• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    常熟虞山松蕈優(yōu)良菌株選育及深層發(fā)酵條件的優(yōu)化

    2015-05-05 12:09:29鄭麗雪翁渝潔
    食品工業(yè)科技 2015年21期
    關(guān)鍵詞:虞山菌絲體菌種

    徐 兵,鄭麗雪,翁渝潔,冀 宏

    (常熟理工學(xué)院生物與食品工程學(xué)院,江蘇常熟 215500)

    常熟虞山松蕈優(yōu)良菌株選育及深層發(fā)酵條件的優(yōu)化

    徐 兵,鄭麗雪,翁渝潔,冀 宏*

    (常熟理工學(xué)院生物與食品工程學(xué)院,江蘇常熟 215500)

    針對(duì)常熟虞山松蕈菌株篩選及深層發(fā)酵條件優(yōu)化展開研究。以松蕈深層液體發(fā)酵的生物量、菌絲球直徑、菌絲體密度及菌絲體日生長(zhǎng)速率為指標(biāo),篩選得到松蕈2號(hào)菌株。進(jìn)一步優(yōu)化了該菌株的發(fā)酵條件。通過單因素實(shí)驗(yàn)研究了培養(yǎng)溫度、搖床轉(zhuǎn)速及發(fā)酵周期對(duì)松蕈深層發(fā)酵的影響。最后,通過響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)優(yōu)化得到最佳發(fā)酵條件為溫度25 ℃,搖床轉(zhuǎn)速170 r/min,發(fā)酵周期8.5 d。在此條件下培養(yǎng)后,松蕈菌絲體干重達(dá)14.5 mg/mL。

    虞山松蕈,菌株篩選,深層發(fā)酵,優(yōu)化

    松蕈,即松茸,屬于真菌門,擔(dān)子菌亞門,層菌綱,傘菌目,口磨科,口磨屬[1],是國(guó)家二級(jí)保護(hù)植物。常熟地區(qū)虞山自古以來(lái)自然環(huán)境使然,適者生存,松林的空氣中就含有蕈的孢子,當(dāng)溫濕度條件適宜時(shí),就會(huì)生長(zhǎng)出松蕈子實(shí)體。虞山蕈油面是江蘇常熟漢族傳統(tǒng)的特色面點(diǎn),有“素中之王”之稱,用蕈油作為面“澆頭”的蕈油面,鮮美異常,非一般蘑菇可比。經(jīng)研究表明,松蕈含有豐富的蛋白質(zhì)、礦物質(zhì)、微量元素、人體必需氨基酸及多糖,其中松蕈多糖具有抗腫瘤、免疫調(diào)節(jié)作用、抗衰老、抗輻射、抗糖尿病、美白、抗炎抗菌等作用[2-6]。食用菌的栽培工藝主要是采用固體菌種技術(shù),采用固體菌種技術(shù)已培育出多種食用菌,但固體栽培受到季節(jié)、原材料、生長(zhǎng)周期、成本和易污染等限制。實(shí)踐證明,食用菌深層液體發(fā)酵工藝制備液體菌種可替代固體菌種用于生產(chǎn)[7],采用深層發(fā)酵工藝制備食用菌液體菌種是當(dāng)前研究的熱點(diǎn)。目前,還未見關(guān)于人工固體栽培松樹蕈及深層液體發(fā)酵工藝制備液體菌種方面的研究。

    本文針對(duì)常熟虞山松蕈菌株篩選及深層發(fā)酵條件優(yōu)化展開研究,旨在為實(shí)現(xiàn)松蕈的工廠化生產(chǎn)奠定理論基礎(chǔ)。

    1 材料與方法

    1.1 材料與儀器

    松蕈 江蘇常熟虞山,6個(gè)松蕈子實(shí)體分別編號(hào)為松蕈1號(hào),松蕈2號(hào),松蕈3號(hào),松蕈4號(hào),松蕈5號(hào),松蕈6號(hào)。

    5418R型小型臺(tái)式高速冷凍離心機(jī) eppendorf中國(guó)有限公司;MJ-250BS-Ⅱ型霉菌培養(yǎng)箱 上海新苗醫(yī)療器械制造有限公司;WGL-45B型電熱鼓風(fēng)干燥箱 天津市泰斯特儀器有限公司;LDZX-30KBS型立式壓力蒸汽滅菌器 上海申安醫(yī)療器械廠;GHP-9160型隔水式培養(yǎng)箱 上海申賢恒溫設(shè)備廠;M124A型電子天平 蘇州賽恩斯儀器有限公司;ZQLY-180型全溫震蕩培養(yǎng)箱 上海知楚儀器;CJ-1S型潔凈工作臺(tái) 天津市泰斯特儀器有限公司。

    1.2 實(shí)驗(yàn)方法

    1.2.1 菌種選育培養(yǎng)基制備 固體培養(yǎng)基:PDA培養(yǎng)基。

    液體培養(yǎng)基:葡萄糖20 g,胰蛋白胨4 g,磷酸二氫鉀3 g,硫酸鎂1.5 g,VB10.002 g,蒸餾水1000 mL,pH自然。

    1.2.2 發(fā)酵條件優(yōu)化培養(yǎng)基制備 液體培養(yǎng)基:葡萄糖30 g,酵母粉5 g,磷酸二氫鉀3.5 g,硫酸鎂1.5 g,VB10.002 g,蒸餾水1000 mL,pH自然。

    1.2.3 種子液的制備 無(wú)菌操作條件下,取活化好的1 cm×1 cm菌種塊于三角瓶液體培養(yǎng)基中,每瓶接種3塊,于26 ℃,160 r/min條件下培養(yǎng)9 d。三角瓶裝液量為100 mL/250 mL。

    1.2.4 搖床發(fā)酵培養(yǎng) 將松蕈種子液按照5%(v/v)的接種量接種到發(fā)酵培養(yǎng)基中,于26 ℃、160 r/min,培養(yǎng)9 d。

