不同品種雞對(duì)腸炎沙門氏菌人工感染初期免疫應(yīng)答反應(yīng)的差異

劉 璐，李建超，劉冉冉，李慶賀，文 杰，常國斌，鄭麥青，陳國宏*，趙桂蘋*

(1.揚(yáng)州大學(xué)動(dòng)物科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，揚(yáng)州 225009；2.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京畜牧獸醫(yī)研究所，北京 100193)

不同品種雞對(duì)腸炎沙門氏菌人工感染初期免疫應(yīng)答反應(yīng)的差異

劉 璐1，2，李建超1，2，劉冉冉2，李慶賀2，文 杰2，常國斌1，鄭麥青2，陳國宏1*，趙桂蘋2*

(1.揚(yáng)州大學(xué)動(dòng)物科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，揚(yáng)州 225009；2.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京畜牧獸醫(yī)研究所，北京 100193)

本試驗(yàn)以中國地方雞種北京油雞(Beijing-You chicken，BJY)和引入蛋雞品種白來航雞(White Leghorn，WL)為試驗(yàn)對(duì)象，通過人工感染腸炎沙門氏菌(SalmonellaEnteritidis，SE)，研究兩個(gè)不同遺傳背景新生雛雞在接種沙門氏菌后，部分免疫指標(biāo)和相關(guān)基因的變化規(guī)律，揭示兩品種雞在早期對(duì)SE感染抗性的的異同點(diǎn)。選擇1日齡的北京油雞和白來航雞各40只，隔離艙飼養(yǎng)，相同日糧水平條件下，兩側(cè)胸肌各注射8.7×108cfu·mL-1沙門氏菌0.5 mL，分別在攻毒后12、24、72 和144 h(12 hpi、24 hpi、72 hpi、144 hpi)測定IgY、IL-6和TNF-α血清介質(zhì)變化，熒光定量檢測血液載菌量、盲腸組織中TLR4受體、DNMT3a、DNMT3b和DNMT1甲基轉(zhuǎn)移酶基因的表達(dá)情況。結(jié)果表明：(1) 攻毒沙門氏菌后，北京油雞的IgY、IL-6、TNF-α血清介質(zhì)水平顯著高于白來航雞(P<0.05)；(2) 在12 hpi、24 hpi和72 hpi，血液載菌量品種間差異不顯著(P>0.05)，但在144 hpi白來航雞血液中載菌量顯著高于北京油雞(P<0.05)；(3) 在24 hpi，TLR4受體在北京油雞盲腸組織中的表達(dá)顯著高于白來航雞；北京油雞與白來航雞DNMT3a、DNMT3b和DNMT1甲基轉(zhuǎn)移酶基因在兩品種間的表達(dá)差異顯著(P<0.05)。結(jié)果提示，北京油雞和白來航雞對(duì)沙門氏菌的免疫性狀具有明顯的遺傳差異，北京油雞對(duì)沙門氏菌的抗性優(yōu)于白來航雞。

北京油雞；白來航雞；腸炎沙門氏菌；免疫性能

沙門氏菌是世界衛(wèi)生組織公布的一種重要的人畜共患病原菌，不僅能夠引起家禽的各種疾病，而且能夠通過污染的禽肉造成人類沙門氏菌的感染，直接威脅人類的健康[1]。長期以來，臨床上大量不合理的使用抗生素來預(yù)防和治療沙門氏菌，使沙門氏菌耐藥譜不斷增寬，導(dǎo)致具有多重耐藥性的沙門氏菌成為世界性腸炎最流行的致病菌之一[2]。通過提高畜禽抗病性可以減少抗生素的使用，節(jié)約飼養(yǎng)成本，同時(shí)減少畜禽產(chǎn)品的抗生素殘留。

