復(fù)方七芍降壓片對(duì)SHR內(nèi)皮損傷的干預(yù)作用*

雍蘇南 張穩(wěn) 譚超 王順民 譚元生

高血壓病患病率居慢性病首位，同時(shí)也是心腦血管病最主要的危險(xiǎn)因素。高血壓的發(fā)病機(jī)制目前尚未完全闡明，仍在不斷探索中。近年來研究表明，免疫炎癥反應(yīng)誘導(dǎo)的內(nèi)皮功能障礙是高血壓病重要的發(fā)病機(jī)制和關(guān)鍵環(huán)節(jié)[1]。這提示抗炎和內(nèi)皮保護(hù)等聯(lián)合治療可能成為除降壓治療之外治療高血壓病的必要手段。本實(shí)驗(yàn)通過觀察自發(fā)性高血壓大鼠（spontaneously hypertensive rats，SHR）血壓、血清白細(xì)胞介素-6（IL-6）和白細(xì)胞介素-8（IL-8）及腫瘤壞死因子-α（TNF-α）中藥干預(yù)后的變化，研究復(fù)方七芍降壓片對(duì)高血壓病降壓作用的可能機(jī)制，以期在中醫(yī)藥方面尋求防治高血壓病的新思路和新方法，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 8周齡SHR 48只，體重230~270 g，雄性，清潔級(jí)，由上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限責(zé)任公司提供，動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（滬2007-0005）。8周齡Wistar-kyoto（WKY）大鼠12只，體重225~280 g，雄性，清潔級(jí)，由上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限責(zé)任公司提供，動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（滬2007-0005）。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物環(huán)境設(shè)施合格證號(hào)：SYXK（湘）2009-0001。

1.1.2 實(shí)驗(yàn)藥物 本院藥劑科制備，批號(hào)：20141116；卡托普利片（25 mg/片），中美上海施貴寶制藥有限公 司 生 產(chǎn)， 批 號(hào)：20140914；Rat IL-6 ELISA Kit試劑盒，CUSABIO公司生產(chǎn)，批號(hào)：Y05031105；Rat IL-8 ELISA Kit試劑盒，CUSABIO公司生產(chǎn)，批號(hào)：Y17031107；Rat TNF-αELISA Kit 試劑盒，CUSABIO公司生產(chǎn)，批號(hào)：Y05031106。

1.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器 BP-2006A型智能無創(chuàng)血壓計(jì)（北京軟隆科技有限責(zé)任公司），DT1000A型電子天平（江蘇省常熟市長(zhǎng)春儀器廠制造），biocell2010型酶標(biāo)儀（奧地利）。

1.2 方法

1.2.1 分組及給藥 將48只SHR隨機(jī)分為模型組（SHR-M組）、卡托普利組（SHR-K組）、復(fù)方七芍降壓片低劑量治療組（SHR-D組）、復(fù)方七芍降壓片高劑量治療組（SHR-G組）4個(gè)組，每組12只，12只WKY大鼠為正常組（WKY組）。復(fù)方七芍降壓片（壓片前）成人每日用量為49 g，低劑量治療組以成人等效量（大鼠體表面積/成人平均體表面積×成人每日用量）灌胃，高劑量治療組以成人等效量4倍灌胃，卡托普利組以成人等效量灌胃。同時(shí)，模型組及正常組以等量蒸餾水開始灌胃，給藥體積為10 mL/kg。各組灌胃1次/d，連續(xù)4周，灌胃期間每周測(cè)量1次血壓和體重，根據(jù)體重隨時(shí)調(diào)整給藥量。

1.2.2 SHR尾動(dòng)脈壓的測(cè)定 分別在實(shí)驗(yàn)開始前，開始1、2、3、4周后，采用尾動(dòng)脈測(cè)壓法應(yīng)用智能無創(chuàng)血壓計(jì)測(cè)量給藥前后大鼠血壓。在每周第7天14：00-17：00測(cè)各組大鼠的血壓平均值，為該鼠所在周的血壓值。