    1.2.5 優(yōu)良菌株篩選 在同等條件下,將6株野生松蕈菌種分別接入PDA培養(yǎng)基中,于26 ℃培養(yǎng)活化。然后將活化好的松蕈菌種接種到液體發(fā)酵培養(yǎng)基中進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng),考察菌絲球直徑、菌絲球數(shù)量、菌絲體干重及菌絲體日生長(zhǎng)速率4個(gè)指標(biāo),篩選出液體發(fā)酵優(yōu)勢(shì)菌株。

    1.2.5.1 菌絲球直徑(d)的測(cè)定 隨機(jī)取菌絲球20個(gè),將其拍成一排,測(cè)量其總長(zhǎng)度,重復(fù)三次,取平均值,記為D,菌絲球直徑即d=D/20[8]。

    1.2.5.2 菌絲球數(shù)量的測(cè)定 取10 mL的發(fā)酵液,過80目標(biāo)準(zhǔn)篩,計(jì)數(shù)篩網(wǎng)上的菌絲球的個(gè)數(shù),此數(shù)值記為n個(gè)。則100 mL發(fā)酵液中菌絲球數(shù)目為N=10×n。

    1.2.5.3 菌絲體干重的測(cè)定 取100 mL發(fā)酵醪液于80目標(biāo)準(zhǔn)篩中過濾,用蒸餾水沖洗3次,將過濾所得的菌絲體于60 ℃干燥箱中烘干至恒重,得松蕈菌絲體干重記為W。

    1.2.5.4 菌絲體日生長(zhǎng)速率的測(cè)定 在同等條件下,將不同編號(hào)的松蕈菌種分別接入PDA培養(yǎng)基中,放入恒溫培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng),設(shè)置溫度為26 ℃。每天觀察菌絲生長(zhǎng)情況,當(dāng)菌絲體開始生長(zhǎng),每2 d在固定時(shí)間測(cè)定菌落直徑,連續(xù)測(cè)量5次,測(cè)量菌絲用十字交叉法。計(jì)算菌絲體日均生長(zhǎng)速率。計(jì)算公式如下:

    式(1)

    1.2.6 發(fā)酵條件優(yōu)化單因素實(shí)驗(yàn)

    1.2.6.1 溫度對(duì)虞山松蕈產(chǎn)菌絲體的影響 以菌絲體干重作為指標(biāo),考察不同溫度對(duì)松蕈發(fā)酵產(chǎn)菌絲體的影響。溫度分別設(shè)定為23、24、25、26、27 ℃。搖床轉(zhuǎn)速160 r/min,培養(yǎng)時(shí)間為9 d。

    1.2.6.2 搖床轉(zhuǎn)速對(duì)虞山松蕈產(chǎn)菌絲體的影響 考察不同搖床轉(zhuǎn)速對(duì)松蕈發(fā)酵產(chǎn)菌絲體的影響。搖床轉(zhuǎn)速分別設(shè)定為120、140、160、180、200 r/min。溫度為25 ℃,培養(yǎng)時(shí)間為9 d。

    1.2.6.3 發(fā)酵周期對(duì)虞山松蕈產(chǎn)菌絲體的影響 以菌絲體干重作為指標(biāo),考察發(fā)酵周期對(duì)松蕈發(fā)酵產(chǎn)菌絲體的影響。培養(yǎng)溫度為25 ℃,搖床轉(zhuǎn)速為160 r/min。

    1.2.7 響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì) 采用響應(yīng)面法中的Box-Behnken模型對(duì)影響松蕈菌絲體生長(zhǎng)的關(guān)鍵因素(溫度、搖床轉(zhuǎn)速、發(fā)酵周期)進(jìn)行優(yōu)化。數(shù)據(jù)處理軟件為Design Expert 8.05 b。

    設(shè)溫度、搖床轉(zhuǎn)速和發(fā)酵周期為自變量,分別為A,B,C,每個(gè)自變量中的低、中、高水平以-1,0,1進(jìn)行編碼,以菌絲體干重為因變量R進(jìn)行實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì),所有實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

    表1 編碼與因子的實(shí)際濃度的對(duì)應(yīng)關(guān)系

    2 結(jié)果與分析

    2.1 優(yōu)良菌株篩選實(shí)驗(yàn)

    2.1.1 不同編號(hào)松蕈菌絲球直徑測(cè)定結(jié)果 由圖1可知,不同編號(hào)松蕈菌絲球直徑由大到小依次為:松蕈2號(hào)>松蕈3號(hào)>松蕈4號(hào)>松蕈1號(hào)>松蕈5號(hào)>松蕈6號(hào)。其中松蕈2號(hào)菌絲球直徑和松蕈3號(hào)相差不大,分別為0.213 cm和0.208 cm。其他編號(hào)的松蕈菌絲球直徑均小于0.2 cm,對(duì)于液體發(fā)酵的菌絲球直徑一般要求在0.2 cm左右[9]。

    圖1 不同編號(hào)菌株菌絲球直徑Fig.1 Different strains mycelium ball diameter

    2.1.2 不同編號(hào)松蕈菌絲球數(shù)量的測(cè)定結(jié)果 100 mL發(fā)酵液中,不同編號(hào)松蕈菌絲球數(shù)量見圖2。由圖2可知,松蕈3號(hào)發(fā)酵液中菌絲球數(shù)量最多,達(dá)到了2900個(gè),其次是松蕈2號(hào),每100 mL發(fā)酵液中菌絲球數(shù)量為2880個(gè)。對(duì)于液體發(fā)酵的菌絲球數(shù)量要求在3000個(gè)/100 mL左右[9]。所以,基本能夠達(dá)到液態(tài)深層發(fā)酵要求的菌株是松蕈3號(hào)和松蕈2號(hào)。

