復(fù)方薄荷腦苯酚搽劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究*

陳燕霞，陳 潔，黃櫻華，丘振文，李得堂，黃月純，孫亦群

（廣州中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院，廣東 廣州 510405）

復(fù)方薄荷腦苯酚搽劑（原名止癢酒精）為我院的醫(yī)院制劑（粵藥制字Z20150062），由水楊酸、苯酚、薄荷腦、75%乙醇組成，具有抗炎、止癢、消毒功效［1?3］，臨床常用于治療皮膚瘙癢等癥。復(fù)方薄荷腦苯酚搽劑原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中存在滴定法測(cè)定水楊酸含量不準(zhǔn)確、無(wú)苯酚含量等問(wèn)題。根據(jù)《廣東省醫(yī)療機(jī)構(gòu)（化學(xué)藥）制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)制定的技術(shù)要求（試行）》文件精神，并參考《中國(guó)藥典（二部）》［4］及文獻(xiàn)［5?6］，本研究中建立了測(cè)定水楊酸含量的紫外?可見(jiàn)分光光度法，以及測(cè)定苯酚含量的高效液相色譜法，以進(jìn)一步提高質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Cary60型紫外?可見(jiàn)分光光度計(jì)、HP1200型高效液相色譜儀，購(gòu)于安捷倫科技<中國(guó)>有限公司；XA105型電子天平（梅特勒?托利多儀器<上海>公司，精度為十萬(wàn)分之一）。

1.2 試藥

復(fù)方薄荷腦苯酚搽劑（廣州中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院制劑中心，批號(hào)分別為S1，S2，S3）；水楊酸對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)為100106?2011104，純度為99.9%）；苯酚試劑（天津市大茂化學(xué)試劑廠，批號(hào)為20160701，純度為99.11%）；甲醇為色譜純，水為超純水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 紫外-可見(jiàn)分光光度法測(cè)定水楊酸含量［5］

2.1.1 溶液制備

取水楊酸對(duì)照品13 mg，精密稱定，置50 mL容量瓶中，加入75%乙醇制成每1 mL含0.253 0 mg的對(duì)照品貯備液，精密吸取1 mL，置25 mL容量瓶中，加入75%乙醇稀釋成每1 mL含0.010 12 mg的水楊酸對(duì)照品溶液。精密吸取樣品2 mL，置100 mL容量瓶，加入75%乙醇稀釋并定容，精密吸取5 mL，置100 mL容量瓶中，加入75%乙醇稀釋，定容，即得供試品溶液。按處方稱取缺水楊酸的陰性樣適量，按供試品溶液制備方法制備陰性對(duì)照品溶液。

1.水楊酸A.對(duì)照品溶液B.供試品溶液C.陰性對(duì)照品溶液圖1紫外-可見(jiàn)分光光譜圖1.Salicylic acidA.Reference solution B.Test solution C.Negative reference solutionFig.1 UV-Vis spectograms

2.1.2 方法學(xué)考察

專屬性試驗(yàn)：分別吸取2.1.1項(xiàng)下對(duì)照品溶液、供試品溶液、陰性對(duì)照品溶液各適量，在200～400 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)掃描，記錄紫外?可見(jiàn)吸收光譜圖（見(jiàn)圖1）?？梢?jiàn)，在295 nm波長(zhǎng)處，對(duì)照品溶液與供試品溶液均有最大吸收峰，且陰性對(duì)照品溶液在此波長(zhǎng)處無(wú)吸收峰，表明制劑中的其他成分對(duì)水楊酸的測(cè)定無(wú)干擾。

線性關(guān)系考察：精密吸取2.1.1項(xiàng)下對(duì)照品貯備液0.5，1.0，1.5，2.0，2.5，3.0 mL，分別置25 mL容量瓶中，加入75%乙醇稀釋，并定容；以75%乙醇為空白，于300 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度。以質(zhì)量濃度（C，mg/mL）為橫坐標(biāo)、吸光度（A）為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程A=25.484 9C+0.009 47（r=0.999 2，n=6），表明水楊酸質(zhì)量濃度在0.005 1～0.030 4 mg/mL范圍內(nèi)與吸光度線性關(guān)系良好。

重復(fù)性試驗(yàn)：精密吸取樣品（批號(hào)為S1）適量，平行6份，按2.1.1項(xiàng)下方法制備供試品溶液，依法測(cè)定吸光度。結(jié)果平均吸光度為0.523 8，RSD為0.10%（n=6），表明方法重復(fù)性良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：精密吸取重復(fù)性試驗(yàn)項(xiàng)下供試品溶液適量，分別于0，1，2，3，6，8 h時(shí)依法測(cè)定吸光度。結(jié)果平均吸光度為0.537 5，RSD為0.09%（n=6），表明供試品溶液在室溫下8 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

加樣回收試驗(yàn)：精密吸取已知含量的樣品（批號(hào)為S1）0.8，1.0，1.2 mL，分別精密加入80%，100%，120%水楊酸對(duì)照品，平行3份，依法測(cè)定吸光度，并計(jì)算加樣回收率。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n=9）Tab.1 Results of the recovery test（n=9）

2.1.3 樣品含量測(cè)定

取樣品（批號(hào)分別為S1，S2，S3），平行3份，按2.1.1項(xiàng)下方法制備供試品溶液，依法測(cè)定吸光度，代入回歸方程，計(jì)算得3批樣品的平均含量為2.02%，RSD為0.36%（n=9）。

