降香黃檀—檀香根際土壤高效解磷細菌的分離篩選與鑒定

徐?！⒕骸≈車ⅰ±疃佟×_娜　黃馨

中南林業(yè)科技大學經(jīng)濟林培育與保護教育部重點實驗室，湖南長沙 410004

摘 要 利用PKO無機磷培養(yǎng)基從不同林齡的降香黃檀-檀香根際土壤中分離篩選高效解磷菌，為進一步研制專用生物復合肥提供依據(jù)。通過溶磷圈法篩選溶磷較強（D/d值大于1.5）的菌株19株，采用鉬銻鈧比色法測定其解磷能力。結(jié)果顯示：菌株無機磷溶量在9.23～223.27 μg/mL之間，3株菌無機磷溶量在170 μg/mL以上；菌株有機磷溶量在0.43～25.05 μg/mL之間，有機磷溶量在15 μg/mL以上有4株。采用Salkowski 比色法測定菌株分泌IAA能力，10株菌具有分泌能力，其中DosaP25分泌IAA量達32.14 μg/mL。綜上所述，菌株DosaP15、DosaP25具有較強的解磷、分泌IAA能力?；谛螒B(tài)學、生理生化特性及16 S rDNA序列比較分析，初步鑒定DosaP15屬于Bacillus pumilus、DosaP25屬于Bacillus subtilis。試驗同時表明，菌株溶磷量、分泌IAA量與培養(yǎng)液pH值之間不存在顯著相關性。

關鍵詞 降香黃檀；檀香；根際解磷菌；解磷能力；IAA

中圖分類號 S182 文獻標識碼 A

磷是植物生長發(fā)育的必需元素且主要從土壤中獲取，而土壤中絕大部分磷以難溶狀態(tài)存在，不利于植物吸收，成為限制植物生長發(fā)育的重要因素[1-2]。有研究發(fā)現(xiàn)，土壤中存在著將植物難以吸收的難溶態(tài)磷轉(zhuǎn)化成有效態(tài)磷的微生物，稱其為解磷菌或溶磷菌[3]。甚至部分解磷菌還能分泌促生物質(zhì)，改善植物根際土壤環(huán)境，促進植物生長[4-5]。喬志偉等[6]從石灰性土壤作物根際分離溶磷細菌，其中W25對磷酸三鈣的溶解能力達385.5 mg/L，同時可分泌甲酸、乙酸、草酸、琥珀酸等多種有機酸。

降香黃檀（Dalbergia odorifera）為豆科蝶形花科半落葉喬木，國家II級重點保護野生植物[7]；檀香（Sandalwood）為半寄生性常綠喬木，須與寄主共生才能存活[8]。兩者均為珍貴紅木用材樹種，心材堅硬、耐濕耐腐，是制作名貴木制品的重要原料，具有重要的藥用價值[9-10]。然而降香黃檀、檀香生長緩慢，通常數(shù)十年才能成材，人為盜伐嚴重，野生資源已瀕臨滅絕。近年來，通過對降香黃檀、檀香的大規(guī)模推廣種植，以推動貧困地區(qū)致富，同時對降香黃檀、檀香種質(zhì)資源起到有效的保護。其中以降香黃檀-檀香混交模式種植，效果較好。檀香抑制降香黃檀快速增高有利于其心材的形成，降香黃檀為檀香提供營養(yǎng)物質(zhì)促進檀香生長[11-12]。但降香黃檀、檀香幼苗（幼林）長勢差、生長緩慢等問題未得到有效解決，同時大量化肥的施用引起了環(huán)境污染、生產(chǎn)成本增加等問題。本文旨在從降香黃檀、檀香根際土壤中篩選出高效解磷菌，研究其解磷、分泌IAA等特性，為專用生物復合肥研制提供理論基礎，以解決降香黃檀、檀香幼苗（幼林）長勢差、生長緩慢等問題，到達減少化肥施用量、降低生產(chǎn)成本的目的。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 土樣采集 在海南省降香黃檀、檀香種植區(qū)（澄邁、定安、尖峰、東方、白沙等地），利用五點隨機采樣法，采集3、4、5、6、7、10年生的降香黃檀、檀香根際土壤（20～40 cm），裝入保鮮袋（無菌）中，冷凍保存帶回實驗室分離。