    圖2 不同編號(hào)菌株菌絲球數(shù)量Fig.2 Different strains mycelium ball numbers

    2.1.3 不同編號(hào)松蕈菌絲體干重的測(cè)定結(jié)果 不同編號(hào)松蕈菌絲體干重如圖3所示,由圖3可知:松蕈2號(hào)菌絲體干重最大,為11.82 mg/mL,其次為松蕈3號(hào),菌絲體干重為10.92 mg/mL,松蕈6號(hào)菌絲體干重最小。

    圖3 不同編號(hào)菌株菌絲體干重 Fig.3 Different strains dry weight of mycelium

    2.1.4 菌絲體日生長(zhǎng)速率的測(cè)定結(jié)果 由圖4可見,2號(hào)和3號(hào)的菌絲體日均生長(zhǎng)速率最快,2號(hào)菌絲體日生長(zhǎng)速率為0.46 cm/d,特別是第10~12 d菌絲生長(zhǎng)速率大幅度提升,這可能由于此培養(yǎng)基適合2號(hào)、3號(hào)菌絲體生長(zhǎng),前期可能因?yàn)榕囵B(yǎng)基松緊影響,菌絲體處于穩(wěn)定生長(zhǎng)時(shí)期,后期當(dāng)培養(yǎng)基適宜菌絲體生長(zhǎng)后,速率大幅度提升。

    圖4 不同培養(yǎng)時(shí)間下的菌絲體日均生長(zhǎng)速率Fig.4 Day of mycelium growth rate under different culture time

    綜合菌絲球直徑、數(shù)量、干重及日生長(zhǎng)速率的測(cè)定結(jié)果,松蕈2號(hào)3號(hào)的測(cè)定結(jié)果相近,但是松蕈2號(hào)發(fā)酵液菌絲體干重大于松蕈3號(hào),所以,可初步判斷松蕈2號(hào)更適合液體發(fā)酵,本文選擇松蕈2號(hào)菌株作為進(jìn)一步研究的實(shí)驗(yàn)菌株。

    2.2 發(fā)酵條件優(yōu)化單因素實(shí)驗(yàn)

    2.2.1 溫度對(duì)虞山松蕈產(chǎn)菌絲體的影響 保持酶活一個(gè)重要因素就是溫度,因此,在發(fā)酵過程中,選擇最佳的溫度條件,使得酶能維持其活性,才能使微生物生長(zhǎng)保持在旺盛狀態(tài),得到最多的目的產(chǎn)物[10-11]。

    不同發(fā)酵溫度對(duì)松蕈菌絲體產(chǎn)量的影響見圖5。

    圖5 溫度對(duì)松蕈產(chǎn)菌絲體的影響Fig.5 Effect of temperature on the mycelia of Tricholoma matsutake

    由圖可知,當(dāng)發(fā)酵溫度為25 ℃時(shí),松蕈菌絲體干重最大,為13.2 mg/mL。當(dāng)溫度高于25 ℃時(shí),松蕈菌絲體產(chǎn)量急劇下降,可能是松蕈菌絲體細(xì)胞生長(zhǎng)代謝相關(guān)的酶耐熱性差,酶活降低導(dǎo)致。因此,選擇25 ℃作為最佳的發(fā)酵溫度。

    2.2.2 搖床轉(zhuǎn)速對(duì)虞山松蕈產(chǎn)菌絲體的影響 當(dāng)水中含有其他物質(zhì)的時(shí)候,氧在水中的溶解度就會(huì)降低。所以,在發(fā)酵的過程中,為滿足菌絲體生長(zhǎng)代謝的需要,需要不斷的向培養(yǎng)液供給足夠的氧,但是,當(dāng)溶氧過大的時(shí)候,菌絲體的生長(zhǎng)代謝又會(huì)受到抑制,因此,為了提高代謝產(chǎn)物的濃度只能保持合適的溶氧[12]。通過搖床轉(zhuǎn)速可控制培養(yǎng)基中氧的含量。

    搖床轉(zhuǎn)速對(duì)松蕈產(chǎn)菌絲體的影響見圖6。

    圖6 搖床轉(zhuǎn)速對(duì)松蕈產(chǎn)菌絲體的影響Fig.6 Effect of shaking speed on the mycelia of Tricholoma matsutake

    由圖6可知,搖床轉(zhuǎn)速對(duì)松蕈產(chǎn)菌絲體的影響比較明顯,當(dāng)搖床轉(zhuǎn)速為160 r/min時(shí),發(fā)酵液中菌絲體產(chǎn)量最高。轉(zhuǎn)速低時(shí),由于通氣量小,培養(yǎng)基內(nèi)溶解氧量不足,不能滿足菌絲體生長(zhǎng)需求,而轉(zhuǎn)速過高對(duì)菌絲球的剪切作用增強(qiáng),也不利于菌絲體的生長(zhǎng)[13]。所以選擇160 r/min為最佳的搖床轉(zhuǎn)速。

    2.2.3 發(fā)酵周期對(duì)虞山松蕈產(chǎn)菌絲體的影響 菌絲體的生長(zhǎng)分為遲滯期,對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期,穩(wěn)定期及衰亡期四個(gè)時(shí)期。發(fā)酵周期對(duì)松蕈菌絲體產(chǎn)量的影響見圖7。

    圖7 發(fā)酵周期對(duì)松蕈產(chǎn)菌絲體的影響Fig.7 Effect of fermentation cycle on the mycelia of Tricholoma matsutake

    從發(fā)酵第2 d開始,菌絲生長(zhǎng)進(jìn)入了對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期,發(fā)酵第7 d,菌絲體產(chǎn)量接近最大,第8 d和第9 d時(shí)菌絲體產(chǎn)量相差不大??赡苁怯捎谂囵B(yǎng)過程中菌絲球直徑增大,導(dǎo)致營(yíng)養(yǎng)物和溶解氧向內(nèi)部傳遞困難,菌絲體量不再增加。所以,選擇8 d作為發(fā)酵周期。

