白細(xì)胞濾過(guò)器對(duì)新鮮冰凍血漿主要成份及活性的影響

王淑嬋

隨著醫(yī)學(xué)技術(shù)的不斷進(jìn)步，輸血方式不斷增多及治療范圍日益擴(kuò)大，輸血及血液制品給廣大患者帶來(lái)的不良反應(yīng)，越來(lái)越引起國(guó)內(nèi)外臨床工作者的重視。有研究表明引起這些輸血相關(guān)的不良反應(yīng)的主要原因是由于血液中的白細(xì)胞［1］。臨床資料也證實(shí)過(guò)濾去除白細(xì)胞的血液可以避免或者減少輸血不良反應(yīng)的發(fā)生，去除白細(xì)胞的其安全性及臨床療效也被臨床實(shí)踐所證實(shí)［2］。過(guò)濾器法以其簡(jiǎn)便高效的特點(diǎn)為廣大采供血機(jī)構(gòu)所使用，但濾器作為外源性的生物材料可能在過(guò)濾血液時(shí)會(huì)引起血漿中一些主要成分及凝血因子活性的變化，為探討過(guò)濾器去白對(duì)新鮮冰凍血漿的成份的影響，我們對(duì)過(guò)濾前后新鮮冰凍血漿主要成分及活性進(jìn)行檢測(cè)分析，報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 隨機(jī)抽取新鮮冰凍血漿40袋，新鮮冰凍血漿由海南省?？谑兄行难咎峁?，每袋100 ml，其中A型、B型、AB型及O型新鮮冰凍血漿各10袋。在37℃水浴溶化，溶化后，立即在超凈工作室內(nèi)，按無(wú)菌技術(shù)要求抽取血漿5 ml為過(guò)濾前標(biāo)本，然后對(duì)抽取后的血漿進(jìn)行過(guò)濾，過(guò)濾速度≤120滴/min，過(guò)濾后，從過(guò)濾后的血漿中同樣抽取5 ml為過(guò)濾后的標(biāo)本，在同一時(shí)間段、同批次由專人分別對(duì)2組新鮮冰凍血漿主要成分水平及活性進(jìn)行檢測(cè)。

1.2 儀器與方法

1.2.1 儀器:一次性 FTS-RC白細(xì)胞過(guò)濾器血庫(kù)型1×200 ml(南京雙威生物醫(yī)學(xué)科技有限公司生產(chǎn))，KJX-111冰凍血漿解凍箱(蘇州醫(yī)用儀器廠生產(chǎn));Sysmex CA-7000血凝分析儀(日本 Sysmex公司生產(chǎn))，AU2700型全自動(dòng)生化分析儀(日本Olympus)，紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)(北京普析通用)及電熱恒溫水浴箱(蘇州醫(yī)用儀器廠生產(chǎn))。

1.2.2 試劑:IgG、IgA、IgM、C3 及 C4 試劑(德國(guó) Dade Behring Marburg GmbH產(chǎn)品);標(biāo)準(zhǔn)血漿、缺乏因子血漿、質(zhì)控血漿及定標(biāo)血漿及凝血試劑(日本Sysmex公司CA-7000型自動(dòng)凝血分析儀配套產(chǎn)品);活化部分凝血酶時(shí)間(APPT)測(cè)定、凝血酶時(shí)間(TT)、凝血酶原時(shí)間(PT)、纖維蛋白原(Fig)試劑(德國(guó)SIEMENS產(chǎn)品);血漿蛋白試劑(上海復(fù)興長(zhǎng)征醫(yī)學(xué)科學(xué)有限公司生產(chǎn))。

1.2.3 檢測(cè)方法:將以上留取的血漿樣品，嚴(yán)格按Sysmex CA-7000型全自動(dòng)血凝分析儀操作說(shuō)明，對(duì)所有標(biāo)本檢測(cè)凝血因子纖維蛋白原(Fib)、凝血因子Ⅱ:C(FⅡ:C)、凝血因子V:C(FV:C)、凝血因子Ⅶ:C(FⅦ:C)、凝血因子Ⅷ:C(FⅧ:C)、凝血因子Ⅸ:C(FⅨ:C)、凝血酶原時(shí)間(PT)、部分凝血活酶時(shí)間(APTT)及凝血酶時(shí)間(TT)等測(cè)定。血漿蛋白采用AU2700型全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)，其中白蛋白(Alb)采用溴酚綠法測(cè)定，總蛋白(TP)采用雙縮脲法測(cè)定。采用散射比濁法檢測(cè)IgG、IgA、IgM、C3及C4水平。以上操作嚴(yán)格按試劑說(shuō)明書(shū)進(jìn)行，每次檢測(cè)前，均進(jìn)行質(zhì)量控制。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 應(yīng)用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)量資料以±s表示，采用t檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 新鮮冰凍血漿去除白前后部分凝血因子活性及凝血功能比較 凝血因子FⅡ:C、FⅨ:C在過(guò)濾去白細(xì)胞前后比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);其余凝血因子Ⅰ(Fib)含量、FV:C、FⅦ:C及FⅧ:C活性均較過(guò)濾去白細(xì)胞前下降，過(guò)濾前后比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);凝血功能PT及TT較過(guò)濾去白細(xì)胞前延長(zhǎng)，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，而APTT較過(guò)濾去白細(xì)胞前延長(zhǎng)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。見(jiàn)表1。