1.1.2 供試培養(yǎng)基 PKO無機磷培養(yǎng)基、蒙金娜有機磷細菌培養(yǎng)基、King氏培養(yǎng)基、LB培養(yǎng)基等[13]。

1.2 方法

1.2.1 根際高效解磷細菌的分離 稱取樣品10 g（不同林齡的降香黃檀、檀香土樣），置入裝有90 mL無菌水的三角瓶中，振蕩20 min，制成土壤懸液。采用10倍稀釋法配制濃度梯度為10-4、10-5、10-6的土壤懸液樣品，用于解磷細菌的分離。每個濃度梯度吸取100 uL涂布于PKO無機磷固體培養(yǎng)基上，重復3次，恒溫28 ℃培養(yǎng)2～4 d。挑選長勢較好的單菌落，做好標記后選用LB固體培養(yǎng)基進行純化，4 ℃保存。

1.2.2 菌株解磷能力測定 定性測定：將分離純化后的培養(yǎng)物采用PKO無機磷固體培養(yǎng)基、恒溫28 ℃培養(yǎng)4 d，記錄D/d（溶磷圈直徑/菌落直徑）值，篩選D/d 值較大的菌株，用LB培養(yǎng)基斜面保存。

定量測定：在250 mL三角瓶中加入滅菌的100 mL PKO無機磷液體培養(yǎng)基或蒙金娜有機磷液體培養(yǎng)基，取1 mL待測菌株菌懸液（108 cfu/mL）分別加入到250 mL三角瓶中，160 r/min，恒溫30 ℃培養(yǎng)7 d，測定培養(yǎng)介質(zhì)pH值；對照組用1 mL無菌水替換1 mL菌液，其余條件不變。將培養(yǎng)液4 ℃，10 000 r/min離心10 min，取上清液。采用鉬銻抗比色法測定上清液OD700 nm值，根據(jù)標準曲線計算菌株的無機磷（有機磷）溶量[14]。

1.2.3 菌株分泌IAA能力測定 用分光光度計，采用Salkowski比色法[15]測定波長530 nm的OD值，根據(jù)標準曲線換算出IAA分泌量，并各測定各菌液的環(huán)境pH值。

1.2.4 菌株鑒定 菌株形態(tài)觀察：記錄待鑒定菌株在蒙金娜有機磷固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)2 d的菌落特征，用顯微鏡觀察菌體形態(tài)特征。

生理生化：參照《伯杰氏細菌鑒定手冊》（第八版）及《常見細菌系統(tǒng)鑒定手冊》（東秀珠編），進行細菌生理生化試驗。

16 S rRNA序列測定及分析：以提取的待測細菌菌株基因組DNA為模板，選用細菌16 S rRNA基因通用引物27F和1492R，進行PCR擴增。PCR反應條件：94 ℃ 5 min，94 ℃ 1 min，55 ℃ 30 s，72 ℃ 1 min，循環(huán)30個，72 ℃ 10 min。將所得產(chǎn)物樣品送至上海博尚生物技術(shù)公司測序，測序結(jié)果在NCBI中進行BLAST分析，利用EGA5.05軟件，使用Neighbor-Joining法進行計算分析（Bootstraps=1 000），構(gòu)建菌株系統(tǒng)進化樹。

1.3 數(shù)據(jù)分析

采用SPSS 19.0進行方差分析和多重比較（LSD法和Duncan檢驗），并用Excel 2010制作圖表。

2 結(jié)果與分析

2.1 根際高效解磷細菌的分離、篩選

2.1.1 解磷細菌的分離純化 利用PKO無機磷培養(yǎng)基，從不同林齡（3、4、5、6、7、10 a）的降香黃檀、檀香根際土壤，分離純化出可培養(yǎng)物187個。菌落呈近圓形或橢圓形、白色或黃色、半透明或不透明、大部分表面扁平、邊緣規(guī)則、生長速度中等。

2.1.2 菌株解磷能力定性測定 利用溶磷圈法在PKO無機磷固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)4 d，測定各菌株溶解磷酸鈣能力，篩選出D/d值大于1.5的菌株共計19株（圖1）。其中9株菌株的D/d值在1.5～2.0之間，占測定菌株的47.36%；D/d值在2.0～2.5間的菌株有6株，占測定總數(shù)的31.58%；有4株的D/d值大于2.5，占測定總數(shù)的21.05%。溶解磷酸鈣能力較強菌株是DosaP25，D/d值達到4.1；其次是DosaP7，D/d值為3.23。