    2.3 響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

    響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果見表3。按照Design Expert 8.05 b軟件中的Box-Behnken Design方法,三個(gè)因素經(jīng)過擬合得到的回歸方程為:

    菌絲體干重=13.42+0.12A+0.97B+1.60C-0.17AB+0.55AC+0.43BC-0.70A2-1.29B2-1.51C2

    表3 Box-Behnken 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)及相關(guān)結(jié)果

    對(duì)該回歸方程進(jìn)行方差分析,結(jié)果見表4。由表4可知,該模型達(dá)到極顯著水平(p=0.0005<0.01),該模型的R2=0.9575,說明該模型與實(shí)驗(yàn)擬合良好,故可用于設(shè)計(jì)范圍內(nèi)的預(yù)測(cè)。

    由表4可知,在一次項(xiàng)中,搖床轉(zhuǎn)速和發(fā)酵周期對(duì)松蕈菌絲體干重的影響顯著(p<0.05),溫度對(duì)于松蕈菌絲體干重的影響不顯著。在二次項(xiàng)中,溫度、搖床轉(zhuǎn)速和發(fā)酵周期的影響都達(dá)到了顯著水平,交互項(xiàng)中,各因素的交互作用都不顯著。

    根據(jù)Design Expert 8.05 b軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行二次多元回歸擬合,所得到的二次回歸方程的響應(yīng)面圖如圖8~圖10所示,溫度、搖床轉(zhuǎn)速、發(fā)酵周期及交互作用對(duì)響應(yīng)值的影響可以從圖中直觀地反映出來(lái),并確定各個(gè)因素的最佳水平。

    表4 響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)方差分析

    圖8 溫度及搖床轉(zhuǎn)速對(duì)松蕈菌絲體交互效應(yīng)的響應(yīng)面圖Fig.8 Rsponse surface of the mycelia of Tricholoma matsutake vs fermentation temperature and rotation speed

    圖9 溫度及發(fā)酵周期對(duì)松蕈菌絲體交互效應(yīng)的響應(yīng)面圖Fig.9 Response surface of the mycelia of Tricholoma matsutake vs fermentation temperature and fermentation cycle

    通過分析預(yù)測(cè)得到松蕈菌絲體干重最大值為

    圖10 搖床轉(zhuǎn)速及發(fā)酵周期對(duì)松蕈菌絲體交互效應(yīng)的響應(yīng)面圖Fig.10 Response surface of the mycelia of Tricholoma matsutake vs rotation speed and fermentation cycle

    14.18 mg/mL,即當(dāng)A(溫度)=25.3 ℃,B(搖床轉(zhuǎn)速)=169.4 r/min,C(發(fā)酵周期)=8.7 d??紤]到實(shí)際操作便利,確定發(fā)酵條件的最佳組合為:溫度25 ℃,搖床轉(zhuǎn)速170 r/min,發(fā)酵周期8.5 d。為了證實(shí)預(yù)測(cè)的結(jié)果,用以上得到的最優(yōu)配方重復(fù)實(shí)驗(yàn)3次,3次實(shí)驗(yàn)菌絲體干重平均值為14.5 mg/mL,與預(yù)測(cè)值擬合較好,由此可以看出回歸方程為松蕈液體發(fā)酵提供了一個(gè)合適的模型。優(yōu)化后松蕈菌絲體產(chǎn)量與課題組前期優(yōu)化的白靈菇深層發(fā)酵菌絲體產(chǎn)量接近,這說明液體深層發(fā)酵法生產(chǎn)松蕈將指日可待[14]。

    3 結(jié)論

    以菌絲球直徑、菌絲球數(shù)量、菌絲體干重及菌絲體日生長(zhǎng)速率為指標(biāo),篩選到液體發(fā)酵優(yōu)勢(shì)菌株為2號(hào)菌株,其菌絲球直徑為0.213 cm,每100 mL發(fā)酵液中菌絲球數(shù)量為2880個(gè),菌絲體干重為11.82 mg/mL,菌絲體日生長(zhǎng)速率為0.46 cm/d。

    由單因素實(shí)驗(yàn)可知,實(shí)驗(yàn)菌株液體發(fā)酵最佳溫度為25 ℃,最佳搖床轉(zhuǎn)速為160 r/min,最佳發(fā)酵周期為8 d。響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)優(yōu)化后的最佳發(fā)酵條件為溫度25 ℃,搖床轉(zhuǎn)速170 r/min,發(fā)酵周期8.5 d,在此條件下,松蕈菌絲體干重為14.5 mg/mL,比優(yōu)化前提高了23%。

    本實(shí)驗(yàn)首次對(duì)常熟虞山松蕈菌絲體深層液態(tài)發(fā)酵工藝進(jìn)行了研究,實(shí)驗(yàn)用培養(yǎng)基配方簡(jiǎn)單、價(jià)格低廉、容易獲取,而且發(fā)酵周期短,菌絲體產(chǎn)量可觀,此研究對(duì)于生產(chǎn)實(shí)踐具有較好的指導(dǎo)作用。

    [1]王悅,薛偉. 不同溫度和濕度對(duì)松茸保鮮效果的影響[J]. 食品工業(yè)科技,2012,33(08):366-368.

    [2]蔣谷人,林卓坤,肖夫坤. 擔(dān)子菌多糖及羊脾RNA對(duì)腫瘤的抑制與有關(guān)組織中cAMP含量關(guān)系的探討[J]. 生物化學(xué)雜志,1985,1(5):149-154.

    [3]Kim J.,Byeon Se.,Lee YG. et al. Immunostimulatory activities of polysaccharides from liquid culture of pine-mushroom Tricholom a matsutake[J]. J Microbiol Biotechnol,2008,18(1):95-103.

