檀香與其偽品非洲檀香、澳洲檀香的鑒別

黃小龍，歐倩清，楊麗，莫偉，張丹雁（.廣州中醫(yī)藥大學中藥學院，廣東廣州 50006；.廣州采芝林藥業(yè)有限公司，廣東廣州 50360）

檀香來源于檀香科檀香屬植物檀香（Santalum albumL.）樹干的干燥心材[1]，主產(chǎn)于印度、印度尼西亞及緬甸等地。1962 年我國從印尼引進檀香并先后種植于云南、廣東、四川和海南等地，但目前檀香原料大部分仍依賴進口[2]。檀香性溫，味辛，歸脾、胃、心、肺經(jīng)，具有行氣溫中、開胃止痛的功效，臨床常用于治療寒凝氣滯，胸痛、胃痛食少等癥[1]。此外，檀香因其獨特誘人的香氣成為中國傳統(tǒng)的四大香料（沉香、檀香、麝香、龍涎香）之一，自古被廣泛用于制作香熏品、文玩飾品及佛教祭祀品等，素有“黃金樹”之稱。檀香香材形成時間長，自然條件下需生長10 年以上方可形成心材，30 年左右才能供香用及藥用[3]，故檀香資源緊張、價格昂貴，市場常有大量偽劣品。既往研究[4-8]表明檀香偽品種類多，摻偽嚴重。本課題組市場調(diào)研發(fā)現(xiàn)，市場常見檀香偽品有非洲檀香（檀香科非洲沙針Osyris lanceolata）、澳洲檀香（即西澳檀香，為檀香科大果澳洲檀香Santalumspicatum）樹干的干燥心材，兩者香氣及外觀等特征與正品檀香有一定相似度，非專業(yè)人士不易區(qū)分，故非洲檀香、澳洲檀香常被人為冒充檀香的情況屢見不鮮，嚴重影響了檀香的正常藥用和臨床療效。本研究通過對比分析檀香與其偽品（非洲檀香、澳洲檀香）的性狀、顯微、薄層及揮發(fā)油含量及成分特征，探討檀香及其偽品的鑒別要點，以期建立快速有效的檀香真?zhèn)舞b別方法。

1 實驗樣品、儀器及試劑

1.1 樣品檀香、非洲檀香、澳洲檀香各3批，樣品信息詳見表1。所有樣品均購自廣州合贏醫(yī)藥科技有限公司，經(jīng)廣州中醫(yī)藥大學中藥鑒定教研室張丹雁教授鑒定，樣品標本保存于廣州中醫(yī)藥大學中藥鑒定教研室。

表1 檀香及其偽品的樣品信息Table 1 Sample information sheet of Santali Albi Lignum and its counterfeits

1.2 實驗儀器S120 佳能數(shù)碼相機，日本佳能公司；連續(xù)變倍體視顯微鏡、OPTEC BK5000 生物顯微鏡、OPTPro3 數(shù)碼攝像系統(tǒng)，奧特光學儀器有限責任公司；DFT-50 手提式高速萬能粉碎機，浙江溫嶺市林大機械有限公司；DS-1500A電子天平，佛山市順德區(qū)拓普域電子有限公司；FA-1004N萬分之一分析天平，上海菁海儀器有限公司；Agilent7693 自動進樣器、Agilent7890B 氣相色譜儀、Agilent5977 質(zhì)譜儀，美國安捷倫公司。

1.3 實驗試劑及試藥水合氯醛，天津市大茂化學試劑廠，批號：20220103；甘油、對二甲氨基苯甲醛，上海麥克林生化科技有限公司，批號分別為：C10208379、C14506615；氫氧化鈉、乙酸乙酯，天津市致遠化學試劑有限公司，批號分別為：2019102008、2021082054；乙醚，廣東廣試試劑科技有限公司，批號：2021080102；石油醚（60～90 ℃）、磷酸，天津市百世化工有限公司，批號分別為：20190804、20181102；冰醋酸，國藥集團化學試劑有限公司，批號：20120831；檀香醇對照品，成都德思特生物技術(shù)有限公司，批號：DSTDT005901；檀香油，中國食品藥品檢定研究院，批號：110789-201906。以上試劑及試藥均為分析純。石油醚（60～90 ℃，HPLC 級），天津市百世化工有限公司，批號：20210105。

2 方法

2.1 性狀鑒別通過眼觀、手摸、鼻聞、口嘗、火試等方法觀察比較檀香及其偽品的形狀、顏色、紋理、質(zhì)地、斷面、氣味等特征并用相機拍照記錄。

2.2 微性狀鑒別通過體視顯微鏡觀察檀香表面紋理，射線、弦向薄壁組織、導(dǎo)管孔等各組織的排列方式等肉眼難以觀察到的半顯微特征，并通過體視顯微鏡拍照，景深合成得到清晰的微性狀圖片。

