膜葉槌果藤水提物鎮(zhèn)痛抗炎作用的實驗研究

馮潔穎 戴衛(wèi)波 吳鳳榮

（中山市中醫(yī)院，廣東 中山528400）

膜葉槌果藤水提物鎮(zhèn)痛抗炎作用的實驗研究

馮潔穎 戴衛(wèi)波 吳鳳榮

（中山市中醫(yī)院，廣東 中山528400）

目的：研究膜葉槌果藤水提物鎮(zhèn)痛抗炎作用。方法：小鼠分別連續(xù)灌胃給予膜葉槌果藤水提物高、中、低劑量（10.88，5.44，2.72 g/kg）7 d，采用扭體法、福爾馬林致痛模型、二甲苯致耳腫脹模型及腹腔毛細(xì)血管通透性實驗，觀察其鎮(zhèn)痛抗炎作用。結(jié)果：膜葉槌果藤水提物可顯著抑制冰醋酸引起的小鼠扭體反應(yīng)次數(shù)（P＜0.01）；對福爾馬林致小鼠疼痛舔足第Ⅰ，Ⅱ時相累積時間均有顯著減少（P＜0.05或P＜0.01）；對二甲苯致小鼠耳腫脹有顯著的抑制作用（P＜0.05或P＜0.01）；對冰醋酸引起的毛細(xì)血管通透性也有顯著的抑制作用（P＜0.01）。結(jié)論：膜葉槌果藤水提物具有顯著的鎮(zhèn)痛抗炎作用。

膜葉槌果藤；鎮(zhèn)痛；抗炎

膜葉槌果藤為白花菜科植物（Capparis membranacea Gardn.et Champ.）的干燥根。《廣東省藥材標(biāo)準(zhǔn)》第二冊有收載[1]，在《中華本草》[2]、《全國中草藥匯編》[3]等專著中均以“獨行千里”之名收載。本品具有活血散瘀、消腫止痛的功效，用于跌打瘀腫，閉經(jīng)，風(fēng)濕骨痛，咽喉腫痛，腹痛，牙痛[1]。主要分布于兩廣地區(qū)，為廣東習(xí)用地產(chǎn)藥材。為進(jìn)一步合理開發(fā)應(yīng)用本品，本研究對膜葉槌果藤水提物進(jìn)行了鎮(zhèn)痛抗炎藥理作用探討，現(xiàn)將實驗結(jié)果報告如下。

1 實驗材料

1.1 儀器

UV-754型紫外可見分光光度計（上海第三分析儀器廠）；YLS-Q4耳腫打耳器（直徑8 mm，山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院設(shè)備站）；TD25-WS 48孔多管架自動平衡離心機（長沙湘儀離心機儀器有限公司）；微量移液器（上海求精生化試劑儀器有限公司）；BS224S型電子天平（北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司，d=0.000 1 g）。

1.2 藥品與試劑

膜葉槌果藤（購于廣東廣弘藥材有限公司，經(jīng)廣東省中山市中醫(yī)院主任中藥師鑒定為膜葉槌果藤的干燥根）；消炎痛（吲哚美辛腸溶片，廣東華南藥業(yè)股份有限公司，批號：140401）；伊文思蘭（中國醫(yī)藥公司，批號：121225）；冰醋酸（廣州化學(xué)試劑廠，批號：20100914-2）；二甲苯（廣州化學(xué)試劑廠，批號：130308）。

1.3 實驗動物

SPF級昆明種小鼠（20± 2）g（廣州中醫(yī)藥大學(xué)實驗動物中心提供，動物合格證號：SCXK（粵）2013-0034），飼養(yǎng)于廣東省中山市中醫(yī)院中藥藥理實驗室（實驗動物使用許可證號：SYXK（粵）2010-0109），環(huán)境溫度（22± 2）℃，相對濕度50%～ 60%。根據(jù)實驗性質(zhì)和性別分籠喂養(yǎng)，自由采食飲水。