2.1.3 菌株解磷能力定量測定 各菌株溶解無機磷（磷酸鈣）的量在9.23～223.27 μg/mL之間（表1），其中3株菌的無機磷溶量在170 μg/mL以上，占供試菌株的15.79%。DosaP25溶解磷酸鈣的量高達223.27 μg/mL，其次是DosaP15和DosaP23，分別達196.47、174.32 μg/mL。無機磷溶量在20～100 μg/mL間的菌株有9株，占供試總數(shù)的47.37%；5株菌株的無機磷溶量在20 μg/mL以下，占供試總數(shù)的26.32%。除菌株DosaP2與DosaP10間無顯著差異外，其它菌株間均達到顯著差異（p<0.05）。DosaP25的溶解無機磷能力是DosaP5（9.23 μg/mL）的24.19倍，是對照組（4.55 μg/mL）的49.07倍。

同時測定各菌株對有機磷（卵磷脂）的溶解能力，供試菌株對卵磷脂的溶解量在0.43～25.05 μg/mL之間。有機磷溶量在10 μg/mL以下的菌株有13株，占供試總數(shù)的68.42%；5株菌株的有機磷溶量在10～20 μg/mL之間，占供試總數(shù)的26.32%；其中DosaP15溶解卵磷脂的能力最強，達到25.05 μg/mL，其次是DosaP25（19.22 μg/mL）。菌株DosaP3與DosaP9、DosaP4與DosaP16之間卵磷脂溶解量無顯著差異，其余菌株之間差異顯著（p<0.05）。DosaP15、DosaP25溶解有機磷的能力分別是DosaP5的58.26、44.70倍。

2.1.4 菌株解磷能力與終點pH值間關系 PKO無機磷、蒙金娜有機磷液體培養(yǎng)基的起始pH值均為7.2，各菌株PKO無機磷培養(yǎng)液終點pH值的測定結(jié)果顯示：終點pH值偏酸且隨著磷酸鈣溶解量的增加呈下降趨勢，對照組的pH值在7.0附近略微變化（圖2）。DosaP15溶解磷酸鈣的量達223.27 μg/mL，對應的培養(yǎng)液終點pH值為5.62。17株菌株的培養(yǎng)液終點pH值在6.0～7.0之間，占供試菌株的89.47%。菌株對磷酸鈣的溶解量與培養(yǎng)液終點pH值之間不存在顯著的線性回歸關系，R2（相關系數(shù)）僅為0.850 6。

各菌株蒙金娜有機磷培養(yǎng)液終點pH值的測定結(jié)果表明：與磷酸鈣的溶解量相比，隨著卵磷脂溶解量的增加，終點pH值的下降趨勢更加明顯（圖3）。6株菌株的培養(yǎng)液終點pH值在5.23～6.0之間，占供試菌株總數(shù)的31.58%；菌株DosaP15溶解卵磷脂的量最大，其培養(yǎng)液終點pH值（5.23）下降明顯；對照組的pH值無明顯變化。菌株溶解卵磷脂的量與終點pH值之間的相關系數(shù)為0.536，表明兩者之間無顯著線性回歸關系。

菌株的PKO無機磷、蒙金娜有機磷培養(yǎng)液終點pH值絕大部分集中在6.5左右，而對照組的起始pH值與終點pH值均在7.0左右。這些說明解磷細菌分泌一些酸性物質(zhì)，使得H+數(shù)量增加導致pH值下降。DosaP5的終點pH值（6.13）低于DosaP14（6.15），但DosaP14的卵磷脂溶量（4.35 μg/mL）遠高于DosaP5（0.43 μg/mL）。表明，解磷細菌溶解磷的能力不完全取決于培養(yǎng)介質(zhì)中H+的數(shù)量。

2.1.5 菌株分泌IAA能力測定 結(jié)果顯示（表2），10株菌株具有分泌IAA能力，占供試總數(shù)的52.63%；分泌IAA量在25 μg/mL以上的菌株有3株，即DosaP25（32.14 μg/mL）、DosaP23（28.7 μg/mL）、DosaP15（27.53 μg/mL）。各菌株之間分泌IAA能力差異顯著，其中DosaP25（32.14 μg/mL）分泌IAA量是DosaP5（4.56 μg/mL）的7.05倍。