2.3 顯微鑒別

2.3.1三切面徒手切片顯微鑒別 取具完整三切面的樣品，熱水浸泡30 min 進行軟化；再進行徒手切片，分別取樣品的橫切面，徑切面及弦切面薄片，置于載玻片上加水合氯醛加熱透化，制成水合氯醛透化片。在光學顯微鏡下鏡檢，拍攝照片，進行樣品之間的對比鑒定。

2.3.2粉末顯微鑒別 取樣品粉末過4 號篩，挑取少許置載玻片上，滴加水合氯醛試液，在酒精燈下加熱透化，并滴加稀甘油，蓋上蓋玻片，制成臨時水合氯醛加熱透化片。在光學顯微鏡下鏡檢，拍攝照片，進行樣品之間的對比鑒定。

2.4 薄層色譜鑒別

2.4.1對照品溶液的制備 取檀香醇對照品，加乙醚制成每1 mL含檀香醇5 μL的溶液，并取檀香的揮發(fā)油加乙醚制成每1 mL 含揮發(fā)油10 μL 的溶液，作為對照品溶液。

2.4.2樣品溶液的制備 揮發(fā)油提?。簩⑻聪慵捌鋫纹窐悠反蚍圻^24 目篩，精密稱定30 g 左右粉末，置于500 mL 圓底燒瓶中，加300 mL 蒸餾水；根據(jù)2020 年版《中國藥典》四部“通則2204”中揮發(fā)油測定法甲法提取揮發(fā)油，提取約4 h，至揮發(fā)油測定器中油量無增加時停止加熱，靜置冷卻，轉(zhuǎn)移到離心管中備用。樣品溶液制備：取樣品揮發(fā)油加乙醚制成每1 mL 含揮發(fā)油10 μL 的溶液，作為供試品溶液。

2.4.3薄層實驗方法 參照《中國藥典》薄層色譜法“通則0502”試驗，吸取對照品及供試品溶液各2 μL，分別點于同一硅膠G 薄層板上，以石油醚（60～90 ℃）-乙酸乙酯（17∶3）為展開劑，展開，取出，晾干。噴以對二甲氨基苯甲醛溶液（取對二甲氨基苯甲醛0.25 g，溶于冰醋酸50 g 中，加85%磷酸溶液5 g與水20 mL，混勻），在80～90 ℃加熱至斑點顯色清晰。對比分析對照藥材與各樣品斑點位置、顏色、比移值（Rf）等情況。

2.5 揮發(fā)油含量測定及成分分析

2.5.1揮發(fā)油含量測定 同“2.4.2”項下方法提取揮發(fā)油，計算各樣品揮發(fā)油提取率，并收集揮發(fā)油。揮發(fā)油提取率（%）=（所得揮發(fā)油體積/樣品質(zhì)量）×100%。

2.5.2GC-MS 法測定揮發(fā)油化學成分 （1）標準品溶液制備：分別精密吸取檀香醇、檀香揮發(fā)油對照品20 μL，用色譜級石油醚定容至2 mL，過0.22 μm 微孔濾膜，備用。（2）樣品溶液制備：分別精密吸取“2.5.1”項下所得的檀香及非洲檀香、澳洲檀香的揮發(fā)油20 μL，用色譜級石油醚定容至2 mL，過0.22 μm 微孔濾膜，備用。（3）GC-MS 檢測條件：進樣量為1 μL；程序升溫：起始溫度為70 ℃，先以2 ℃·min-1升溫至140 ℃，保持20 min，再以2 ℃·min-1升溫至180 ℃，最后以10 ℃·min-1升溫至220 ℃，保持10 min。質(zhì)譜條件：離子源：EI 源；離子源溫度：230 ℃；電子碰撞能量：70 eV；接口溫度：280 ℃；掃描范圍（m/z）：50～550；溶劑延遲3 min。

2.5.3結(jié)果分析方法 利用計算機自動檢索功能，將GC-MS 法所得的數(shù)據(jù)及譜圖在NIST14標準譜庫中自動檢索對照，對質(zhì)譜相似度＞80%的化合物進行收集整理，并用峰面積歸一化法計算各化合物的相對百分含量，得到揮發(fā)油化學組成成分及相對百分含量。

