利用酶聯(lián)免疫法檢測水產(chǎn)品中氯霉素殘留的結(jié)果分析

劉萬學(xué)

（黑龍江省水產(chǎn)技術(shù)推廣總站 黑龍江 哈爾濱 150018）

利用酶聯(lián)免疫法檢測水產(chǎn)品中氯霉素殘留的結(jié)果分析

劉萬學(xué)

（黑龍江省水產(chǎn)技術(shù)推廣總站 黑龍江 哈爾濱 150018）

隨著水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的快速發(fā)展，人們對水產(chǎn)品質(zhì)量安全日益關(guān)注。濫用抗生素、激素等藥物防治水產(chǎn)動物疾病，導(dǎo)致水產(chǎn)品的質(zhì)量下降，使用禁用漁藥而導(dǎo)致水產(chǎn)品藥物殘留超標(biāo)。國家投入大量的人力物力對食品安全進(jìn)行監(jiān)督抽查，確保餐桌上的安全。氯霉素就是水產(chǎn)品質(zhì)量安全監(jiān)督抽查中的重要一項抗生素。

氯霉素最初是由委內(nèi)瑞拉鏈絲菌（StreptomycesVenezuela）的培養(yǎng)液中提取制得，是一種常用的廣譜抗生素，曾在畜牧業(yè)中廣為應(yīng)用，治療畜禽腸道感染有特效，至今已有50年的使用歷史。但氯霉素有較強(qiáng)的副作用和毒性作用，如果氯霉素在食用動物中殘留，可通過食物鏈傳給人類。長期微量攝入氯霉素會引起多種疾病，氯霉素抑制骨髓造血功能造成過敏反應(yīng)，對人體的造血系統(tǒng)危害很大，容易引起再生障礙性貧血。此外該藥還可引起腸道菌群失調(diào)及抑制抗體的形成，還會引起視神經(jīng)炎、皮疹等不良反應(yīng)，對人類的健康造成危害。氯霉素已在國外較多國家禁用，是禁用抗生素。世界上許多國家禁止此藥用于生產(chǎn)食品動物，并規(guī)定了在畜產(chǎn)品中氯霉素不得檢出。中國農(nóng)業(yè)部已將氯霉素從2000年版《中國獸藥典》中刪除并將其列為禁藥。而歐盟的進(jìn)口食品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定氯霉素含量標(biāo)準(zhǔn)為不得檢出。

目前的氯霉素的檢測方法是依據(jù)《水產(chǎn)品中氯霉素殘留量的測定氣相色譜法》使用氣相色譜儀進(jìn)行檢測，其檢測結(jié)果可靠，但是分析速度較慢。因此，大都先使用酶聯(lián)免疫法進(jìn)行篩選，篩選結(jié)果為陽性的樣品再使用氣相色譜法進(jìn)行確定。酶聯(lián)免疫法具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、高通量、成本低等優(yōu)點，因而適合于水產(chǎn)品中氯霉素日常檢測。但是在使用過程中，由于使用不同廠家的試劑盒和其精密度和靈敏度不同，而檢測出的陽性結(jié)果比率不同，陽性結(jié)果過多，這樣需要經(jīng)過氣相色譜法進(jìn)行確定，最終確定為假陽性。針對假陽性比率偏高采用兩個不同廠家的試劑盒（一個是進(jìn)口的，一個是國產(chǎn)的）做了個比對試驗∶

1、檢測材料∶采自省內(nèi)四市二縣的農(nóng)貿(mào)市場和超市的50個水產(chǎn)品樣品。

2、檢測方法∶酶聯(lián)免疫法（ELISA），陽性結(jié)果的樣品由氣相色譜法確定。

3、使用儀器∶酶標(biāo)儀、組織搗碎機(jī)、旋渦混合器、離心機(jī)、氮吹儀、均質(zhì)機(jī)、電子天平、單道可調(diào)微量移液器、8道可調(diào)微量移液器。

4、試劑∶氯霉素試劑盒、乙酸乙酯、正己烷。

5、檢測樣品前處理過程∶（1）將待測樣品的不可食部分去除，剩余可食部分從不同部位挑選約400g用組織搗碎機(jī)搗碎，然后用均質(zhì)機(jī)進(jìn)一步搗碎均質(zhì),取大約3g左右放入50mL離心管中，加入6mL乙酸乙酯,混合均勻后放入離心機(jī)中離心。（2）取離心好的樣品上清液4mL放入10mL的離心管中氮氣吹干，同時取4mL乙酸乙酯放入10mL的離心管中氮氣吹干做空白對照。（3）在吹干好的樣品中加入1mL正己烷、1mL緩沖溶液、充分振蕩混勻離心后取上層分析。

6、指標(biāo)測定∶兩種試劑盒的假陽性率測定 采用兩種試劑盒分別檢測50個水產(chǎn)品樣品，陽性樣品（殘留量≥0.3μg/kg）用氣相色譜法進(jìn)行確定，以計算其假陽性比率。

7、結(jié)果分析∶兩種試劑盒檢測水產(chǎn)品樣品的假陽性率比較

（1）兩種試劑盒檢測的50個樣品，分別有7個和10個樣品的CAP檢測值呈陽性，經(jīng)過氣相色譜法進(jìn)行確定有兩個樣品確定為陽性結(jié)果，其余樣品均為假陽性，兩個試劑盒檢測氯霉素的假陽性率分別為14%和20%。

（2）不同廠家氯霉素試劑盒在檢測效果上存在一定的差異性。其主要原因是各個廠家氯霉素試劑盒中的酶標(biāo)記物種類和采用的檢測原理不同所造成的。因此，若應(yīng)用ELISA作為篩選方法，應(yīng)選擇一種適合魚、蝦等水產(chǎn)品中氯霉素殘留檢測的試劑盒尤為重要。

（3）在多次試驗中發(fā)現(xiàn)不同批號的試劑盒所產(chǎn)生的假陽性比率不同。

（4）在試驗中發(fā)現(xiàn)檢測樣品放置時間過長影響數(shù)據(jù)的穩(wěn)定性和回收率，試劑盒溫度應(yīng)該在23℃～27℃進(jìn)行，否則結(jié)果偏高。

（5）在一年的檢測周期里還發(fā)現(xiàn)在不同的季節(jié)里購買的試劑盒在檢測過程中產(chǎn)生的假陽性不同，在氣溫低的季節(jié)里購買的試劑盒所產(chǎn)生的假陽性比率明顯低于在氣溫高的季節(jié)里購買的試劑盒所產(chǎn)生的假陽性比率，這可能跟試劑盒的保存條件有關(guān)。