King氏液體培養(yǎng)基的起始pH值為7.2，各菌株分泌IAA量與培養(yǎng)液終點pH值之間的相關系數(shù)R2為0.944，表明菌株分泌IAA量與終點pH值之間無顯著的線性回歸關系（圖4）。隨著菌株分泌IAA量的增加，培養(yǎng)液終點pH值呈下降趨勢；無分泌IAA能力菌株培養(yǎng)介質(zhì)終點pH值偏中性或堿性，說明菌株分泌IAA導致培養(yǎng)介質(zhì)中H+數(shù)量增加從而引起pH值下降。

2.2 菌株鑒定

2.2.1 菌株形態(tài)學觀察 挑選有機磷溶量在19.0 μg/mL、無機磷溶量在190.0 μg/mL、分泌IAA能力在27.0 μg/mL以上的菌株DosaP15、DosaP25進行形態(tài)學觀察。

在蒙金娜有機磷固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)2 d，DosaP15菌落呈污白色，近圓形、半透明或不透明、表面光滑、邊緣整齊、生長較慢；DosaP25菌落呈淡黃色，近圓形、不透明、表面光滑、中間隆起、邊緣整齊，生長較快（圖5）。

DosaP15革蘭氏染色陽性，細桿狀，單個或成對排列，大小為（2.2～2.8）μm×（0.6～0.7）μm，產(chǎn)芽孢；DosaP25革蘭氏染色陽性，桿狀，兩端鈍圓，多個排列時成短鏈，大小為（2.2～3.0）μm×（0.7～0.8）μm，產(chǎn)芽孢（圖6）。

2.2.2 菌株生理生化實驗 DosaP15、DosaP25的主要生理生化指標試驗結(jié)果表明（表3）， 兩者相同點在于運動性試驗、V.P試驗、過氧化氫試驗為陽性，不產(chǎn)氣，可利用葡萄糖、果糖、檸檬酸鹽，液化明膠；在2% NaCl、5% NaCl中均可生長，5 ℃不生長，耐受溫度為41 ℃，產(chǎn)芽孢。不同點在于DosaP15 甲基紅試驗為陽性，不能利用乳糖，不可水解淀粉，硫化氫、硝酸鹽還原試驗陰性；DosaP25甲基紅試驗為陰性，可利用乳糖，水解淀粉，硝酸鹽還原、硫化氫試驗陽性。結(jié)合形態(tài)學特征和生理生化指標，初步判斷DosaP15、DosaP25屬于芽孢桿菌科，芽孢桿菌屬。

2.2.3 16 S rRNA基因序列測定及分析 將待鑒定菌株16 S rRNA基因測序所得序列，采用BLAST進行同源性比較，與GenBank中的核酸數(shù)據(jù)對比分析，DosaP15與Bacillus pumilus（JX 102495）同源性達99%，DosaP25與Bacillus subtilis（KF 831377）同源性達99%。選取同源性較高的代表菌株，以16 S rRNA基因序列為基礎，構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹（圖7、8）。相比芽孢桿菌屬的其它種，DosaP15與短小芽孢桿菌的遺傳進化距離最近，同處一個最小分支；DosaP25與枯草芽孢桿菌的遺傳進化距離最近，同處一個最小分支。將DosaP15、DosaP25的形態(tài)特征、生理生化測定指標與表4[16-17]進行對比，發(fā)現(xiàn)DosaP15、DosaP25的主要特征分別與短小芽孢桿菌和枯草芽孢桿菌相一致。結(jié)合16 S rRNA序列分析，初步鑒定DosaP15為短小芽孢桿菌、DosaP25為枯草芽孢桿菌。

3 討論與結(jié)論

土壤中磷素循環(huán)以微生物活動為中心，微生物活動對土壤磷素的轉(zhuǎn)化影響很大。土壤微生物在植物根系區(qū)間的生態(tài)分布數(shù)量遠高于非根系土壤區(qū)間。植物的代謝物質(zhì)通過根系進入土壤中，不僅能作為微生物繁殖的營養(yǎng)物質(zhì)，甚至對一些菌群的生長起到刺激作用。Kabznelson等[18]和趙小蓉等[19]研究發(fā)現(xiàn)，解磷菌在植物根際土壤中的分布數(shù)量比非根際土多出1～2個數(shù)量級。