多年來，在控制沙門氏菌的傳播、降低沙門氏菌感染等方面已展開了研究。研究發(fā)現(xiàn)，抗病力屬于中低等遺傳力的數(shù)量遺傳性狀，1周齡接種沙門氏菌和產(chǎn)蛋高峰接種沙門氏菌，其抗病力的遺傳力分別為0.2和0.38[3]。胡艷等[4]對(duì)4個(gè)品種種雞腸炎沙門菌天然感染率進(jìn)行了比較，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，中國地方肉用型雞種清遠(yuǎn)麻雞對(duì)腸炎沙門菌的抗性較強(qiáng)。孫鈺[5]用鼠傷寒沙門氏菌感染壽光雞和濟(jì)寧百日雞，發(fā)現(xiàn)兩雞種抗沙門氏菌能力存在差異，濟(jì)寧百日雞的血清抗體水平和盲腸TLR4表達(dá)量均極顯著高于壽光雞。本試驗(yàn)以北京油雞和白來航雞為研究對(duì)象，分析胸肌注射腸炎沙門氏菌后免疫指標(biāo)和相關(guān)基因差異表達(dá)情況，旨在探究不同雞種對(duì)腸炎沙門氏菌的抗性差異，為進(jìn)一步揭示沙門氏菌的作用機(jī)制奠定基礎(chǔ)，并為抗病育種提供理論依據(jù)和試驗(yàn)基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物及菌株

1日齡白來航雞和北京油雞均來自昌平北京油雞保種場，采用棉拭子法對(duì)父母代及試驗(yàn)用子代進(jìn)行腸炎沙門氏菌檢測，淘汰陽性個(gè)體。腸炎沙門氏菌標(biāo)準(zhǔn)株50041購于中國獸藥監(jiān)察所。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

白來航雞和北京油雞各40只，隔離倉中飼養(yǎng)。飼養(yǎng)到12日齡，以兩側(cè)胸肌各注射0.5 mL 沙門氏菌液(8.7×108cfu·mL-1)。在12 hpi、24 hpi、48 hpi和144 hpi每個(gè)品種分別隨機(jī)選取6只稱重，無菌心采血，用于血液指標(biāo)測定及血液載菌量檢測，另取盲腸置于RNA Stor (天根生化科技，北京)中，備用。

1.3 血液指標(biāo)測定

對(duì)采集的血液離心，分離血清，ELISA 法檢測血清中IgY、IL-6、TNF-α。

1.4 血液載菌量的檢測

采用保潔羅生物公司的血液DNA提取試劑盒提取血液細(xì)菌DNA。按照S.X.Deng等[6]的方法對(duì)血液中的腸炎沙門氏菌量進(jìn)行檢測。根據(jù)腸炎沙門氏菌50041的SdfI基因(GenBank登錄號(hào)：AF370707.1)設(shè)計(jì)引物和FAM標(biāo)記的探針。引物及探針序列：上游引物：5′-TCCCTGAATCTGAGAAAGAAAAACTC-3′，下游引物：5′-TTG-ATGTGGTTGGTTCGTCACT-3′，熒光探針：5′-FAMTGCAGCGAGCATGTTCTGGAAAGCTAM-RA-3′。

以3.0×108cfu為標(biāo)準(zhǔn)品，分6個(gè)梯度稀釋，制作標(biāo)準(zhǔn)品。以12 hpi、24 hpi、72 hpi和144 hpi的血液DNA為模板進(jìn)行FQ-PCR，反應(yīng)體系見表1。反應(yīng)條件：95 ℃預(yù)變性5 min；94 ℃變性30 s，55 ℃退火延伸30 s，45個(gè)循環(huán)。

1.5 RT-PCR

采用Trizol試劑(Invitrogen)提取盲腸總RNA，經(jīng)基因組DNA污染去除處理后，總RNA溶液濃度調(diào)整為1 μg·μL-1后進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄得到cDNA 。

表1 FQ-PCR反應(yīng)體系

Table 1 FQ-PCR reaction system

名稱Name劑量/μLDose5×PCRbuffer(Mg2+Free)5.00dNTPs(10mmol·L-1)0.75EXTaqDNA聚合酶(5U·μL-1)0.25DNA模板1.00上游引物(10mmol·L-1)0.60上游引物(10mmol·L-1)0.60Mg2+(25mol·L-1)5.00探針(4.23mol·L-1)0.80ddH2O11.00總體積Total25.00

1.6 引物設(shè)計(jì)

從GenBank上獲取紅色原雞TLR4 (Toll-like receptor 4)、DNMT1 (DNA methyltransferase 1)、DNMT3a(DNA methyltransferase 3a)和DNMT3b(DNA methyltransferase 3b)共4個(gè)候選基因以及內(nèi)參基因β-actin的mRNA序列，采用Primer premier 5.0 軟件設(shè)計(jì)5對(duì)引物(表2)。經(jīng)過PCR擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)1.5%瓊脂糖電泳檢測，PCR產(chǎn)物測序鑒定。