3 結(jié)果

3.1 性狀鑒別見表2 和圖1。檀香：圓柱形或不規(guī)則塊狀，碎塊中間有圓形孔洞；外表面灰黃色至黃褐色，光滑細膩；斷面棕黃色，有光澤，顯油性，棕色同心環(huán)紋寬且較明顯，有時空心；質(zhì)堅實，不易折斷；氣香濃郁。非洲檀香：形同檀香；外表面紅棕色，木紋稍粗，偶見疤節(jié)；斷面紅棕色，同心環(huán)紋較窄或不甚明顯；質(zhì)堅實，油性差；香氣稍濃而略帶樟香氣。澳洲檀香：形同檀香；表面淺黃色至淺黃棕色，久置棕紅色，紋理細膩；斷面淺黃色至淺黃棕色，中央顏色較深，偶見裂隙，同心環(huán)紋清晰明顯；質(zhì)堅硬，略顯油性；氣芳香清甜。

圖1 檀香及其偽品性狀圖Figure 1 Characteristics chart of Santali Albi Lignum and its counterfeits

表2 檀香及其偽品性狀特征鑒別Table 2 The identification of characteristic feature in Santali Albi Lignum and its counterfeits

3.2 微性狀鑒別檀香與其偽品微性狀見表3和圖2。

圖2 檀香及其偽品微性狀特征圖Figure 2 Microscopical characteristic chart of Santali Albi Lignum and its counterfeits

表3 檀香及其偽品微性狀特征Table 3 The identification points in microscopical characteristics of Santali Albi Lignum and its counterfeits

3.3 顯微鑒別

3.3.1三向切面顯微特征 檀香及其偽品三切面顯微特征見表4及圖3～圖5。

圖3 檀香三切面顯微特征圖Figure 3 Microscopic characteristic charts of three cross-section of Santali Albi Lignum

圖4 非洲檀香三切面顯微特征圖Figure 4 Microscopic characteristic charts of three cross-section of Osyris lanceolata Lignum

圖5 澳洲檀香三切面顯微特征圖Figure 5 Microscopic characteristic charts of three cross-section of Santalum spicatum Lignum

表4 檀香及其偽品三切面顯微特征Table 4 Microscopic characteristics of three-way cross section of Santali Albi Lignum and its counterfeits

3.3.2粉末顯微鑒別 檀香及其偽品粉末顯微特征見表5及圖6～圖8。

圖6 檀香粉末顯微特征圖Figure 6 Microscopic characteristics charts of powder of Santali Albi Lignum

圖7 非洲檀香粉末顯微特征圖Figure 7 Microscopic characteristics charts of powder of Osyris lanceolata Lignum

圖8 澳洲檀香粉末顯微特征圖Figure 8 Microscopic characteristics charts of powder of Santalum spicatum Lignum

表5 檀香及其偽品粉末顯微特征Table 5 Microscopic characteristics of powder of Santali Albi Lignum and its counterfeits

3.4 薄層色譜鑒別薄層色譜鑒別結(jié)果顯示，檀香與非洲檀香、澳洲檀香以及對照品檀香醇均在Rf 值約為0.39 處相顯藍紫色斑點，其中檀香斑點最為明顯，澳洲檀香斑點不明顯；檀香與檀香油在相應(yīng)位置顯相同顏色斑點；在Rf值為0.60處，檀香油、檀香和非洲檀香有紫色斑點，澳洲檀香無斑點；在Rf值為0.69處，檀香油和檀香顯明顯藍色斑點，而非洲檀香顯紫色斑點，澳洲檀香無斑點；檀香和非洲檀香斑點位置相似，但斑點顏色存在差別，可據(jù)此區(qū)分。見圖9。

圖9 檀香及其偽品薄層色譜圖Figure 9 The thin layer chromatogram of Santali Albi Lignum and its counterfeits

3.5 揮發(fā)油含量測定結(jié)果檀香揮發(fā)油含量范圍在3.65%～4.34%之間，平均值為4.11%；非洲檀香揮發(fā)油含量范圍在0.17%～1.06%之間，平均值為0.67%；澳洲檀香揮發(fā)油含量范圍在1.64%～3.68%之間，平均值為2.49%。其中檀香揮發(fā)油含量最高，且含量符合《中國藥典》規(guī)定的標準[含揮發(fā)油不得少于3.0%（mL/g）]，非洲檀香和澳洲檀香揮發(fā)油含量均低于3.0%。見表6。

表6 檀香及其偽品揮發(fā)油含量（±s，%；n=3）Table 6 Volatile oil content of Santali Albi Lignum and its counterfeits（±s，%；n=3）

表6 檀香及其偽品揮發(fā)油含量（±s，%；n=3）Table 6 Volatile oil content of Santali Albi Lignum and its counterfeits（±s，%；n=3）