溶磷圈法只能作為初篩解磷微生物的方法，D/d值不能完全反應菌株的溶磷量。本研究中，溶磷圈法初篩的D/d值DosaP15（1.89）小于DosaP23（3.0），而DosaP15的無機磷溶量（196.47 μg/mL）、有機磷溶量（25.05 μg/mL）均高于DosaP23（174.32、19.22 μg/mL）。Kucey等[20]研究也證實了溶磷圈法只能用于初篩解磷菌。另外，不同根際解磷菌株的解磷能力存在較大差異，DosaP25溶解磷酸鈣的量（223.27 μg/mL）是DosaP5（9.23 μg/mL）的24.19倍，DosaP15、DosaP25溶解卵磷脂的量（25.05、19.22 μg/mL）分別是DosaP5（0.43 μg/mL）的58.26、44.70倍。這可能與植物所處的土壤類型、土壤肥力、氣候及植物的年齡、長勢等綜合因素有關。林啟美等[21]研究證實了不同土壤生態(tài)環(huán)境中解磷菌分布存在較大差異，菜地土壤中有機磷細菌數(shù)量是林地、草地、農(nóng)田的10倍。

對于解磷菌的解磷機理，尚未有一個準確的定論，不同菌株的解磷機理有所差別。在土壤無機磷缺乏的情況下，解磷菌通過分泌核酸酶、磷酸酶及植酸酶等，溶解有機磷轉(zhuǎn)化成無機磷酸鹽的形式。一般認為，解磷菌溶解無機磷與自身分泌酸性物質(zhì)有關，這些物質(zhì)可降低pH值，能與Al3+、Mg2+、Ca2+、Fe3+、Fe2+等離子結(jié)合，從而溶解難溶性磷酸鹽。不同解磷菌株分泌有機酸的種類存在較大差別，如席琳喬等[22]從棉花根際分離出的解磷菌可分泌酒石酸、乙酸、檸檬酸、丁二酸，而朱穎[23]從三葉草根際土壤中分離的解磷菌可產(chǎn)草酸、酒石酸、乳酸、檸檬酸、蘋果酸。一些解磷菌還可分泌植物激素IAA且不同菌株分泌IAA量存在明顯差異。如DosaP25分泌IAA量是DosaP5的7.05倍；李顯剛等[24]從百脈根根際土壤篩選出11株具有分泌IAA能力的溶磷菌，其中菌株LC20分泌IAA能力是LC5的4.62倍。本研究中菌株的解磷能力、分泌IAA能力與培養(yǎng)介質(zhì)終點pH均無顯著相關性，各菌株培養(yǎng)介質(zhì)終點pH與起始pH相比呈下降趨勢，對照組的培養(yǎng)介質(zhì)pH無明顯變化呈中性或略偏堿性。與趙小蓉等[25]研究發(fā)現(xiàn)解磷菌的溶磷量與培養(yǎng)介質(zhì)pH值及有機酸分泌量均無顯著相關性的結(jié)果相近。菌株的磷酸鈣溶量、卵磷脂溶量、IAA分泌量與培養(yǎng)介質(zhì)終點pH之間的相關系數(shù)存在如下關系，R32（0.944）>R12（0.8506）>R22（0.536）。說明IAA分泌量與培養(yǎng)介質(zhì)終點pH之間的關系更為密切，證實了解磷細菌通過分泌一些酸性物質(zhì)，使得質(zhì)子數(shù)量增加導致pH值下降。下一步將對篩選出的高效解磷菌作進一步研究，以用于專用生物復合肥的研制。

參考文獻

[1] 馮月紅， 姚 拓， 龍瑞軍. 土壤解磷菌研究進展[J]. 草原與草坪， 2003（1）： 3-7.

[2] 王光華， 周可琴， 金 劍. 不同碳源對三種溶磷真菌溶解磷礦粉能力的影響[J]. 生態(tài)學雜志， 2004， 23（2）： 32-36.

[3] 任嘉紅， 劉 輝， 吳曉蕙， 等. 南方紅豆杉根際溶無機磷細菌的篩選、 鑒定及其促生效果[J]. 微生物學報， 2012， 52（3）： 295-303.