1.4 膜葉槌果藤水提物的制備

取藥材500 g，加水，煎煮2次，合并濾液，濃縮成500 mL，放冷，保存于冰箱中，臨用前配制成所需濃度。

1.5 統(tǒng)計學(xué)處理方法

采用SPSS 19.0軟件處理。數(shù)據(jù)用x± s表示，組間比較采用單因素方差分析，方差齊性者采用 LSD檢驗，方差不齊者采用 Dunnett-t檢驗。以P＜0.05為差別有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 方法和結(jié)果

2.1 對醋酸致痛小鼠的鎮(zhèn)痛作用[4]

選用18～ 22 g的昆明小鼠50只，隨機分為5組，每組10只，雌雄各半，分組及給藥見表1，體積均為20 mL/kg，空白組給20 mL/kg生理氯化鈉，qd，連續(xù) 7 d，消炎痛組最后 1天給藥1次，末次給藥60 min后腹腔注射0.6%冰醋酸0.1 mL/10 g，觀察記錄注射后各動物15 min內(nèi)出現(xiàn)扭體的次數(shù)，并計算抑制率。結(jié)果見表1。

表1 膜葉槌果藤水提物對醋酸致痛小鼠的鎮(zhèn)痛作用

抑制率（%）=（對照組平均扭體次數(shù)－給藥組平均扭體次數(shù)）/對照組平均扭體次數(shù) ×100%。

實驗結(jié)果表明，與空白對照組比較，膜葉槌果藤水提物高、中、低劑量組均能顯著抑制醋酸所致小鼠扭體反應(yīng)（P＜0.01），抑制率分別為45.74%， 48.67%，67.55%。結(jié)果提示膜葉槌果藤水提物能對抗冰醋酸所致小鼠的疼痛性反應(yīng)。

2.2 小鼠福爾馬林致痛實驗[5-6]

選用18～ 22 g的昆明種小鼠50只，雌雄各半。隨機分為5組，每組10只。按表2劑量灌胃給藥，qd，體積均為20 mL/kg，空白組給予20 mL/kg生理氯化鈉，qd，連續(xù)7 d，消炎痛組最后 1天給藥1次，末次給藥60 min后，于小鼠右后足底皮下注射 2.5%福爾馬林溶液（20 μL/只），立即置于小鼠籠中觀測。以舔后足趾時間為小鼠的反應(yīng)指標(biāo)，分別記錄小鼠注射后（0～ 10 min）和（10～ 30 min）的累積舔足時間，代表第Ⅰ時相和第Ⅱ時相疼痛強度。

抑制率 （%）= （空白對照組時間 －試藥組時間）/空白對照組時間 ×100%。

表2 膜葉槌果藤水提物對福爾馬林致痛小鼠的鎮(zhèn)痛作用

實驗結(jié)果表明，與空白對照組比較，膜葉槌果藤水提物高、中、低劑量對福爾馬林致痛作用的第I時相（0～ 10 min）的疼痛反應(yīng)均有顯著抑制作用（P＜ 0.05或P＜ 0.01），其高劑量對第Ⅱ時相（10～ 30 min）的疼痛反應(yīng)也有顯著的抑制作用（P＜ 0.05），其作用均強于消炎痛。

2.3 對二甲苯致小鼠耳廓腫脹的影響[7]

選用18～ 22 g的昆明種小鼠50只，雌雄各半。隨機分為5組，每組10只。按表3劑量灌胃給藥，體積均為20 mL/kg，空白組給予生理氯化鈉，qd，連續(xù)7 d，消炎痛對照組最后1天給藥1次。末次給藥60 min后，各組用移液器均勻涂二甲苯30 μL于右耳雙面致炎，左耳空白對照。涂完后20 min脫頸椎處死動物，剪去毛，用剪刀沿動物耳廓基線剪下兩耳，疊加完整，用直徑為8 mm打孔器打下兩圓耳片，精確稱重。以兩耳片質(zhì)量之差為腫脹度，計算腫脹抑制率，結(jié)果見表3。