序號T1 T2 T3提取率4.34 ± 0.14 3.65 ± 0.00 4.34 ± 0.00序號T4 T5 T6提取率1.04 ± 0.03 0.79 ± 0.05 0.22 ± 0.09序號T7 T8 T9提取率2.37 ± 0.06 3.36 ± 0.37 1.75 ± 0.12

3.6 揮發(fā)油GC-MS 分析檀香以T1 號樣品為例，總離子流圖見圖10；非洲檀香以T4 號樣品為例，總離子流圖見圖11；澳洲檀香以T7 號樣品為例，總離子流圖見圖12。共鑒定出93 個成分。檀香與其偽品揮發(fā)油成分種類及含量存在明顯差異， 檀香及其偽品主要共有成分為α-檀香醇及Z-α-反式-佛手柑等。檀香主要成分為α-檀香醇（55.82%～58.20%）和β-檀香醇（25.94%～26.93%），其次是Z-α-反式-佛手柑（4.02%～5.95%）、順式澳白檀醇（0～1.11%）；非洲檀香主要成分為順式澳白檀醇（68.86%～75.88%），其次是Z-α-反式-佛手柑（14.61%～20.73%），而α-檀香醇（0～18.96%）和β-檀香醇（1.92%～14.84%）含量較低；澳洲檀香主要成分為反式-6-（對甲苯基）-2-甲基-2-庚烯醇（17.15%～31.64%），而α-檀香醇（0～0.14%）及Z-α-反式-佛手柑（0～1.61%）含量極低，且未檢出β-檀香醇。檀香特有成分為2-（3-hydroxyprop-1-ynyl）-adamantan-2-ol（0.57%～0.78%）、（-）-異長葉醇（0.42%～0.63%）、（E）-5-（（1R，3R，6S）-2，3-二甲基三環(huán)[2.2.1.02，6]庚-3-基）-2-甲基戊-2-烯醛（0～0.32%）等；非洲檀香特有成分為欖香素（0～23.97%）、octahydro-1，4，9，9-tetramethyl-1H-3a，7-methanoazulene（0～0.24%）、（1S，5S）- 4-亞甲基-1-[（R）-6 -甲基庚-5-烯-2-基]雙環(huán)[3.1.0]己烷（0～0.22%）；澳洲檀香特有成分為木香醇（0.25%～3.90%），3，7，11-三甲基-2，6，10-十二烷三烯-1-醇（0～15.65%）、1-（1，5-二甲基-4-己烯基）-4-甲基-3-環(huán)己烯-1-醇（0～5.94%）、8-Cedren-13-ol（3.44%～5.10%）、反式-橙花叔醇（0～4.53%）等。因此，可根據(jù)檀香與其偽品揮發(fā)油主要成分及其含量、特有成分等進行區(qū)分。

圖10 檀香樣品揮發(fā)油總離子流圖Figure 10 Total ion current chromatogram of Santali Albi Lignum

圖11 非洲檀香樣品揮發(fā)油總離子流圖Figure 11 Total ion current chromatogram of Osyris lanceolata Lignum

圖12 澳洲檀香樣品揮發(fā)油總離子流圖Figure 12 Total ion current chromatogram of Santalum spicatum Lignum

4 討論

本研究從性狀、顯微、薄層、揮發(fā)油含量及其成分多維度分析檀香與偽品非洲檀香、澳洲檀香的差異，結(jié)果表明檀香與偽品在性狀、微性狀、三相切面及粉末的顯微、薄層、揮發(fā)油及成分特征具有不同程度差異。其中檀香與其兩個偽品的性狀、微性狀及粉末顯微特征差異不太明顯，而三相切面顯微、薄層、揮發(fā)油含量及其成分特征存在明顯差異，據(jù)此可區(qū)別檀香正偽品。

從性狀及微性狀特征看，三者均具檀香氣，但正品檀香油性足，氣香濃郁，非洲檀香香氣稍濃而略帶樟香氣，澳洲檀香氣芳香清甜；檀香呈灰黃色至黃褐色，非洲檀香整體紅棕色，澳洲檀香呈淺黃色至淺黃棕色，久置表面呈棕紅色。此外，檀香與兩個偽品的微性狀特征無明顯差別，故三者性狀及微性狀特征比較差異不明顯，容易混淆，應(yīng)注意區(qū)別。

從粉末顯微特征看，檀香與兩個偽品的主要區(qū)別體現(xiàn)在分泌物顏色和草酸鈣方晶數(shù)量及大小上，檀香分泌物黃棕色或紅棕色，草酸鈣方晶少，兩偽品的分泌物均為紅棕色，草酸鈣方晶多。但鑒別要點少，需結(jié)合其他鑒別方法。

