光華主編的《中華外科病理學》對間皮標記物的認識與《阿克曼外科病理學》有很大程度的相同[8]。標記物Napsin-A是很好的肺腺癌及其他惡性腫瘤的標記物[9-13]，我們進一步的工作準備應用。

間皮細胞的良惡性鑒別有時非常困難，惡性間皮瘤的確診大多需要結(jié)合臨床資料、影像資料、組織病檢綜合診斷。胸腹水中見大量桑椹樣球狀細胞團高度提示惡性間皮瘤。王永才教授對胸腹水形態(tài)學所作的研究值得借鑒[14]。

陳杰教授主編的 《臨床病理科診斷常規(guī)》認為，電鏡在間皮瘤與轉(zhuǎn)移癌的鑒別診斷中起著至關重要的作用，主要是間皮瘤細胞頂部表面的微絨毛較腺癌更細長[15]。

除最為常見的腺癌以外，胸腹水中的其它惡性腫瘤種類很多，包括小細胞癌、淋巴瘤、鱗癌、間皮瘤等，其細胞形態(tài)與免疫細胞化學表達各不相同，我們將在以后的工作中進行深入研究。

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