腫脹抑制率（%）=（空白對照組平均腫脹度－給藥組平均腫脹度）/空白對照組平均腫脹度×100%。

實驗結(jié)果表明，與空白對照組比較，膜葉槌果藤水提物高、中、低劑量組均對二甲苯致小鼠耳腫脹有明顯抑制作用（P＜ 0.05或P＜ 0.01）；其高、低劑量作用強于消炎痛。提示膜葉槌果藤水提取物對急性炎性腫脹具有抑制作用。

表3 膜葉槌果藤水提物對小鼠二甲苯致耳廓腫脹的影響

2.4 對醋酸致小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性的影響[8-9]

選用18～ 22 g的昆明種小鼠50只，雌雄各半。隨機分為5組，每組10只。按表4劑量灌胃給藥，qd，體積均為 20 mL/kg，空白組給予生理氯化鈉，連續(xù)7 d，消炎痛組最后1天給藥1次，末次給藥60 min后，尾靜脈注射0.5%伊文思蘭生理氯化鈉0.1 mL/10 g體質(zhì)量，同時腹腔注射0.6%冰醋酸，劑量為0.1 mL/10 g體質(zhì)量致炎。20 min后處死，每只用5 mL生理氯化鈉沖洗腹腔，取3～ 4 mL洗液，3 000 rpm離心10 min，取上清液，在紫外可見分光光度計 590 nm波長處測吸光度（OD）值。結(jié)果見表4。

滲出抑制率 （%）= （空白對照組平均OD值－給藥組平均OD值）/空白對照組平均OD值×100%。

表4 膜葉槌果藤水提物對小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性的影響

實驗結(jié)果表明，消炎痛對照組和膜葉槌果藤水提物高、中、低劑量組腹腔洗液的OD值，與空白對照組比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜ 0.01）。說明膜葉槌果藤水提物組能顯著降低冰醋酸所致小鼠毛細(xì)血管通透性，提示膜葉槌果藤水提物能顯著抑制炎性過程中毛細(xì)血管通透性增高，表現(xiàn)出較好的抗炎作用。

3 討論

本實驗采用醋酸致小鼠疼痛扭體反應(yīng)、福爾馬林致小鼠疼痛舔足反應(yīng)、二甲苯引起小鼠耳廓炎性腫脹反應(yīng)及醋酸引起小鼠腹腔毛細(xì)血管炎性通透性反應(yīng)，對膜葉槌果藤提取物的鎮(zhèn)痛抗炎作用進(jìn)行了實驗觀察，在扭體法實驗中膜葉槌果藤提取物能顯著抑制醋酸所致小鼠的疼痛扭體反應(yīng)（P＜ 0.01）。皮下注射福爾馬林可通過刺激C纖維進(jìn)而激活廣動力背角神經(jīng)元，引發(fā)疼痛，由此第Ⅰ相（0～ 10 min）時為直接刺激C纖維而引發(fā)疼痛，第Ⅱ相（10～ 30 min）則由炎癥機制的參與而引發(fā)疼痛[4]。本實驗研究發(fā)現(xiàn)膜葉槌果藤水提物對第Ⅰ時相和第Ⅱ時相疼痛均有抑制作用，表現(xiàn)出良好的鎮(zhèn)痛作用。

炎癥是機體對損傷所產(chǎn)生的防御反應(yīng)。二甲苯作用于小鼠耳廓，刺激肥大細(xì)胞釋放組織胺、5-羥色胺等血管活性胺類，引起耳廓組織微血管擴張和通透性升高，組織液外滲，引發(fā)水腫[4]。而稀醋酸中的H+可刺激腹腔毛細(xì)血管，使得其通透性增高，引發(fā)體液向腹腔內(nèi)滲。伊文思蘭可與血漿蛋白瞬間結(jié)合，隨體液滲入腹腔，從而可通過檢測腹腔內(nèi)滲出的染料量推測出炎性物質(zhì)的滲出量[8]。本研究顯示膜葉槌果藤水提物高、中、低劑量組均對二甲苯致小鼠耳腫脹有顯著抑制作用（P＜ 0.05或P＜ 0.01），對冰醋酸致炎后小鼠腹腔洗液伊文思蘭OD值顯著低于空白對照組（P＜ 0.05或P＜ 0.01），表明膜葉槌果藤水提物有顯著的抗炎作用。