    [4]劉剛,王輝,張洪. 松茸多糖對(duì) D-半乳糖所致小鼠衰老模型的影響[J]. 中國(guó)藥理學(xué)通報(bào),2012,28(10):1439-1442.

    [5]Hoshi H,Iijima H,Ishihara Y. et al. Absorption and tissue distribution of an immunomodulatory alpha-D-glucan after oral administration of Tricholoma matsutake[J]. J Agric Food Chem,2008,56(17):7715-20.

    [6]Masaru O,Hiroyuki H,Hironori M. Screening of Various Mushroomswith Inhibitory Activity of Adipocyte Conversion[J]. Journal of the Japanese Society for Food Science and Technology,2000,47(5):394-396.

    [7]李書倩. 白靈菇深層發(fā)酵和多糖提取工藝的研究[D]. 沈陽(yáng):沈陽(yáng)農(nóng)業(yè)大學(xué),2006.

    [8]Royse D J,May B. Use of isozyme variation to identify genotypic classes of Agaricus brunnescens[J]. Mycologia,1982,74(1):93-102.

    [9]冀宏,齊斌,趙黎明. 白金針菇液體菌種優(yōu)良菌株選育[J].食品與機(jī)械,2013,29(6):49-53.

    [10]葉勤. 發(fā)酵過程原理[M]. 北京:化學(xué)工業(yè)出版社. 2005:300-302.

    [11]白秀峰. 發(fā)酵工藝學(xué)[M]. 北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社. 2003:158-162.

    [12]何俊勇. 高產(chǎn)谷胱甘肽新菌種的選育及其工藝條件的研究[D]. 杭州:浙江工業(yè)大學(xué),2004.

    [13]李正鵬.白靈菇液體發(fā)酵及其胞外多糖生物活性的研究[D].合肥:安徽農(nóng)業(yè)大學(xué),2006.

    [14]冀宏,趙黎明. 基于生物量的白靈菇菌株篩選及其深層發(fā)酵培養(yǎng)條件優(yōu)化[J]. 食品科學(xué),2013,34(23):221-227.

    Predominant strains breeding and optimization of submerged fermentation conditions of Changshu YushanTricholomamatsutake

    XU Bing,ZHENG Li-xue,WENG Yu-jie,JI Hong*

    (College of Biology and Food Engineering,Changshu Institute of Technology,Changshu 215500,China)

    Strains breeding and optimization of submerged fermentation conditions of Changshu YushanTricholomamatsutakewere studied in this paper. The predominant strain ofTricholomamatsutakein liquid culture was screened by testing mycelium ball diameter,mycelium ball number,mycelium dry weight of the ball and day of mycelium growth rate under different incubation time. NO.2 was used as experimental strains. Mycelium submerged fermentation culture conditions were optimized. The effect temperature,shaking speed and fermentation cycle onTricholomamatsutakesubmerged fermentation were researched by single factor experiment. The optimal fermentation conditions determined by the response surface test was 25 ℃,170 r/min and 8.5 d,under which the dry weight of mycelium was 14.5 mg/mL.

    Tricholomamatsutakeof Yushan;strains breeding;submerged fermentation;optimization