1.7 實(shí)時(shí)熒光定量PCR

以目的基因純化回收產(chǎn)物為標(biāo)準(zhǔn)品，10倍梯度稀釋后作為模板進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備。同時(shí)以盲腸組織的cDNA作為模板測定樣本的基因表達(dá)量，反應(yīng)總體積20μL：cDNA模板 1.5 μL，2×SRBRGreen master Mix 10 μL，上、下游引物(l0 μmol·L-1) 各0.6 μL，Rox reference DyeII (50×) 0.4 μL，ddH2O 6.9 μL。

表2 Q-PCR所用引物

Table 2 Primers of Q-PCR

基因Gene引物序列(5'-3')Primerssequence退火溫度/℃Tm登錄號(hào)GenBankPCR產(chǎn)物長度/bpProductsizeβ-actinF:GAGAAATTGTGCGTGACATCAR:CCTGAACCTCTCATTGCCA57NM_205518.1152TLR4F:AGTCTGAAATTGCTGAGCTCAAATR:GCGACGTTAAGCCATGGAAG60NM_001030693.1190DNMT1F:AACCGCCACAACCACTGR:GCCTGTCGGTGTTTATCC57NM_206952.1215DNMT3aF:AAAAGGGACATCTCACGCR:GCTGAACTTGGCTATCCTG55NM_001024832.1189DNMT3bF:TCGAGTTCTACCATCTGCTCAAR:TCCACTCCAGGAACCGAGAAAT60NM_001024828.1132

設(shè)無模板試劑為陰性對(duì)照。反應(yīng)條件：95 ℃預(yù)變性15 min；95 ℃ 10 s，55～60 ℃ 32 s(具體條件見表3)，40個(gè)循環(huán)。最后制作熔解曲線收集信號(hào)的程序?yàn)?5 ℃ 15 s，60 ℃ 1 min，95 ℃ 15 s和60 ℃ 15 s。分析標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍及標(biāo)準(zhǔn)品實(shí)測值與換算值間的差異，每個(gè)時(shí)間點(diǎn)6個(gè)樣本，每個(gè)樣品設(shè)3個(gè)重復(fù)，取平均值。

1.8 數(shù)據(jù)處理與分析

相對(duì)定量結(jié)果采用2-ΔΔCt方法進(jìn)行處理。試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS 18.0軟件的t檢驗(yàn)進(jìn)行分析，以P<0.05作為差異顯著性判斷標(biāo)準(zhǔn)。

2 結(jié) 果

2.1 接種沙門氏菌后兩品種間血清介質(zhì)差異

攻毒后兩品種間血清介質(zhì)差異如圖1所示。在12 hpi，血清IL-6含量白來航雞攻毒組顯著高于北京油雞(P<0.05)，72 hpi北京油雞顯著高于白來航雞(P<0.05)。在12 hpi、24 hpi，白來航雞攻毒組血清TNF-α含量顯著高于北京油雞(P<0.05)，而72 hpi北京油雞攻毒組顯著高于(P<0.05)白來航雞，144 hpi兩品種間差異不顯著(P>0.05)。在12 hpi、24 hpi和72 hpi，北京油雞血清中IgY含量顯著高于白來航雞(P<0.05)，而144 hpi兩品種間差異不顯著(P>0.05)。除血清IgY在北京油雞中各時(shí)間點(diǎn)的表達(dá)量均高于白來航雞以外，血清IL-6和TNF-α在北京油雞中的12 hpi起始表達(dá)量均低于白來航雞，但在北京油雞中的表達(dá)趨勢是先上升后下降，在白來航雞中的表達(dá)趨勢是先下降后上升，在72 hpi時(shí)北京油雞IL-6和TNF-α表達(dá)量均超過白來航雞。

*.P<0.05；NS.No significance.The same as below圖1 血清介質(zhì)變化趨勢Fig.1 The change tendency of serum medium

2.2 血液載菌量

應(yīng)用探針法檢測北京油雞和白來航雞12 hpi、24 hpi、72 hpi和144 hpi 4個(gè)時(shí)間點(diǎn)血液載菌量的變化情況。結(jié)果如圖2所示，白來航雞的載菌量表現(xiàn)為先下降后上升的趨勢，在72 hpi到達(dá)最低值，之后又開始上升，而北京油雞則在144 hpi達(dá)到最低值。