表1 新鮮冰凍血漿除白前后凝血功能及部分凝血因子活性比較n=40，±s

表1 新鮮冰凍血漿除白前后凝血功能及部分凝血因子活性比較n=40，±s

項(xiàng)目 過(guò)濾前 過(guò)濾后 t值 P值Fib(g/L)2.70 ±0.46 2.37 ±0.34 3.401 0.002 FⅡ:C(%) 96.10 ±4.08 97.40 ±4.38 1.259 0.203 FV:C(%) 101.45 ±9.38 97.35 ±3.54 2.632 0.012 FⅦ:C(%) 91.67 ±5.72 84.39 ±14.88 2.669 0.010 FⅧ:C(%) 101.45 ±9.88 88.40 ±13.34 4.582 0.000 FⅨ:C(%) 83.68 ±13.93 81.63 ±14.38 0.557 0.581 PT(s) 12.93 ±1.69 13.00 ±1.93 0.191 0.850 APTT(s) 36.63 ±1.61 39.53 ±2.26 6.640 0.000 TT(s)13.75 ±2.64 13.87 ±3.09 0.219 0.828

2.2 新鮮冰凍血漿去除白前后免疫球蛋白、補(bǔ)體及血漿蛋白水平變化比較 補(bǔ)體C3、C4血漿水平在過(guò)濾去除白細(xì)胞后明顯下降，兩者前后比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01);余免疫球蛋白IgA、IgG、IgM及血漿總蛋白、血漿白蛋白血漿水平在過(guò)濾去除白細(xì)胞后，變化不明顯，前后比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。見(jiàn)表2。

表2 新鮮冰凍血漿除白前后補(bǔ)體、免疫球蛋白及血漿蛋白水平變化比較n=40，±s

表2 新鮮冰凍血漿除白前后補(bǔ)體、免疫球蛋白及血漿蛋白水平變化比較n=40，±s

項(xiàng)目 過(guò)濾前 過(guò)濾后 t值 P值C3(g/L)1.39 ±0.23 1.16 ±0.35 3.801 0.000 C4(g/L) 0.21 ±0.04 0.18 ±0.05 3.965 0.000 IgA(g/L) 3.19 ±0.84 3.03 ±0.93 0.766 0.448 IgG(g/L) 13.13 ±3.16 12.65 ±3.11 0.592 0.557 IgM(g/L) 2.73 ±0.64 2.56 ±0.57 1.440 0.158 Alb(g/L) 37.68 ±5.15 36.22 ±4.80 1.277 0.209 TP(g/L)55.80 ±9.74 53.85 ±8.91 0.944 0.351

3 討論

白細(xì)胞在血液中作為一種重要成分，在防御外來(lái)病原菌與異體抗原入侵機(jī)體時(shí)起著重要作用。有研究發(fā)現(xiàn)輸血治療過(guò)程中非治療性成份白細(xì)胞是一種“污染物”［3］。常規(guī)血液制品的保存狀態(tài)下，白細(xì)胞的壽命為9～13 d，隨著保存時(shí)間延長(zhǎng)，白細(xì)胞將逐漸裂解成碎片，釋放和生成細(xì)胞因子，這是導(dǎo)致輸血不良反應(yīng)的直接原因［4］;另同種異體輸注時(shí)產(chǎn)生白細(xì)胞抗體，引起一系列不良反應(yīng)，如輸血成分中中含有少量的白細(xì)胞可引發(fā)的非溶血性發(fā)熱反應(yīng)、成人呼吸窘迫綜合征、輸血后移植物抗宿主病、血小板輸注無(wú)效以及傳播某些病毒性疾病等，這些不良反應(yīng)后果嚴(yán)重，危害極大［5］;再就是白細(xì)胞是一些病毒的載體，輸注含白細(xì)胞的血液制品可將感染這些病毒的可能［6］。據(jù)文獻(xiàn)與美國(guó)血庫(kù)協(xié)會(huì)(AABB)資料顯示血液去除白細(xì)胞的數(shù)量與輸血反應(yīng)呈相關(guān)性［7］。研究表明血液去除白細(xì)胞后殘留的白細(xì)胞數(shù)量低于1×108/L、1×107/L、1×106/L時(shí)分別可避免因白細(xì)胞抗體所致的非溶血性輸血發(fā)熱反應(yīng)、輸血后移植物抗宿主病、HLA抗體所致的同種免疫以及與白細(xì)胞攜帶病毒相關(guān)疾病的傳播［8］。

