京大戟中萜類含量測定

賈云云，羅士香

(淮安市食品藥品檢驗所，江蘇 淮安 223300)

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京大戟中萜類含量測定

賈云云，羅士香

(淮安市食品藥品檢驗所，江蘇 淮安 223300)

目的：考察京大戟醋制前后總萜類成分的含量變化，為京大戟醋制減毒機理的研究提供參考。方法：以香草醛-冰醋酸為顯色劑，大戟二烯醇為對照品，運用比色法測定京大戟中總萜類成分的含量。結果：京大戟中總萜類成分經(jīng)過醋制后略有降低，即生品>醋制品。結論：京大戟醋制后，總萜類成分含量有所降低，為研究京大戟醋制減毒機理提供了科學依據(jù)。

京大戟；毒性；醋制京大戟；含量變化

京大戟為大戟科多年生草本植物大戟EuphorbiapekinensisRupr.的根，是我國傳統(tǒng)中藥，收載于歷次版本的《中華人民共和國藥典》，性味苦、寒，有毒，歸肺、脾、腎經(jīng)，具有瀉水逐飲、消腫散結的功效，用于水腫脹滿、胸腹積水、痰飲積聚、氣逆喘咳、二便不利等證的治療[1]。京大戟主產(chǎn)于江蘇南京、揚州、邳州等地，此外，四川、福建、江西、湖南、湖北等地亦產(chǎn)[2]。京大戟為有毒中藥，其毒性嚴重制約著中醫(yī)臨床用藥的安全。 安全有效是藥物的基本屬性，藥品能否被社會接受不僅取決于其有效性的強弱，還在于其毒性的高低。而京大戟對消化系統(tǒng)、肝腎功能等有強烈的刺激性和致炎、促發(fā)致癌的毒性，嚴重制約著臨床用藥的安全，也為新藥創(chuàng)制帶來了困難[3-4]。本文考察京大戟醋制前后總萜類成分的含量變化，為京大戟醋制減毒機理的研究提供一定的參考。

1 儀器與試藥

1.1 儀器與試劑

九陽牌電磁爐、高速萬能磨粉機(天津泰斯特)、電子天平、電熱鼓風式干燥箱、UV2401可見紫外分光光度儀(日本島津公司)、HH-S恒溫水浴鍋(江蘇國勝實驗儀器廠)、電爐(天津泰斯特)、電熱鼓風式干燥箱、甲醇(色譜純)、冰醋酸(分析純)、高氯酸(優(yōu)質(zhì)純)、香草醛(分析純)。

1.2 試藥

京大戟藥材購自安徽省毫州市藥材總公司，產(chǎn)地為河北(批號：101206)，經(jīng)南京中醫(yī)藥大學巢建國教授鑒定為大戟科植物大戟(EuphorbiapekinensisRupr.)的干燥塊根。

2 方法

供試品制備：京大戟生品(JDJ-1)：取生京大戟，大小分檔，除去雜質(zhì)，于40℃烘箱干燥，過四號篩。京大戟醋制品(JDJ-2)：取凈京大戟，大小分檔，加入食醋拌勻，另加入純凈水(京大戟∶食醋∶水為10∶3∶40)，拌勻，浸潤2h，文火煮沸，煮至醋被吸盡。取出，室溫涼至六七成干，40℃烘箱干燥，打粉，過四號篩。

2.1 總萜顯色條件考察

2.1.1 顯色劑用量考察 ①香草醛-冰醋酸溶液的用量：精密稱取大戟二烯醇6.06mg，至50mL容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，制成大戟二烯醇標準品溶液。精密量取上述溶液1mL分別置于5個具塞試管中，水浴揮干溶劑，分別加入新配制的5%香草醛-冰醋酸溶液0.1、0.2、0.5、1.0、1.5mL，高氯酸0.8mL，搖勻。于70℃水浴加熱30min，取出，流水冷卻2min，精密加入冰醋酸5mL，搖勻。分別以相應的試劑作為空白，按照分光光度法(《中國藥典》2010年版一部附錄ⅤA分光光度法)于400～800nm進行全波長測定。結果見表1，見圖1(A)。

表1 香草醛-冰醋酸溶液用量考察

結果表明：隨著香草醛-冰醋酸溶液用量的增加，吸收度也相應增加。當加入5%香草醛-冰醋酸的量為0.5mL時吸收度最大，表明反應已近完全，所以選擇加入0.5mL 5%香草醛-冰醋酸溶液。

