腸易激綜合征脾胃濕熱證大鼠模型建立

徐秋穎，韓佩玉

(1.成都中醫(yī)藥大學(xué)，四川 成都610000；2.西南民族大學(xué)，四川 成都 610041)

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腸易激綜合征脾胃濕熱證大鼠模型建立

徐秋穎1，韓佩玉2

(1.成都中醫(yī)藥大學(xué)，四川 成都610000；2.西南民族大學(xué)，四川 成都 610041)

目的：建立慢性輕度不可預(yù)見性應(yīng)激腸易激綜合征聯(lián)合脾胃濕熱證大鼠模型。方法：在慢性輕度不可預(yù)見性應(yīng)激的基礎(chǔ)上聯(lián)合脾胃濕熱大鼠模型，建立多因素相互作用的慢急性聯(lián)合應(yīng)激大鼠模型，綜合運用腹瀉指數(shù)、痛閾與腸道敏感性、體重、行為/心理(敞箱實驗、糖水?dāng)z取量等)等檢測方法，對每只造模大鼠進(jìn)行綜合評分。結(jié)果：慢性輕度不可預(yù)見性應(yīng)激聯(lián)合脾胃濕熱大鼠模型優(yōu)于慢性輕度不可預(yù)見性應(yīng)激大鼠模型。結(jié)論：慢性輕度不可預(yù)見性應(yīng)激聯(lián)合脾胃濕熱大鼠模型可較好地模擬人類腸易激綜合征部分癥狀，且具有較好的可重復(fù)性。

腸易激綜合征；脾胃濕熱；應(yīng)激性

腸易激綜合征(Irritable Bowel Syndrome，1BS)是臨床常見慢性腸功能紊亂疾病，常見癥狀為腹痛或腹部不適、大便習(xí)慣和(或)大便性狀改變，但患者無特異性生物化學(xué)或形態(tài)組織學(xué)異常。中醫(yī)認(rèn)為IBS為情志病，致病因素通常為多種異常情感活動的交織，復(fù)雜多樣的情緒變化可導(dǎo)致腸道功能失調(diào)、機(jī)體形質(zhì)改變或形神俱傷。中醫(yī)將IBS歸為“泄瀉”“腹痛”“便秘”“郁證”等范疇，其中泄瀉型在臨床中最為常見[1]。本實驗旨在采用中西醫(yī)結(jié)合的方式建立脾胃濕熱泄瀉型IBS大鼠模型，以供基礎(chǔ)實驗研究使用。

1 動物與試劑

1.1 動物

SPF級SD大鼠40只，雌雄各半，體重(195±15)g，購于成都達(dá)碩實驗動物有限公司，單只單籠飼養(yǎng)于成都中醫(yī)藥大學(xué)眼科實驗室獨立換氣籠具中，環(huán)境濕度為40%～60%，溫度為22～25℃，明暗比為1∶1。

1.2 試劑

紅星二鍋頭(酒精度56%)，高糖高脂飼料(在普通飼料中混入12%豬油、8%蜂蜜)。

2 方法

2.1 動物分組

適應(yīng)性飼養(yǎng)1周，隨即抽取8只大鼠(雌雄各4只)作為正常組(N)，其余32只大鼠完成兩種造模，具體為N組(空白組)、M組(慢性輕度不可預(yù)見性應(yīng)激模型組)、L組(慢性輕度不可預(yù)見性應(yīng)激聯(lián)合脾胃濕熱動物模型組)。所有大鼠均單籠飼養(yǎng)，以便觀察具體情況。