2.2 高效液相色譜法測(cè)定苯酚含量［6］

2.2.1 色譜條件

色譜柱：Zobax SB?C18柱（250 mm×4.6 mm，5μm）；流動(dòng)相：甲醇?水（48∶52，V/V）；流速：1.0 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：270 nm；柱溫：25℃；進(jìn)樣量：10μL。

(1)在下方也放置一個(gè)相同的小球，它與圓柱側(cè)面的公共點(diǎn)將也形成圓，把這兩個(gè)圓記作圓C1和圓C2.圓C1與圓C2所在平面有怎樣的位置關(guān)系？

2.2.2 溶液制備

取苯酚對(duì)照品1.3 g，精密稱定，置100 mL容量瓶中，加水溶解并定容，即得對(duì)照品貯備液；精密吸取10 mL，置100 mL容量瓶中，加水稀釋并定容，過(guò)濾，取濾液，即得每1 mL含1.319 9 mg的苯酚對(duì)照品溶液。精密吸取樣品（批號(hào)為S1）1 mL，置100 mL容量瓶中，加水稀釋并定容；精密吸取稀釋液6 mL，置10 mL容量瓶中，加水稀釋并定容；過(guò)濾，取濾液，即得供試品溶液。精密吸取缺苯酚的陰性樣品1 mL，按供試品溶液制備方法制備陰性對(duì)照品溶液。

1.苯酚A.對(duì)照品溶液B.供試品溶液C.陰性對(duì)照品溶液圖2高效液相色譜圖1.PhenolA.Reference solution B.Test solution C.Negative reference solutionFig.2 HPLC chromatograms

2.2.3 方法學(xué)考察

專屬性試驗(yàn)：分別吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液和陰性對(duì)照品溶液各10μL，按2.2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖（見(jiàn)圖2）?？芍鞣宸蛛x良好，且陰性對(duì)照品溶液在相應(yīng)位置無(wú)吸收峰，表明制劑中其他成分不干擾苯酚的測(cè)定。

線性關(guān)系考察：精密吸取2.2.2項(xiàng)下對(duì)照品溶液2，5，10，15，20，25 mL，分別置100 mL容量瓶中，加水稀釋并定容，濾過(guò)，取濾液，按2.2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析，記錄峰面積。以進(jìn)樣量（X，μg）為橫坐標(biāo)、峰面積（Y）為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程Y=940.826X+4.005 1（r=0.999 9，n=6），表明苯酚進(jìn)樣量在0.264 0～3.299 8μg范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

精密度試驗(yàn)：精密吸取2.2.2項(xiàng)下對(duì)照品溶液10 μL，按2.2.1項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣測(cè)定6次，記錄峰面積。結(jié)果的RSD為0.46%（n=6），表明儀器精密度良好。

重復(fù)性試驗(yàn)：精密吸取樣品（批號(hào)為S1）適量，平行6份，按2.2.2項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按2.2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積。結(jié)果的RSD為1.80%（n=6），表明方法重復(fù)性良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：精密吸取重復(fù)性試驗(yàn)項(xiàng)下供試品溶液10μL，分別于0，2，4，6，8，10，12，24 h時(shí)按2.2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積。結(jié)果的RSD為1.11%（n=8），表明供試品溶液在常溫下放置24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

加樣回收試驗(yàn)：精密吸取已知含量的樣品（批號(hào)為S1）0.5 mL，分別精密加入80%，100%，120%對(duì)照品溶液，按2.2.2項(xiàng)下方法制備供試品溶液，每組平行3份，按2.2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積，并計(jì)算回收率。結(jié)果見(jiàn)表1。

2.2.4 樣品含量測(cè)定

取樣品（批號(hào)分別為S1，S2，S3），按2.2.2項(xiàng)下方法制備供試品溶液，平行3份，按2.2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積，代入回歸方程計(jì)算得3批樣品的平均含量為1.88%，RSD為1.98%（n=9）。

3 討論

前期預(yù)試驗(yàn)中，按2020年版《中國(guó)藥典（二部）》收載方法，采用滴定法測(cè)定水楊酸和苯酚的含量，結(jié)果發(fā)現(xiàn)水楊酸陰性對(duì)照品溶液消耗氫氧化鈉滴定液較多，而苯酚陰性對(duì)照品溶液消耗溴滴定液較多，可能與苯酚與水楊酸存在相互干擾而導(dǎo)致結(jié)果誤差較大有關(guān)，故滴定法不適合用于復(fù)方薄荷腦苯酚搽劑中水楊酸和苯酚的含量測(cè)定。

在含量測(cè)定研究中，采用紫外?可見(jiàn)分光光度法測(cè)定樣品中水楊酸的含量，結(jié)果準(zhǔn)確，操作便捷。采用高效液相色譜法測(cè)定苯酚含量，由于未能購(gòu)買到苯酚對(duì)照品，故使用苯酚試劑（化學(xué)純），并按2020年版《中國(guó)藥典（二部）》收載方法測(cè)定其純度。結(jié)果天津市大茂化學(xué)試劑廠生產(chǎn)的苯酚試劑含量為99.11%，RSD為0.07%，純度高，可用作復(fù)方薄荷腦苯酚搽劑中苯酚含量測(cè)定的工作對(duì)照品。試驗(yàn)結(jié)果表明，本方法測(cè)得樣品中苯酚平均含量為1.88%，RSD為1.98%，數(shù)據(jù)準(zhǔn)確，方法可行。

綜上所述，本研究中建立的方法操作簡(jiǎn)便快捷，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，靈敏度高，重復(fù)性和穩(wěn)定性均較好，可用于復(fù)方薄荷腦苯酚搽劑的質(zhì)量控制。