1.2.3 血清IL-6、IL-8及TNF-α的測(cè)定 末次藥后待血壓測(cè)定完成后，用20%烏拉坦腹腔麻醉，腹主動(dòng)脈取血4 mL，靜置、分離血清，用酶聯(lián)免疫吸附雙抗體夾心法測(cè)定IL-6、IL-8及TNF-α的含量，實(shí)驗(yàn)方法嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行操作。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 數(shù)據(jù)處理應(yīng)用SPSS 17.0軟件進(jìn)行。計(jì)量資料以（±s）表示，比較采用t檢驗(yàn)，采用單因素方差分析（ANOVA）進(jìn)行數(shù)據(jù)之間比較，組間兩兩比較采用最小顯著差值法（LSD），同一組治療前后比較采用配對(duì)。以P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組降壓效果比較 SHR-M組的血壓隨用藥時(shí)間的推移逐漸增高，治療組及SHR-K組則均有下降；治療前后SHR各組血壓均高于WKY組，比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）；治療1、2、3、4周后SHR-K組血壓均較治療前下降且均低于SHR-M組，比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）；SHR-D組血壓從第3周開始，SHR-G組血壓從第2周開始均低于治療前且均低于SHR-M組，比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）；SHR-D及SHR-G組治療后血壓均高于SHR-K組，比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）；治療3、4周后，SHR-G組血壓均低于SHR-D組，比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見表1及圖1。

表1 各組大鼠治療前后血壓變化比較（x-±s） mm Hg

圖1 各組大鼠治療前后血壓變化比較

2.2 各組血清IL-6、IL-8及TNF-α比較 SHR各組血清炎癥因子IL-6、IL-8及TNF-α水平均高于WKY組，比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）；連續(xù)用藥4周后，SHR-K組、SHR-D組及SHR-G組血清炎癥因子IL-6、IL-8及TNF-α水平均低于SHR-M組，比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）；SHR-G組各炎癥因子水平均低于SHR-D組，比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見表2。

表2 各組大鼠血清IL-6、IL-8和TNF-α水平比較（x-±s）ng/L

3 討論

血管管腔的表面均覆蓋著內(nèi)皮組織，不僅是一種屏障結(jié)構(gòu)而且具有調(diào)節(jié)血管舒縮功能、血流穩(wěn)定性和血管重塑的重要作用。血管內(nèi)皮具有易損性的功能界面，血液中病理生理變化均先作用于血管內(nèi)皮，導(dǎo)致內(nèi)皮細(xì)胞功能障礙（endothelial dysfunction，EDF）。血壓升高使血管壁的剪切力和應(yīng)力增加，去甲腎上腺素和AT-Ⅱ等血管活性物質(zhì)增多，均可損害血管內(nèi)皮及其功能。內(nèi)皮功能受損后導(dǎo)致血管舒張和收縮因子、生長(zhǎng)抑制和促進(jìn)物質(zhì)、促凝和抗凝物質(zhì)等生成釋放不平衡，從而引起生理系統(tǒng)異常[2]。因此內(nèi)皮功能障礙可能是高血壓導(dǎo)致靶器官損害及其合并癥的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。血液中的IL-6來源于活化的單核細(xì)胞，是一種參與機(jī)體免疫和炎癥反應(yīng)的炎癥細(xì)胞因子[3]。高血壓患者普遍存在內(nèi)皮的炎癥反應(yīng)，因而可生成許多血小板源生長(zhǎng)因子和腫瘤壞死因子，成纖維細(xì)胞、單核細(xì)胞被這些炎癥因子誘導(dǎo)產(chǎn)生IL-6，而IL-6又可使成纖維細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞增殖，從而生成大量的PDGF，使得周圍血管阻力增高，最終引發(fā)高血壓。

單核細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞可分泌IL-8，血清不能滅活I(lǐng)L-8，所以易形成局部累積，它能趨化中性粒細(xì)胞，在炎癥損傷中起重要作用。IL-8可介導(dǎo)活化中性粒細(xì)胞，繼而使其與受體結(jié)合，從而改變受體構(gòu)象，超氧陰離子被啟動(dòng)、呼吸爆發(fā)，產(chǎn)生局部炎癥反應(yīng)，促進(jìn)細(xì)胞脫顆粒、破壞內(nèi)皮細(xì)胞基底膜完整性和促進(jìn)中性粒細(xì)胞跨內(nèi)皮細(xì)胞游走，達(dá)到損傷細(xì)胞的作用[4]。