2.2 造模方法

N組大鼠以普通飼料喂養(yǎng)，根據(jù)呂紅[2]、譚潔[1]描述的方法進(jìn)行處理。M組：以7天為1個周期，隨機(jī)給予以下7種處理方法：①禁水24h；②夾尾1min：將動物放入固定籠中，露出尾部，用止血鉗夾住距尾尖1cm處(力度為使大鼠發(fā)出哀叫聲即可)，持續(xù)1min；③45℃環(huán)境下放置5min：將動物置于45℃烘箱中5min；④4℃冰水游泳3min：將動物置于盛有4℃冰水的桶中(水深15cm)，3min后取出；⑤12h晝夜顛倒：早8時不開燈使動物白天處于黑暗狀態(tài)，至晚8時開燈使動物夜晚處于光照狀態(tài)；⑥禁食24h；⑦水平振蕩45min：采用推車人力水平振蕩大鼠，頻率為150次/min。每日僅給予大鼠1種處理方法，順序隨機(jī)，但任何連續(xù)2天的處理方法均不相同，使大鼠不能預(yù)料刺激的發(fā)生，共持續(xù)3周。L組：第1日起控制室溫為(32.0±2.0)℃，濕度為90%～95%，以高糖高脂飼料喂養(yǎng)，第15日開始灌胃紅星二鍋頭(酒精度為56%)，劑量為7mL/kg，1次/天，持續(xù)7天。其余干預(yù)措施同M組。

2.3 造模動物綜合積分

綜合運用腹瀉指數(shù)、痛閾與腸道敏感性、體重、行為/心理(敞箱實驗、糖水?dāng)z取量)等檢測方法，對每只造模動物進(jìn)行綜合評分。其中量化整體行為/情志的敞箱實驗、糖水?dāng)z取實驗步驟參照樊江波[3]文獻(xiàn)報道，腸道痛閾(結(jié)腸擴(kuò)張法)測定參照呂紅[2]文獻(xiàn)報道。

2.4 統(tǒng)計學(xué)方法

3 結(jié)果

3.1 應(yīng)激對大鼠排便行為的影響

實驗結(jié)果表明，三組大鼠的糞便形狀積分比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(F=29.40，P=0.00)。M組大鼠糞便形狀積分與N組比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，L組大鼠糞便形狀積分與N組、M組比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，說明大鼠糞便形狀積分順序為L組>M組>N組。詳見表1。

表1 應(yīng)激對大鼠糞便形狀的影響 ±s)

注：與N組比較，aP<0.05；與M組比較，bP<0.05。

3.2 應(yīng)激對大鼠痛閾的影響

實驗結(jié)果表明，三組大鼠痛閾積分比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(F=10.752，P=0.001)。M組大鼠痛閾積分與N組比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，L組大鼠痛閾積分與N組、M組比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，說明大鼠痛閾積分順序為L組>M組>N組。詳見表2。

表2 應(yīng)激對大鼠痛閾的影響 ±s)

注：與N組比較，aP<0.05；與M組比較，bP<0.05。

3.3 應(yīng)激對大鼠體重的影響

實驗結(jié)果表明，三組大鼠體重差異比較具有統(tǒng)計學(xué)意義(F=14.602，P=0.001)。M組大鼠體重與N組比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，L組大鼠體重與N組比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，且M組、L組大鼠體重>N組，但M組與L組大鼠體重比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。詳見表3。

組別例數(shù)(n)體重FPN8252.87±17.80M8227.50±13.26a14.6020.001L8216.38±82.84a

注：與N組比較，aP<0.05。

3.4 應(yīng)激對大鼠心理的影響

實驗結(jié)果表明，三組大鼠敞箱試驗積分比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(F=4.334，P=0.027)。L組大鼠敞箱試驗積分與N組、M組比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，但M組大鼠敞箱試驗積分與N組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。說明大鼠敞箱試驗積分順序為L組>M組、N組，抑郁評分最高，進(jìn)而說明L組模型較M組和N組更優(yōu)越。詳見表4。

表4 應(yīng)激對大鼠心理的影響 ±s)

注：與N組比較，aP<0.05，與N組、M組比較，bP<0.05。

3.5 應(yīng)激對大鼠行為的影響

實驗結(jié)果表明，三組大鼠糖水?dāng)z取偏嗜度比較差異具有統(tǒng)計學(xué)(F=6.334，P=0.007)。M組大鼠糖水?dāng)z取偏嗜度與N組比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，L組大鼠糖水?dāng)z取偏嗜度與M組比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，說明M組大鼠糖水偏嗜度大于L組、N組。詳見表5。