從三切面顯微特征看，橫切面，檀香木射線寬多1 ～ 2 列細胞，偶見3 列細胞，導(dǎo)管散生，單個排列，木薄壁組織排列不規(guī)則，散在；非洲檀香木射線寬1 ～ 3列細胞，導(dǎo)管散生，多單管孔，木薄壁細胞較少，單個散在；澳洲檀香木射線寬1 ～ 2 列細胞，多單列，多含紅棕色分泌物，導(dǎo)管2 ～ 3個成群存在，偶見單個散在，木薄壁細胞數(shù)個連結(jié)，常聚集在導(dǎo)管周圍略呈弦向帶狀，或單個散在；弦切面，檀香木射線高多5 ～ 15 個細胞，非洲檀香木射線高多4 ～ 10個細胞，澳洲檀香木射線高多4 ～ 16個細胞；徑切面，三者木射線均排列成橫向帶狀，射線異型，上下兩端均可見方形細胞，其中檀香及澳洲檀香的中間射線細胞為長條狀橫臥式，檀香射線細胞壁連珠狀增厚，非洲檀香的中間橫臥式射線細胞較短，為方形或長方形，檀香木薄壁細胞內(nèi)含草酸鈣方晶較少，非洲檀香及澳洲檀香草酸鈣方晶多，澳洲檀香方晶明顯偏大。故檀香與偽品三切面顯微特征區(qū)別明顯。

從薄層色譜看，檀香、非洲檀香及澳洲檀香與對照品檀香醇均在Rf值約為0.39處相顯藍紫色斑點，以檀香醇作為薄層色譜的對照品鑒別檀香不足以區(qū)別其正偽品。以檀香油作對照品時，檀香樣品與檀香油色譜斑點一致，檀香與非洲檀香的斑點位置相似，但斑點顏色存在差別，據(jù)此可區(qū)別非洲檀香。檀香和非洲檀香在Rf值為0.60處均有紫色斑點，而澳洲檀香此處則無斑點，且澳洲檀香樣品與檀香油斑點的位置及顏色大多不一致，據(jù)此可區(qū)分澳洲檀香。此外，《中國藥典》薄層檢驗中規(guī)定選用檀香醇或檀香揮發(fā)油作為對照品鑒別檀香，以檀香樣品與檀香醇在相應(yīng)的位置上均顯相同顏色斑點作為檀香正品的判斷依據(jù)。本實驗證明，以檀香醇做對照品無法有效鑒別檀香與偽品，而以檀香揮發(fā)油作對照品鑒別效果更佳。

從揮發(fā)油含量及成分看，檀香揮發(fā)油含量平均值為4.11%，符合《中國藥典》中檀香揮發(fā)油的含量標準（≥3.0%）；非洲檀香揮發(fā)油含量平均值為0.67%；澳洲檀香揮發(fā)油含量平均值為2.49%。兩個偽品的揮發(fā)油含量均低于檀香?，F(xiàn)代藥理研究表明，檀香揮發(fā)油是檀香的主要藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，具有抗氧化作用，對細胞氧化損傷有明顯的保護作用[9-10]，還有抗光致癌[11]等藥理活性，故揮發(fā)油含量是檢驗檀香品質(zhì)的重要指標。三者揮發(fā)油GC-MS分析共鑒定出93個成分，其中檀香及其偽品共有成分為α-檀香醇及Zα-反式-佛手柑等。檀香主要成分為α-檀香醇（55.82%～58.20%）和β-檀香醇（25.94%～26.93%），而非洲檀香中二者含量（分別為0～18.96%和1.92%～14.84%）較低，在澳洲檀香中α-檀香醇含量（0～0.14%）極低，且不含β-檀香醇；非洲檀香主要成分為順式澳白檀醇（68.86%～75.88%），澳洲檀香主要成分為反式-6-（對甲苯基）-2-甲基-2-庚烯醇（17.15%～31.64%）。此外，檀香特有成分為2-（3-hydroxyprop-1-ynyl）-adamantan-2-ol等，非洲檀香特有成分為欖香素等；澳洲檀香特有成分為木香醇等。

本研究通過對比分析檀香及其偽品（非洲檀香、澳洲檀香）的性狀、顯微、薄層色譜、揮發(fā)油含量及成分特征，系統(tǒng)闡明了檀香與非洲檀香、澳洲檀香的異同，為檀香的真?zhèn)舞b別及其臨床應(yīng)用提供了科學實驗數(shù)據(jù)，可為完善檀香的真?zhèn)舞b別方法及質(zhì)量評價標準奠定基礎(chǔ)。