TNF-α也是炎性細(xì)胞因子之一，它參與多種病理生理的發(fā)生過程，主要是由激活的巨噬細(xì)胞分泌形成，也可由血管內(nèi)皮細(xì)胞和血管平滑肌細(xì)胞分泌。TNF-α可以促進(jìn)中性粒細(xì)胞氧化代謝及脫顆粒，具有直接細(xì)胞毒作用，通過促進(jìn)脂質(zhì)過氧化增加血管內(nèi)皮通透性，引起內(nèi)皮舒縮功能障礙，從而減少血管內(nèi)皮細(xì)胞釋放NO和前列腺素；增加炎性介質(zhì)IL-1的分泌量，導(dǎo)致血管平滑肌細(xì)胞增生、肥大，引起結(jié)締組織增多、內(nèi)膜增生，血管壁僵硬度增加，使得管腔狹窄，外周阻力增加，導(dǎo)致高血壓形成[5-7]。因此，TNF-α在高血壓及其并發(fā)癥的發(fā)生過程中扮演中心環(huán)節(jié)的角色[8]。

高血壓病屬中醫(yī)“眩暈”、“頭痛”范疇。眩暈可定位于肝腎，肝腎陰虛，水不涵木，陰不維陽，肝陽上亢，肝風(fēng)內(nèi)動(dòng)，發(fā)為眩暈，即肝陽化風(fēng)。肝腎陰虛，一方面陰虛可致血枯脈澀，日久成瘀，瘀血阻絡(luò)，髓海失濡；另一方面，陰虛陽亢，肝失疏泄，氣血運(yùn)行不暢，日久亦可致瘀血阻絡(luò)，氣血不能上達(dá)，清竅失養(yǎng)，眩暈發(fā)作，即瘀血化風(fēng)。故高血壓患者中醫(yī)病機(jī)可用“虛、瘀、風(fēng)”來概括，并且中醫(yī)理論認(rèn)為瘀血停滯導(dǎo)致脈絡(luò)損傷，脈絡(luò)損傷反過來又能加重瘀血停滯。針對(duì)此病病機(jī)，采用養(yǎng)陰柔肝、化瘀息風(fēng)立法的醫(yī)院制劑復(fù)方七芍降壓片治療效果確切。該方由三七、白芍、桑寄生、杜仲、丹參、天麻、蘿芙木、地龍、葛根、炒香附、甘草組成。方中三七活血化瘀通絡(luò)，白芍養(yǎng)陰柔肝息風(fēng)，共為君藥。桑寄生、杜仲補(bǔ)益肝腎，丹參活血祛瘀，天麻平肝息風(fēng)，均為臣藥。蘿芙木平肝清熱，地龍息風(fēng)通絡(luò)，葛根生津活血，炒香附理氣疏肝，共為佐藥。甘草為使，調(diào)和諸藥。以上合用，使得陰虛得補(bǔ)，陽亢得平，脈絡(luò)得暢，髓海得濡、清竅得養(yǎng)、眩暈自止。

劑量，復(fù)方七芍降壓片對(duì)內(nèi)皮損傷的調(diào)節(jié)作用可能是其發(fā)揮降壓作用的機(jī)制之一。本研究顯示，與SHR-M組比較，隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，SHR-K組、SHR-D組及SHR-G組血壓均明顯降低；治療3、4周后，SHR-G組血壓均低于SHR-D組，比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。以上結(jié)果表明復(fù)方七芍降壓片有確切的降壓效果，且高劑量復(fù)方七芍降壓片的降壓效果較低劑量好。SHR血清IL-6、IL-8以及TNF-α水平存在明顯的異常，提示細(xì)胞因子IL-6、IL-8以及TNF-α可能是導(dǎo)致高血壓病內(nèi)皮細(xì)胞功能障礙的作用因子。治療后，SHR-K組、SHR-D組及SHR-G組血清炎癥因子IL-6、IL-8及TNF-α水平均低于SHR-M組，比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）；SHR-G組各炎癥因子水平均低于SHR-D組，比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。以上結(jié)果表明復(fù)方七芍降壓片可降低炎癥因子水平，且高劑量的效果優(yōu)于低劑量，復(fù)方七芍降壓片對(duì)內(nèi)皮損傷的調(diào)節(jié)作用可能是其發(fā)揮降壓作用的機(jī)制之一。

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