[4] 邱 勤， 張 磊， 韓 光， 等. 使用PGPR菌劑及苜蓿培肥新墾地土壤研究[J]. 西南大學學報（自然科學版）， 2011， 33（5）： 109-115.

[5] Malik K A， Rakhshanda Bilal. Association of Nitrogen-Fixing Plant Growth Promoting Rhizobateria（PGPR）with Kallar Grass and Rice[J]. Plant and Soil， 1997， 49（7）： 37-44.

[6] 喬志偉， 洪堅平， 謝英荷， 等. 石灰性土壤拉恩式溶磷細菌的篩選鑒定及溶磷特性[J]. 應用生態(tài)學報， 2013， 24（8）： 2 294-2 300.

[7] Wang W B. Study on sustainable development countermeasures for redwoods tree species in China[J]. Journal of Fujian Forestry Science and Technology， 2003， 30（4）： 108-111.

[8] Yu J G. Studies on the chemical constituents of Chinese sandalwood oil and preliminary structures of five novel compounds[J]. Acta Pharm Sin， 1988， 23（11）： 868-872.

[9] 黃 星. 降香黃檀籽黃酮的提取分離及生理活性研究[D]. 無錫： 江南大學， 2011.

[10] Chen W Q， Zhong L， Zhang L， et al. Chinese medicine tongxinluo significantly lowers serum lipid levels and stabilizes vulnerable plaques in a rabbit model[J]. J Ethnopharmacol， 2009， 124： 103-110.

[11] 陸俊錕. 印度檀香與寄主植物間寄生關系的研究[D]. 北京： 中國林業(yè)科學研究院， 2011.

[12] 陳 榮， 張新華， 馬國華. 檀香與不同豆科植物寄生關系的研究[J]. 熱帶亞熱帶植物學報， 2014， 22（1）： 53-60.

[13] 李 蓉. 杉木PGPR菌分離篩選及其微生物復合菌肥研制[D]. 長沙： 中南林業(yè)科技大學， 2012： 16-18.

[14] 李玉娥， 姚 拓， 榮良燕. 溶磷菌溶磷和分泌IAA特性及對苜蓿生長的影響[J]. 草地學報， 2010， 18（1）： 84-88.

[15] 田宏， 張德罡， 姚 拓， 等. 禾本科草坪草固氮菌株篩選及部分特性初步研究[J]. 中國草地， 2005， （5）： 47-52.

[16] Buchannan R E， Gibbonr N E. 伯杰氏細菌鑒定手冊[M]. 北京： 科學出版社， 1984， 729-759.

[17] 東秀珠， 蔡妙英. 常見細菌系統(tǒng)鑒定手冊[M]. 北京： 科學出版社， 2001， 62-64.

[18] H. Kabznelson， E A. Peterson and J W. Rouatt. Phosphate-dissolving microorgan isms on seed and in the root zone of plants[J]. Canandian Journal of Botany， 1962， 40（9）： 1 181-1 186.

[19] 趙小蓉， 林啟美， 孫焱鑫， 等. 玉米根際與非根際解磷細菌的分布特點[J]. 生態(tài)學雜志， 2001， 20（6）： 62-64.

[20] RMN. Kucey， Phosphate-solubilizing bacteria and fungi in various cultivated and virgin alberta soil[J]. Can J Soil Sci， 1983， 63： 671-678.

[21] 林啟美， 趙小蓉. 四種不同生態(tài)環(huán)境中解磷細菌的數(shù)量及種群分布[J]. 土壤與環(huán)境， 2000， 9（1）： 34-37.

[22] 席琳喬， 王靜芳， 馬金萍， 等. 棉花根際解磷菌的解磷能力和分泌有機酸的初步測定[J]. 微生物學雜志， 2007， 27（05）： 70-74.

[23] 朱 穎. 三葉草根際溶磷菌特性及促生效果研究[D]. 蘭州： 甘肅農(nóng)業(yè)大學， 2011.

[24] 李顯剛， 王小利， 姚 拓. 溶磷菌的溶磷、 分泌IAA及有機酸特性研究[J]. 土壤通報， 2012， 43（6）： 1 385-1 390.

[25] 趙小蓉， 林啟美， 李寶貴. 微生物溶解磷礦粉能力與pH及分泌有機酸的關系[J]. 微生物雜志， 2003， 23（3）： 5-7.