表5 應(yīng)激對大鼠行為的影響 ±s)

注：與N組比較，aP<0.05；與M組比較，bP<0.05。

4 討論

長久以來，腸易激綜合征的臨床治療方法進(jìn)展緩慢，不盡如人意[4]。究其原因，對于IBS的研究多采用急性應(yīng)激動物模型，僅單純地對胃腸動力和內(nèi)臟感覺等癥狀進(jìn)行描述，在某種程度上限制了IBS治療學(xué)的發(fā)展。建立一個涉及動力學(xué)、感覺和行為等多因素的動物模型不僅可為IBS的機(jī)制研究提供有效平臺，而且是探討中樞神經(jīng)系統(tǒng)在IBS發(fā)病中作用的前提。

本研究選用已被國內(nèi)外廣泛采用的慢性輕度不可預(yù)見性應(yīng)激抑郁大鼠模型，并將其與脾胃濕熱模型相結(jié)合，旨在建立大鼠多因素相互作用的慢急性聯(lián)合應(yīng)激動物模型，在一定時間內(nèi)綜合運用腹瀉指數(shù)、痛閾與腸道敏感性、體重、行為/心理(敞箱實驗、糖水?dāng)z取量)等檢測方法，對每只造模大鼠進(jìn)行綜合評分，建立更接近人體IBS的動物模型。

該復(fù)合模型與人類脾胃濕熱泄瀉型IBS的發(fā)病狀態(tài)和機(jī)制相似，并有較好的可重復(fù)性，可用于中西醫(yī)基礎(chǔ)臨床研究動物模型的建立，但也存在許多不足之處：①現(xiàn)有的IBS模型選用動物主要為大鼠、小鼠，與人類差異較大，很難得到與臨床接近的IBS內(nèi)臟高敏感性動物模型；②現(xiàn)有的IBS內(nèi)臟高敏感性動物模型鑒定具有一定的主觀性，缺乏明確的生物學(xué)標(biāo)志，評判標(biāo)準(zhǔn)無法統(tǒng)一。在進(jìn)行內(nèi)臟高敏感性動物造模時，較常采用的方法為直結(jié)腸刺激法，而IBS的許多臨床癥狀，如腹痛、腹瀉等亦與小腸甚至胃有著不可分割的聯(lián)系。因此筆者認(rèn)為，在研究內(nèi)臟高敏感性時應(yīng)將小腸甚至胃考慮進(jìn)去。在具體實驗方法方面，我們應(yīng)在現(xiàn)有研究的基礎(chǔ)上，秉持科學(xué)、嚴(yán)謹(jǐn)?shù)目蒲袘B(tài)度，進(jìn)一步探索IBS腸道動力異常的發(fā)病機(jī)制。

[1] 譚潔,馬薇,彭芝配.建立腸易激綜合征中醫(yī)證候模型的研究[J].中國實驗方劑學(xué)雜志,2011,17(8):197-199.

[2] 呂紅,王偉岸,錢家鳴.傳統(tǒng)束縛應(yīng)激動物模型內(nèi)臟感覺的新評價[J].胃腸病學(xué)和肝病學(xué)雜志,2005,14(2):111-113.

[3] 樊江波,董世芬,王晶,等.慢性應(yīng)激致腸易激綜合征大鼠模型的建立與評價[J].中國實驗動物學(xué)報,2010,18(2):91-95.

[4] MAYER EA,BRADESI S,CHANG L,et al.Functional GI disorders:from animal models to drug development[J].Gut,2008(57):384-404.

(責(zé)任編輯：尹晨茹)

2014-11-17

國家自然科學(xué)基金項目(81303087)

徐秋穎(1986-)，女，成都中醫(yī)藥大學(xué)碩士研究生，研究方向為中醫(yī)藥治療心血管疾病的理論及實驗研究。

韓佩玉(1976-)，女，西南民族大學(xué)副教授，研究方向為身心疾病病機(jī)。E-mail:Pdhpy@163.com

R574.4;R332

A

1673-2197(2015)06-0012-02

10.11954/ytctyy.201506005