    2015-01-26

    徐兵(1982-),男,碩士研究生,實(shí)驗(yàn)師,研究方向:食用菌工程技術(shù),E-mail:xubing@cslg.cn。

    *通訊作者:冀宏(1969-),男,博士研究生,研究員,研究方向:食用菌工程技術(shù),E-mail:jihong@cslg.cn。

    TS201.1

    A

    1002-0306(2015)21-0200-05

    10.13386/j.issn1002-0306.2015.21.033

    猜你喜歡
    虞山菌絲體菌種
    螞蟻琥珀中發(fā)現(xiàn)新蘑菇菌種
    軍事文摘(2021年18期)2021-12-02 01:28:04
    江蘇省常熟中學(xué)虞山文化課程基地
    江蘇教育(2020年67期)2020-11-02 00:49:30
    虞山行
    朋友,請(qǐng)隨我來(lái)游虞山
    葡萄糖酸鈉發(fā)酵廢棄菌絲體提取殼聚糖的研究
    虞山城門
    新型環(huán)保吸聲材料——菌絲體膠合秸稈
    安全(2015年7期)2016-01-19 06:19:39
    冬蟲夏草發(fā)酵液和菌絲體中主要核苷類成分分析
    手外傷感染的菌種構(gòu)成及耐藥性分析
    食用菌液體菌種栽培技術(shù)的探討
    国产日韩欧美在线精品| 日韩精品有码人妻一区| 日韩中文字幕视频在线看片 | 精品一区二区三卡| 国产av精品麻豆| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 草草在线视频免费看| 亚洲国产精品专区欧美| 亚洲欧洲日产国产| 精品人妻熟女av久视频| 美女中出高潮动态图| 大陆偷拍与自拍| 少妇人妻一区二区三区视频| 超碰av人人做人人爽久久| 一级毛片我不卡| 亚洲av不卡在线观看| 国产色爽女视频免费观看| 国产 一区 欧美 日韩| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 国产成人freesex在线| 午夜福利高清视频| 精品久久国产蜜桃| 最近的中文字幕免费完整| 亚洲精品一区蜜桃| 国产av精品麻豆| 又大又黄又爽视频免费| 国产高清国产精品国产三级 | 免费人妻精品一区二区三区视频| 精品一区在线观看国产| 一级黄片播放器| 日韩视频在线欧美| 久久久久久久久久久免费av| 日本vs欧美在线观看视频 | 成人二区视频| 亚洲欧美日韩东京热| 亚洲真实伦在线观看| 国产精品免费大片| 一级黄片播放器| av视频免费观看在线观看| 成人毛片60女人毛片免费| 爱豆传媒免费全集在线观看| 在线免费十八禁| 丝袜喷水一区| 中文天堂在线官网| 大码成人一级视频| 乱系列少妇在线播放| 国产日韩欧美在线精品| 日韩人妻高清精品专区| 日韩强制内射视频| 亚洲人与动物交配视频| 国产伦在线观看视频一区| 久久久午夜欧美精品| 2018国产大陆天天弄谢| 久久久久精品性色| 精品视频人人做人人爽| 中文字幕av成人在线电影| 日韩大片免费观看网站| 性色avwww在线观看| 免费黄网站久久成人精品| 欧美+日韩+精品| 一区二区三区精品91| 亚洲精品国产成人久久av| 国产精品久久久久久精品电影小说 | 亚洲av综合色区一区| 久久久精品免费免费高清| 在线看a的网站| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 国产精品久久久久久av不卡| 亚洲不卡免费看| 伊人久久精品亚洲午夜| 国产永久视频网站| 一级毛片电影观看| 热re99久久精品国产66热6| 亚洲国产精品999| 免费高清在线观看视频在线观看| 日韩强制内射视频| 建设人人有责人人尽责人人享有的 | 交换朋友夫妻互换小说| 大片电影免费在线观看免费| 一级黄片播放器| 男女无遮挡免费网站观看| h视频一区二区三区| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 午夜日本视频在线| 青春草亚洲视频在线观看| 久久久久国产精品人妻一区二区| 国产午夜精品一二区理论片| av播播在线观看一区| 我要看日韩黄色一级片| 亚洲精品成人av观看孕妇| 精品一品国产午夜福利视频| 三级国产精品欧美在线观看| 亚洲精品乱久久久久久| 五月天丁香电影| 成人综合一区亚洲| freevideosex欧美| 国产黄片视频在线免费观看| 国产爽快片一区二区三区| 亚洲欧美日韩东京热| 99热国产这里只有精品6| 亚洲色图综合在线观看| 中文在线观看免费www的网站| .国产精品久久| 久久久久精品久久久久真实原创| av不卡在线播放| 又爽又黄a免费视频| 欧美日韩综合久久久久久| 男女下面进入的视频免费午夜| 男男h啪啪无遮挡| 亚洲不卡免费看| 精品国产一区二区三区久久久樱花 | 天天躁日日操中文字幕| 97在线人人人人妻| 男的添女的下面高潮视频| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91 | 国产精品伦人一区二区| 亚洲经典国产精华液单| 久久人人爽人人爽人人片va| 秋霞在线观看毛片| 十八禁网站网址无遮挡 | 中国国产av一级| 水蜜桃什么品种好| 尾随美女入室| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 美女福利国产在线 | 日韩伦理黄色片| 亚洲色图综合在线观看| 成人美女网站在线观看视频| 亚洲欧美一区二区三区黑人 | 麻豆成人av视频| 男的添女的下面高潮视频| 九色成人免费人妻av| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 少妇人妻精品综合一区二区| 中文字幕亚洲精品专区| 国产精品不卡视频一区二区| 天堂中文最新版在线下载| 日韩中字成人| 97超视频在线观看视频| 一边亲一边摸免费视频| 91精品国产国语对白视频| 国产精品嫩草影院av在线观看| 免费在线观看成人毛片| 丝瓜视频免费看黄片| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 熟女电影av网| 街头女战士在线观看网站| 七月丁香在线播放| 天美传媒精品一区二区| 国产精品99久久99久久久不卡 | 成人毛片60女人毛片免费| 亚洲国产av新网站| 人妻少妇偷人精品九色| 国产探花极品一区二区| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看| 麻豆成人午夜福利视频| 久久久久国产网址| 国产亚洲91精品色在线| 亚洲精品中文字幕在线视频 | 我的老师免费观看完整版| 亚洲精品国产成人久久av| 免费看日本二区| 大陆偷拍与自拍| 2018国产大陆天天弄谢| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 九九在线视频观看精品| 久久久国产一区二区| 日韩一区二区三区影片| 高清午夜精品一区二区三区| 一级二级三级毛片免费看| 亚洲美女搞黄在线观看| 亚洲av欧美aⅴ国产| 成人漫画全彩无遮挡| 中文字幕免费在线视频6| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 