在12 hpi、24 hpi和72 hpi兩品種間血液載菌量差異不顯著(P>0.05)，144 hpi白來航雞血液載菌量顯著高于北京油雞(P<0.05)。

2.3 盲腸TLR4受體及甲基轉(zhuǎn)移酶基因表達(dá)差異

圖2 血液載菌量變化趨勢Fig.2 The change trend of blood microbial load

攻毒后兩品種間盲腸中TLR4受體及甲基轉(zhuǎn)移酶基因差異表達(dá)分析結(jié)果如圖3所示，由圖3可知，盲腸TLR4的表達(dá)量，24 hpi北京油雞攻毒組顯著高于白來航雞攻毒組(P<0.05)，而12 hpi、72 hpi和144 hpi兩者差異不顯著(P>0.05)。在72 hpi，DNMT1在北京油雞攻毒組的表達(dá)顯著高于白來航雞(P<0.05)，而其他3個(gè)時(shí)間點(diǎn)兩品種間差異不顯著(P>0.05)。在12 hpi、24 hpi和144 hpi，DNMT3a在北京油雞攻毒組中的表達(dá)顯著高于白來航雞(P<0.05)，而72 hpi白來航雞顯著高于北京油雞(P<0.05)。12 hpi，DNMT3b在北京油雞攻毒組的表達(dá)顯著高于白來航雞，而24 hpi白來航雞攻毒顯著高于北京油雞攻毒組(P<0.05)，但72 hpi和144 pih兩品種間差異不顯著(P>0.05)。

圖3 盲腸中TLR4和甲基轉(zhuǎn)移酶mRNA的相對(duì)表達(dá)水平Fig.3 The relative expression level of TLR4 and methyltransferase mRNA in caecum

3 討 論

近年來，從免疫遺傳機(jī)理的角度控制腸炎沙門氏菌的傳播和流行引起越來越多的關(guān)注。眾多研究證實(shí)，巨噬細(xì)胞合成和釋放的IL-1、IL-6、TNF-α等細(xì)胞因子不僅能作為信號(hào)激活機(jī)體的免疫防御反應(yīng)，同時(shí)能刺激巨噬細(xì)胞產(chǎn)生轉(zhuǎn)化生長因子，引起免疫損傷后免疫抑制。當(dāng)機(jī)體受到腸炎沙門氏菌刺激時(shí)，IL-6一定程度上反映了腸炎沙門氏菌和機(jī)體間相互作用[7]。革蘭氏陰性菌的LPS刺激機(jī)體單核巨噬細(xì)胞會(huì)產(chǎn)生TNF-α參與炎癥反應(yīng)，并在病原微生物清除中起作用[8]。IgY在體內(nèi)含量大、分布廣、維持時(shí)間長，是機(jī)體抗感染免疫的主要力量[9]，而且楊俊興等研究顯示，雞抗腸炎沙門氏菌和抗鼠傷寒沙門氏菌卵黃抗體(IgY)可以抑制相應(yīng)細(xì)菌的生長[10]。

在本研究中，兩品種雞攻毒后，北京油雞IL-6、TNF-α血清介質(zhì)表達(dá)量初始值低于白來航雞，但在攻毒后期顯著高于白來航雞。推測該結(jié)果可能受母源抗體影響，白來航雞較北京油雞有更高的IL-6、TNF-α母源抗體[5]，但是隨著時(shí)間的增長，母源抗體含量逐漸降低，受到沙門氏菌感染后，自身產(chǎn)生抗體的能力較北京油雞弱。L.Eckmann等的小鼠感染試驗(yàn)表明，TNF-α、IFN-γ、IL-12和IL-18等細(xì)胞因子對(duì)抵御沙門氏菌的早期感染非常重要，能提高感染小鼠的存活率[11]。本研究結(jié)果顯示，北京油雞自身產(chǎn)生IL-6、TNF-α能力較白來航雞強(qiáng)，對(duì)沙門氏菌應(yīng)激免疫應(yīng)答迅速，同時(shí)也證明了不同品種的特異性免疫功能存在遺傳差異。北京油雞各時(shí)間點(diǎn)IgY明顯高于白來航雞，表明北京油雞抗感染和抗應(yīng)激強(qiáng)，在相同的攻毒條件下，緩解沙門氏菌引起的特異性和非特異性反應(yīng)的能力比白來航雞強(qiáng)。這驗(yàn)證了中國地方雞種抗逆性強(qiáng)的優(yōu)良特性。