②高氯酸用量：精密量取大戟二烯醇一次稀釋液溶液1mL分別置于5個具塞試管中，水浴揮干溶劑，分別加入新配制的5%香草醛-冰醋酸溶液0.5mL，高氯酸0.4、0.6、0.8、1.0、1.2mL，搖勻。于70 ℃水浴加熱30min，取出，流水冷卻2min，精密加入冰醋酸5mL，搖勻。分別以相應的試劑為空白，采用分光光度法于400～800nm進行全波長測定。結果見表2，見圖1(B)。

表2 高氯酸用量考察

結果表明：隨著高氯酸溶液用量的增加，吸收度增加。當加入量為0.6mL時吸收度最大，表明此時溶液反應已近完全，故選擇加入0.6mL高氯酸溶液。

2.1.2 加熱溫度考察 精密量取大戟二烯醇標準品溶液1mL置于5個具塞試管中，水浴揮干溶劑，分別加入新配制的5%香草醛-冰醋酸溶液0.5mL，高氯酸0.6mL，搖勻。于60℃、70℃、80℃、90℃，沸水浴加熱30min，取出，流水冷卻2min，精密加入冰醋酸5mL，搖勻。分別以相應的試劑為空白，采用分光光度法于400～800nm進行全波長測定。結果見表3，見圖1(C)。

表3 加熱溫度考察

結果表明：隨著溫度的升高，溶液的吸收度增加，說明反應仍在進行中，沸水浴時吸收度最大，故選擇加熱溫度為100℃。

2.1.3 加熱時間考察 精密量取大戟二烯醇標準品溶液0.5mL置于5個具塞試管中，水浴揮干溶劑，分別加入新配制的5%香草醛-冰醋酸溶液0.5mL，高氯酸0.6mL，搖勻。于70 ℃水浴加熱15min、30min、45min、60min，取出，流水冷卻2min，精密加入冰醋酸5mL，搖勻。分別以相應的試劑為空白，采用分光光度法于400～800nm進行全波長測定。結果見表4，見圖1(D)。

表4 加熱時間考察

結果表明：隨著加熱時間的延長，溶液的吸收度不斷增加。故綜上精密量取大戟二烯醇標準品溶液0.5mL分別置于5個具塞試管中，水浴揮干溶劑，分別加入新配制的5%香草醛-冰醋酸溶液0.5mL，高氯酸0.6mL，搖勻。于100℃水浴加熱15min、30min、45min、60min、90min取出，流水冷卻2min，精密加入冰醋酸5mL，搖勻。分別以相應的試劑為空白，采用分光光度法于400～800nm進行全波長測定。結果見表5，見圖1(E)。

表5 沸水浴加熱時間考察

結果表明：隨著加熱時間的增長，溶液的吸收度不斷增加，在沸水浴中當加熱時間為45min時吸收度最大，表明當加熱到45min時反應已近完全，但紫外掃描圖譜出現(xiàn)相鄰的兩個峰，而當反應達到30min時只出現(xiàn)一個最大吸收峰，所以選擇的反應時間為30min。 綜上，顯色條件為：精密量取大戟二烯醇標準品溶液0.5mL置于具塞試管中，水浴揮干溶劑，分別加入新配制的5%香草醛-冰醋酸溶液0.5mL，高氯酸0.6mL，搖勻，于沸水浴加熱30min，取出，流水冷卻2min，精密加入冰醋酸5mL，混勻。

2.2 京大戟及其炮制品總萜類含量測定

2.2.1 供試品溶液制備 分別取兩種京大戟供試品粉末(過65目篩)0.2g，精密稱定，置50mL具塞錐形瓶中，精密加入甲醇20mL稱重，超聲(功率250W，頻率50kHz)處理30min后再稱重，以甲醇補足損失的重量，搖勻，濾過，即得。

2.2.2 吸收波長確定 取對照品0.5mL和供試品0.1mL置于具塞試管中，水浴揮干溶劑，分別加入新配制的5%香草醛-冰醋酸溶液0.5mL，高氯酸0.6mL，搖勻。于100 ℃水浴加熱30min，取出，流水冷卻2min，精密加入冰醋酸5mL，搖勻。分別以相應的試劑為空白，于400～800nm處掃描，由掃描結果確定測定波長為570nm，結果見圖2、圖3、圖4。