国产亚洲91精品色在线| 久久久久久久国产电影| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 欧美性感艳星| 亚洲av在线观看美女高潮| 日本免费在线观看一区| 在线观看美女被高潮喷水网站| 国产久久久一区二区三区| 男女免费视频国产| 天美传媒精品一区二区| h视频一区二区三区| 日本午夜av视频| 中文字幕精品免费在线观看视频 | 成人影院久久| videos熟女内射| 人妻夜夜爽99麻豆av| 国产精品女同一区二区软件| 亚洲av成人精品一区久久| 免费高清在线观看视频在线观看| av国产久精品久网站免费入址| 免费人成在线观看视频色| 国产精品无大码| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 在线观看免费视频网站a站| 亚洲精品日韩av片在线观看| 黄色视频在线播放观看不卡| 亚洲经典国产精华液单| 久久影院123| 免费看日本二区| 久久国内精品自在自线图片| h视频一区二区三区| 五月伊人婷婷丁香| 在线 av 中文字幕| 免费av不卡在线播放| 有码 亚洲区| 久久久久久久国产电影| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 高清欧美精品videossex| 91狼人影院| 精品久久久久久电影网| 99热全是精品| 国产熟女欧美一区二区| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放| 精品一区二区三卡| 久久久成人免费电影| 秋霞在线观看毛片| av在线蜜桃| 国产高清有码在线观看视频| 亚洲人成网站在线观看播放| 五月玫瑰六月丁香| 亚洲人成网站在线播| 男女免费视频国产| 国产高清有码在线观看视频| 日韩在线高清观看一区二区三区| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 国产视频内射| 三级国产精品欧美在线观看| 毛片一级片免费看久久久久| 在线观看一区二区三区激情| 又大又黄又爽视频免费| 色视频www国产| 女人久久www免费人成看片| 日韩大片免费观看网站| 女的被弄到高潮叫床怎么办| av网站免费在线观看视频| 久久 成人 亚洲| 日韩欧美一区视频在线观看 | 久久人人爽av亚洲精品天堂 | 国产高清国产精品国产三级 | 夫妻午夜视频| 18禁动态无遮挡网站| 男的添女的下面高潮视频| 国产免费视频播放在线视频| 麻豆成人av视频| 国产精品成人在线| 91在线精品国自产拍蜜月| 内地一区二区视频在线| 在线观看一区二区三区激情| kizo精华| 身体一侧抽搐| 日本色播在线视频| 精品一品国产午夜福利视频| 高清在线视频一区二区三区| 国产精品久久久久久久电影| 最黄视频免费看| 高清不卡的av网站| 中文在线观看免费www的网站| 国产精品一区二区在线观看99| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 91久久精品国产一区二区成人| av黄色大香蕉| 国产精品.久久久| 少妇人妻一区二区三区视频| 国产男女内射视频| av女优亚洲男人天堂| 国产淫语在线视频| 国产永久视频网站| 国产亚洲欧美精品永久| 亚洲国产精品成人久久小说| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 国产黄色免费在线视频| 色哟哟·www| 高清欧美精品videossex| videos熟女内射| 亚洲色图av天堂| 午夜视频国产福利| 三级国产精品欧美在线观看| 亚洲怡红院男人天堂| 日韩 亚洲 欧美在线| 国产毛片在线视频| 激情 狠狠 欧美| 亚洲第一av免费看| 精品国产乱码久久久久久小说| 久久人人爽人人片av| www.av在线官网国产| 亚洲精品国产成人久久av| 国产一级毛片在线| 亚洲欧美精品专区久久| 日韩 亚洲 欧美在线| 日韩成人伦理影院| 免费久久久久久久精品成人欧美视频 | 欧美精品国产亚洲| 美女视频免费永久观看网站| 中文欧美无线码| 久久国产亚洲av麻豆专区| 观看免费一级毛片| 国产精品精品国产色婷婷| 亚洲图色成人| 亚洲av国产av综合av卡| 国产在视频线精品| 国产精品人妻久久久久久| 国产一区亚洲一区在线观看| 蜜桃亚洲精品一区二区三区| 亚洲美女黄色视频免费看| 麻豆成人午夜福利视频| 女人久久www免费人成看片| 青春草亚洲视频在线观看| 涩涩av久久男人的天堂| 在线观看一区二区三区| 狂野欧美激情性bbbbbb| 男女啪啪激烈高潮av片| 麻豆成人午夜福利视频| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 91久久精品国产一区二区三区| 国产久久久一区二区三区| 国产一区二区三区av在线| 亚洲四区av| 久久女婷五月综合色啪小说| 欧美性感艳星| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片| 日本vs欧美在线观看视频 | 少妇人妻精品综合一区二区| 我的老师免费观看完整版| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频 | 搡女人真爽免费视频火全软件| 在线 av 中文字幕| 三级国产精品欧美在线观看| 99久久精品国产国产毛片| 亚洲久久久国产精品| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图 | 大码成人一级视频| 成人美女网站在线观看视频| 欧美日韩视频精品一区| 成年免费大片在线观看| 免费观看av网站的网址| 99久久精品国产国产毛片| 精品亚洲成国产av| 日韩一本色道免费dvd| 亚洲精品日本国产第一区| 精品熟女少妇av免费看| 久久国内精品自在自线图片| 九草在线视频观看| 中国国产av一级| 国产成人午夜福利电影在线观看| 97超视频在线观看视频| 97在线人人人人妻| 国产 一区精品| 成年免费大片在线观看| 1000部很黄的大片| 国产精品久久久久久精品电影小说 | 最近最新中文字幕免费大全7| 亚洲,一卡二卡三卡| 欧美97在线视频| 国产 一区精品| 啦啦啦啦在线视频资源| 三级国产精品欧美在线观看| 麻豆成人午夜福利视频| 男女边摸边吃奶| 最后的刺客免费高清国语| .