載菌量與雞對(duì)沙門氏菌抗性呈負(fù)相關(guān)，高的載菌量往往預(yù)示著低抗病性、低治療效果[12-15]。沙門氏菌感染后，在腸道大量繁殖，經(jīng)淋巴系統(tǒng)進(jìn)入血液，隨后在脾、盲腸、法氏囊等器官繁殖。感染后載菌量的變化可以反映機(jī)體對(duì)沙門氏菌先天性免疫應(yīng)答的能力和抗性[16]。載菌量的檢測方法很多，除了傳統(tǒng)的涂平板記數(shù)外，目前應(yīng)用較多的是實(shí)時(shí)熒光定量PCR(Real-time Q-PCR)檢測細(xì)菌中特異性DNA[6，17]。周麗民等[18]將Q-PCR法在檢測致病菌方面與細(xì)菌培養(yǎng)法作比較，發(fā)現(xiàn)Real-time Q-PCR法較細(xì)菌培養(yǎng)法具有準(zhǔn)確性好、靈敏度高、特異性強(qiáng)和快速檢測等優(yōu)點(diǎn)。雷永良等[19]采用國家標(biāo)準(zhǔn)的細(xì)菌培養(yǎng)法和實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法對(duì)食品污染物監(jiān)測中也得到了相同的結(jié)論。本研究采用qPCR的方法檢測沙門氏菌特異的DNA濃度來推測沙門氏菌的數(shù)量，從各時(shí)間點(diǎn)趨勢圖上可以看出白來航雞的血液載菌量高于北京油雞(P>0.05)。雞盲腸中高水平的載菌量附植與吞噬細(xì)胞活性降低以及白細(xì)胞增殖反應(yīng)下降相關(guān)[20]，因此推測兩品種的細(xì)胞免疫存在差異，北京油雞產(chǎn)生細(xì)胞免疫反應(yīng)的速度比白來航雞快。

TLR4作為一種跨膜信號(hào)傳遞受體，除了能識(shí)別LPS，還能識(shí)別多種配體，如內(nèi)源性配體HSP60、HSP70、HSP90等[21]。而TLR4識(shí)別LPS的信號(hào)通路主要是TLR4/MyD88/NF-kB信號(hào)通路，茍忠勇[22]研究結(jié)果表明，雞白細(xì)胞中TLR4的表達(dá)被抑制是導(dǎo)致沙門氏菌易感性增加，雞死亡的重要原因。J.R.Sadeyen等[20]利用沙門氏菌易感和抗性品系進(jìn)了TLR4基因表達(dá)量的研究，在感染后第1、2、4周，抗性品系的TLR4基因表達(dá)量均高于易感性品系，同時(shí)發(fā)現(xiàn)，TLR4基因的表達(dá)量與Gal1和Gal2基因的表達(dá)呈強(qiáng)相關(guān)(R=0.74；R=0.64)，與IL-8、IL-18和IFN-γ等免疫相關(guān)基因存在不同程度的相關(guān)性。李鵬等[23]研究發(fā)現(xiàn)，雞沙門氏菌感染后，TLR4基因mRNA表達(dá)上調(diào)，TLR4基因在沙門氏菌感染中發(fā)揮重要作用。本研究初步比較了不同品種雞盲腸TLR4基因mRNA表達(dá)量，發(fā)現(xiàn)北京油雞盲腸TLR4基因mRNA表達(dá)量顯著高于白來航雞，提示北京油雞TLR4基因表達(dá)及其信號(hào)通路激活可能要比在白來航雞活躍，從而導(dǎo)致兩品種間抗沙門氏菌免疫性能的差異。