圖1 京大戟總萜顯色條件考察

圖2 大戟二烯醇顯色后可見光譜

圖3 京大戟生品顯色后可見光譜

圖4 京大戟醋制品顯色后可見光譜

2.2.3 線性關系考察 精密量取大戟二烯醇標準品溶液0.1、0.2、0.4、0.6、0.8mL置于具塞試管中，水浴揮干溶劑，分別加入新配制的5%香草醛-冰醋酸溶液0.5mL，高氯酸0.6mL，搖勻。于100 ℃水浴加熱30min，取出，流水冷卻2min，精密加入冰醋酸5mL，搖勻。分別以相應的試劑為空白，照分光光度法(《中國藥典》2010年版一部附錄Ⅴ分光光度法)于570nm處測定吸收度。以吸收度為縱坐標(Y)，對照品的量(mg)為橫坐標(X)，繪制標準曲線，得回歸方程：y=9.949 8x-0.054 9(r=0.999 1)。大戟二烯醇在12.12～96.96μg之間與峰面積呈現(xiàn)良好的線性關系。結果見表6，線性關系見圖5。

2.2.4 精密度實驗 取0.5mL對照品顯色后溶液，連續(xù)測定6次，測定結果見表7，結果RSD為0.17%。表明該方法精密度良好。

表6 大戟二烯醇標準曲線

圖5 大戟二烯醇標準曲線

序號吸收度A平均吸收度ARSD(%)10．67020．66930．6700．6690．1740．66950．66860．667

2.2.5 穩(wěn)定性實驗 以JDJ-1供試品顯色后溶液為考察對象，間隔若干時間測一次，共測7次，測定結果見表8，RSD為0.31%，結果表明供試品當中總萜類成分在2h內(nèi)穩(wěn)定。

表8 穩(wěn)定性考察結果

2.2.6 重復性實驗 依法處理JDJ-1供試品 6份，依上法測定。重復性結果總萜類的平均含量為55.751mg·g-1，RSD為2.7%，結果表明該試驗重復性較好，結果見表9。

表9 總萜類成分重復性試驗結果

2.2.7 加樣回收率實驗 精密稱取JDJ-1供試品 6份，每份0.1g，依上法制得供試品溶液，取0.1mL置于具塞試管中，并向其中加入0.2mL(0.121 2mg·mL-1)大戟二烯醇標準品溶液。依法測定，并計算平均回收率以及RSD，結果見表10。

表10 總萜類成分加樣回收率試驗結果

2.2.8 樣品含量測定 取2份供試品，如法測定。樣品測定結果見表11。

表11 京大戟不同炮制品含量測定結果

3 結果與討論

在考察顯色條件時，經(jīng)過多次對照試驗，最終確定加入5%香草醛-冰醋酸0.5mL和高氯酸0.6mL，并放入沸水浴加熱30min反應基本完全，尤其在進行沸水浴加熱時間考察時，當加熱45min紫外掃描就會出現(xiàn)兩個尖峰，對后續(xù)測定造成干擾，因此最終確定加熱時間為30min。

該實驗結果表明，京大戟中總萜成分含量在醋制后比生品含量略低，即含量高低為：京大戟生品>京大戟醋制品，說明醋煮對京大戟中總萜含量有一定的降低作用，該實驗結果也可以推測京大戟醋制后總萜類成分含量的降低可能與京大戟醋制減毒有一定的相關性。

[1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[M].北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2010:209-210.

[2] 國家中醫(yī)藥管理局.《中華本草》蒙藥卷[M].上海:上?？茖W技術出版社,2004:261-262.

[3] 張樂林,孫立立.京大戟現(xiàn)代研究概述[J].中華中醫(yī)藥學刊,2011,29(3):577-579.

[4] 張樂林,葛秀允,孫立立.醋制對京大戟毒性和藥效的影響[J].中國實驗方劑學雜志,2013,19(19):276-279.

(責任編輯：尹晨茹)

The Content Determination of the Total Terpene in Radix Euphorbiae Pekinensis

Jia Yunyun, Luo Shixiang

(Huaian Institute for Food and Drug Control,Huaian 223300,China)

Objective:To compare the diversity of contents of the totel terpene in Radix Euphorbiae Pekinensis before and after being processed.It provides certain information for the reduce of Radix Euphorbiae Pekinensis.Methods:With vanillin-glacial acetic acid as show color agent, with euphol as reference substance.The content determination of the total terpene was established by colorimetry.Results:After being processed,the totel terpene content declined in a whole.Conclusion:This method is accurate, reliable and sensitive for determination of euphol in Radix Euphorbiae Pekinensis.

Radix Euphorbiae Pekinensis;Toxicity;Vinegar-preparing Radix Euphorbiae Pekinensis;Content change

2015-01-07

賈云云(1988-)，女，江蘇省淮安市食品藥品檢驗所藥師，研究方向為藥品不良反應監(jiān)測。

R284.1

A

1673-2197(2015)10-0038-04

10.11954/ytctyy.201510016