国产精品久久| 青青草视频在线视频观看| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 日韩欧美 国产精品| av不卡在线播放| 国产又色又爽无遮挡免| 丰满乱子伦码专区| 国产成人a区在线观看| 97超视频在线观看视频| 中文字幕制服av| 久久久亚洲精品成人影院| 大香蕉97超碰在线| 波野结衣二区三区在线| 天天躁日日操中文字幕| 五月开心婷婷网| 丰满迷人的少妇在线观看| 97超碰精品成人国产| 黑人高潮一二区| 99热这里只有是精品50| 看非洲黑人一级黄片| 在线亚洲精品国产二区图片欧美 | 岛国毛片在线播放| 99九九线精品视频在线观看视频| 亚洲性久久影院| 免费久久久久久久精品成人欧美视频 | 干丝袜人妻中文字幕| 亚洲真实伦在线观看| 我要看黄色一级片免费的| 国产精品久久久久久久电影| 五月天丁香电影| 老司机影院毛片| 一区二区三区免费毛片| 性高湖久久久久久久久免费观看| 卡戴珊不雅视频在线播放| 亚洲丝袜综合中文字幕| 丰满乱子伦码专区| 国产精品人妻久久久久久| 久久久久视频综合| 国产淫语在线视频| 777米奇影视久久| av在线老鸭窝| 一边亲一边摸免费视频| 精品久久久噜噜| 777米奇影视久久| 高清在线视频一区二区三区| 日韩三级伦理在线观看| 99热6这里只有精品| 国产精品国产三级专区第一集| 毛片女人毛片| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线| 婷婷色综合www| 亚洲成色77777| 能在线免费看毛片的网站| 国产精品99久久久久久久久| 激情 狠狠 欧美| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 国产精品精品国产色婷婷| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 亚洲综合色惰| 亚洲精品456在线播放app| 天堂中文最新版在线下载| av不卡在线播放| av天堂中文字幕网| 国产精品免费大片| 国产日韩欧美在线精品| 久久久国产一区二区| 黄色欧美视频在线观看| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 少妇精品久久久久久久| 色吧在线观看| h视频一区二区三区| 亚洲综合色惰| 国产免费又黄又爽又色| 国产精品欧美亚洲77777| 99热这里只有是精品50| 男女边吃奶边做爰视频| 国产淫语在线视频| 偷拍熟女少妇极品色| 伊人久久精品亚洲午夜| 日韩成人av中文字幕在线观看| 九草在线视频观看| 一区二区三区四区激情视频| 色视频在线一区二区三区| 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| 欧美bdsm另类| 久久99热6这里只有精品| 插逼视频在线观看| 各种免费的搞黄视频| 99热这里只有精品一区| 永久网站在线| 99久国产av精品国产电影| 黄色日韩在线| 美女cb高潮喷水在线观看| 亚洲av日韩在线播放| 插阴视频在线观看视频| av网站免费在线观看视频| 色婷婷久久久亚洲欧美| 免费人妻精品一区二区三区视频| 成人无遮挡网站| 亚洲电影在线观看av| 日韩亚洲欧美综合| 精品熟女少妇av免费看| 在线 av 中文字幕| 交换朋友夫妻互换小说| 免费看日本二区| 哪个播放器可以免费观看大片| 99热6这里只有精品| 国产午夜精品久久久久久一区二区三区| 国产亚洲一区二区精品| 国产一区二区在线观看日韩| 老熟女久久久| 国产免费福利视频在线观看| 一本一本综合久久| 亚洲国产精品999| 深爱激情五月婷婷| 大陆偷拍与自拍| 男男h啪啪无遮挡| 亚洲国产高清在线一区二区三| 久久久久国产精品人妻一区二区| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 中文字幕制服av| 亚洲欧美精品专区久久| av在线app专区| 亚洲国产欧美人成| 久久久精品免费免费高清| 国产黄片视频在线免费观看| 高清视频免费观看一区二区| 国产成人精品婷婷| 老女人水多毛片| 日韩不卡一区二区三区视频在线| 男人添女人高潮全过程视频| 舔av片在线| 人妻一区二区av| 毛片一级片免费看久久久久| 女性生殖器流出的白浆| 成人无遮挡网站| 亚洲国产日韩一区二区| 777米奇影视久久| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 午夜免费观看性视频| 爱豆传媒免费全集在线观看| 亚洲欧美成人精品一区二区| 综合色丁香网| 国产毛片在线视频| 精品久久久噜噜| 青春草亚洲视频在线观看| .国产精品久久| 能在线免费看毛片的网站| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 97热精品久久久久久| 黄色日韩在线| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 五月伊人婷婷丁香| 男人添女人高潮全过程视频| 国产黄片视频在线免费观看| 日本-黄色视频高清免费观看| 少妇人妻精品综合一区二区| 国产伦精品一区二区三区视频9| 国产久久久一区二区三区| 男女边吃奶边做爰视频| 欧美激情极品国产一区二区三区 | av在线蜜桃| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 我的女老师完整版在线观看| 国产伦理片在线播放av一区| 欧美成人a在线观看| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| a级毛色黄片| 精品国产乱码久久久久久小说| 成人综合一区亚洲| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 国产精品久久久久久久电影| 妹子高潮喷水视频| 日韩大片免费观看网站| 亚洲性久久影院| 春色校园在线视频观看| 免费人妻精品一区二区三区视频| 国产精品国产av在线观看| 国产亚洲最大av| 国产伦在线观看视频一区| 夜夜骑夜夜射夜夜干| 国产精品福利在线免费观看| 国产v大片淫在线免费观看| 国产欧美另类精品又又久久亚洲欧美| 在线观看一区二区三区激情| 免费久久久久久久精品成人欧美视频 | 极品少妇高潮喷水抽搐| 成人特级av手机在线观看| 亚洲,欧美,日韩| 亚洲精品国产av成人精品| 国产精品成人在线| 久久久久性生活片| www.色视频.com| 熟女av电影| 日本爱情动作片www.在线观看| 国产成人精品久久久久久| 免费看av在线观看网站| 少妇人妻 视频| 国产精品国产av在线观看| videossex国产| 大话2 男鬼变身卡| 特大巨黑吊av在线直播| 少妇的逼好多水| 国产精品不卡视频一区二区| 一本久久精品| 国产精品福利在线免费观看| 免费黄网站久久成人精品| 男女边吃奶边做爰视频| 亚洲av二区三区四区| 一本一本综合久久| 亚洲精品日韩av片在线观看| 国产淫语在线视频| 偷拍熟女少妇极品色| 欧美三级亚洲精品| 国产v大片淫在线免费观看| 99热国产这里只有精品6| 免费人成在线观看视频色| 91精品国产国语对白视频| 国产av精品麻豆| 国产精品一二三区在线看| 亚州av有码| 欧美日本视频| 美女cb高潮喷水在线观看| av免费观看日本| 久久久久久久久久久丰满| 91久久精品国产一区二区三区| 国产精品一区二区在线观看99| 婷婷色综合www| 中文欧美无线码| 一级黄片播放器| 十分钟在线观看高清视频www | 最近的中文字幕免费完整| 亚洲精品视频女| 新久久久久国产一级毛片| 91久久精品国产一区二区三区| 尾随美女入室| 国产精品熟女久久久久浪| 久久久亚洲精品成人影院| 91精品国产九色| 免费观看a级毛片全部| 老熟女久久久| 我的女老师完整版在线观看| 国产精品99久久久久久久久| 人妻少妇偷人精品九色| 插逼视频在线观看| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 亚洲欧洲日产国产| 国产av码专区亚洲av| 亚洲人与动物交配视频|