膜葉槌果藤具有治療風(fēng)濕骨痛、咽喉腫痛、腹痛、牙痛等藥效作用[10]，本研究表明膜葉槌果藤水提物可通過抑制冰醋酸致小鼠疼痛扭體反應(yīng)次數(shù)、減少福爾馬林致小鼠疼痛舔足累積時間、抑制二甲苯引起小鼠耳廓炎性腫脹度及醋酸引起小鼠腹腔毛細(xì)血管炎性通透性，表現(xiàn)出顯著的鎮(zhèn)痛抗炎作用。

[1] 廣東省食品藥品監(jiān)督管理局.廣東省中藥材標(biāo)準(zhǔn)（第二冊）[M].廣州：廣東科技出版社，2011：357-359.

[2] 國家中醫(yī)藥管理局《中華本草》編委會.中華本草（第三冊）[M].上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，1999：672.

[3] 謝宗萬.全國中草藥匯編[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，1975：452. [4] 徐叔云，卞如濂，陳修，等.藥理實驗方法學(xué)[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2002：882.

[5] 孫愛靜，徐先祥，黃曉東，等.七葉蓮花抗炎鎮(zhèn)痛作用及機制研究[J].中藥材，2014，37（2）：311-314.

[6] 李靜，田芳，李美艷，等.白屈菜提取物中生物堿的鎮(zhèn)痛抗炎作用研究[J].中國實驗方劑學(xué)雜志，2013,19（8）：262-265.

[7] 彭偉文，譚泳怡，梅全喜，等.黑面神水提物抗炎作用實驗研究[J].今日藥學(xué)，2012，22（3）：145-147.

[8] 陳奇.中藥藥理研究方法學(xué)[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，1996： 305-306.

[9] 田素英，梅全喜，鐘希文，等.復(fù)方土牛膝糖漿劑抗炎作用的實驗研究[J].中藥材，2007，30(5)：586-588.

[10] 馮潔穎，戴衛(wèi)波，李紹康，等.廣東地產(chǎn)藥材獨行千里的研究進(jìn)展[J].中國中醫(yī)藥現(xiàn)代遠(yuǎn)程教育，2014,12（9）：164-165.

Experimental Study of Anti-inflammatory and Analgesic Effects of Capparis Membranacea Aqueous Extract

Feng Jieying，Dai Weibo，Wu Fengrong（TCM Hospital of Zhongshan City，Guangdong Zhongshan 528400，China）

Objective：To study the analgesic and anti-inflammatory effects of capparis membranacea water extracts. Methods：Capparis membranacea aqueous extracts at high，middle and low doses （10.88，5.44，2.72 g/kg）were given respectively to mice by intragastric administration for 7 days.The analgesic and anti-inflammatory effects were observed through writhing response，formalin induced pain model，xylene induced ear swelling model and celiac capillary permeability test.Results：Capparis membranacea water extract can obviously inhibit the times of writhing response in mice induced by glacial acetic acid （P＜ 0.01），the I，II phase accumulation time of mouse foot licking of formalin induced pain in mice reduced significantly （P＜0.05 or P＜0.01），xylene induced ear swelling in mice and capillary permeability induced by acetic acid were significantly inhibited （P＜0.05 or P＜0.01 and P＜0.01）.Conclusion：Capparis membranacea water extract has obvious analgesic and anti-inflammatory effects.

Capparis Membranacea；Analgesic；Anti-inflammation

10.3969/j.issn.1672-5433.2015.08.006

2015-04-01）

中山市衛(wèi)生局醫(yī)學(xué)科研立項（2013J088）

馮潔穎，女，主管藥師。研究方向：醫(yī)院藥學(xué)。E-mail：zslittleshadow@sina.com

戴衛(wèi)波，男，碩士，主管藥師。研究方向：中藥臨床藥理。通訊作者E-mail：daiweibo007@163.com