白細(xì)胞分離是一種新型血液凈化技術(shù)，是通過(guò)濾過(guò)、吸附等方法去除外周血中白細(xì)胞(包括中性粒細(xì)胞、單核細(xì)胞和淋巴細(xì)胞)，以減輕致炎細(xì)胞及其釋放的致病性蛋白酶、氧自由基及細(xì)胞因子等物質(zhì)對(duì)機(jī)體的免疫攻擊，減少和避免機(jī)體損傷［9］。目前常用的去除白細(xì)胞的方法有離心去白法、洗滌法、沉降法、白細(xì)胞過(guò)濾器法、血細(xì)胞分離機(jī)去除法等，過(guò)濾器法因其方便高效被廣泛應(yīng)用，但作為外源性生物材料在過(guò)濾時(shí)可能對(duì)血漿中凝血因子的生物活性和血漿蛋白的含量產(chǎn)生一定的影響。本結(jié)果顯示凝血功能PT、APPT及TT較過(guò)濾去白細(xì)胞前不同程度的延長(zhǎng)，特別是APPT比過(guò)濾前明顯延長(zhǎng)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。進(jìn)一步分析，凝血因子Ⅰ(Fib)含量、FV:C、FⅦ:C及FⅧ:C活性均較過(guò)濾去白細(xì)胞前明顯下降，僅FⅡ:C、FⅨ:C在過(guò)濾去白細(xì)胞前后無(wú)明顯變化，這說(shuō)明APPT的延長(zhǎng)與部分凝血因子活性降低有關(guān)，即過(guò)濾白細(xì)胞后，新鮮冰凍血漿的凝血功能及部分凝血因子活性降低，特別是FV:C、FⅧ:C是極不穩(wěn)定的凝血因子，保存時(shí)間的延長(zhǎng)、過(guò)濾器的吸附作用及水浴融化等多種因素會(huì)對(duì)其產(chǎn)生影響，從而使其活性降低，與張昆梅等［10］報(bào)道相似。補(bǔ)體 C3、C4水平較濾過(guò)前明顯下降，考慮過(guò)程對(duì)補(bǔ)體有不同程度激活和消耗，免疫球蛋白及血漿蛋白水平無(wú)明顯改變，出現(xiàn)補(bǔ)體水平下降，考慮為外源性生物膜的生物相容性相關(guān)，生物材料對(duì)補(bǔ)體系統(tǒng)的激活，導(dǎo)致補(bǔ)體水平下降。白細(xì)胞濾器去除白細(xì)胞的原理主要為細(xì)胞的篩分和粘附作用，絕大多數(shù)血小板牯附在濾器上時(shí)，又能進(jìn)一步促進(jìn)白細(xì)胞的粘附，同時(shí)也可粘附凝血因子及補(bǔ)體成份。綜上所述，白細(xì)胞濾器可通過(guò)不同的途徑影響部分凝血因子活性及補(bǔ)體水平，白細(xì)胞過(guò)濾器對(duì)全血或紅細(xì)胞懸液性能、細(xì)胞形態(tài)及細(xì)胞免疫功能方面的影響也已有報(bào)道［11］。

總之，目前白細(xì)胞過(guò)濾器是能夠降低或一定程度上能有效的防止一些輸血不良反應(yīng)和病毒傳染，為一較為方便、安全的方法［12］，雖然白細(xì)胞濾器對(duì)輸血成份均有不同程度的影響，但隨著現(xiàn)代科學(xué)及材料科學(xué)的進(jìn)一步發(fā)展，有理由相信在不久的將來(lái)會(huì)找到更好更相容性的生物材料。目前少白細(xì)胞血液輸注在預(yù)防非溶血性發(fā)熱性輸血反應(yīng)、HLA同種免疫反應(yīng)及嗜白細(xì)胞病毒感染等方面取得一定成效，在以后的臨床應(yīng)用中須注意的是白細(xì)胞濾器對(duì)血液成份的成分及活性的影響，以便及時(shí)準(zhǔn)確實(shí)施治療措施，降低不良反應(yīng)的發(fā)生。

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