DNA甲基化是真核生物基因表達(dá)調(diào)控的一種方式。通過在DNA的CpG二核苷酸胞嘧啶的第5位碳原子上加上甲基，即可抑制或關(guān)閉基因表達(dá)，催化這一過程的是DNA甲基轉(zhuǎn)移酶(Dnmt)[24]。DNA甲基轉(zhuǎn)移酶(DNMTs)在家禽中分兩種，一種是從頭合成酶，包括DNMT3a和DNMT3b；另一種則是DNA甲基化維持酶DNMT1。茍忠勇[22]對(duì)腸炎沙門氏菌抗病組和易感組進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)，TLR4和TLR21基因的啟動(dòng)子區(qū)甲基化不同，感染組雞甲基化水平顯著高于抗病組。F.Tian等[25]研究發(fā)現(xiàn)，感染馬立克氏病病毒后，馬立克氏病抗病品系6 3感染組DNAMT3a表達(dá)量低于對(duì)照組，并推斷馬立克氏病抗性可能和甲基化有關(guān)。孟紀(jì)倫[26]發(fā)現(xiàn)，H5N1禽流感病毒感染與非感染雞和鴨，攻毒組脾DNA甲基化均高于對(duì)照組。H.Xu等[27]對(duì)雞人工感染大腸桿菌MeDIP-seq測序發(fā)現(xiàn)，病理變化程度不同的雞全基因甲基化的基因不同，找到大量差異基因，其中包括IL-8、IL-2和IL-1。本研究中，兩種雛雞感染腸炎沙門氏菌后，甲基化維持酶基因DNMT1、DNMT3a表達(dá)在白來航雞低于北京油雞，DNMT3b表達(dá)白來航雞高于北京油雞，抗病和易感品種甲基轉(zhuǎn)移酶表達(dá)未得到總結(jié)性結(jié)論。L.Juan等[28]發(fā)現(xiàn)，雞在感染馬立克氏病后有很多基因啟動(dòng)子區(qū)域CpG位點(diǎn)甲基化產(chǎn)生動(dòng)態(tài)變化，且不同基因甲基化的動(dòng)態(tài)變化不同。

4 結(jié) 論

通過對(duì)中國地方品種北京油雞和引進(jìn)品種白來航蛋雞不同免疫性狀比較，發(fā)現(xiàn)兩品種在炎性細(xì)胞因子變化規(guī)律、血液載菌量、TLR4和DNA甲基轉(zhuǎn)移酶在盲腸的表達(dá)等性狀均呈現(xiàn)顯著差異。結(jié)果表明，北京油雞面對(duì)沙門氏菌應(yīng)激血清抗體和細(xì)胞免疫應(yīng)答較為迅速，TLR4基因表達(dá)及其信號(hào)通路激活活躍，初步說明了北京油雞這一地方品種抗腸炎沙門氏菌能力優(yōu)于引進(jìn)白來航雞。

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(編輯 郭云雁)

Differences of Early Innate Immunity between Chicken Breeds againstSalmonellaEnteritidisInfection

LIU Lu1，2，LI Jian-chao1，2，LIU Ran-ran2，LI Qing-he2，WEN Jie2，CHANG Guo-bin1，ZHENG Mai-qing2，CHEN Guo-hong1*，ZHAO Gui-ping2*

(1.CollegeofAnimalScienceandTechnology，YangzhouUniversity，Yangzhou225009，China；2.InstituteofAnimalScience，ChineseAcademyofAgriculturalSciences，Beijing100193，China)

This study was conducted to study the effect ofS.Enteritidisinfection on early immune performance between two chicken breeds(the Beijing-You chicken(BJY)，a Chinese indigenous breed，and the White Leghorn(WL)，an imported laying type breed).40 BJY chickens and 40 WL chickens on 1-day-old were reared in isolators during the same period and were challenged by intramuscular injection with 8.7×108cfu·mL-1per chick(0.5 mL) ofS.Enteritidissuspension，the concentrations of cytokines，antibodies and theS.Enteritidiscolonization level in the blood and the expression ofTLR4 and methyltransferase genes were determined in each group at 12，24，72 and 144 h after post-infection (12 hpi，24 hpi，72 hpi，144 hpi).The results showed that：(1)After challenged byS.Enteritidis，the two breeds showed significant differences in the serum antibody levels of IgY，IL-6，TNF-α，the antibody levels in BJY were higher(P<0.05)；(2) TheSEcolonization level in the blood of BJY was significantly lower than that of WL at 144 hpi (P<0.05)，while there were no differences at 12 hpi，24 hpi，72 hpi between two breeds(P>0.05)；(3) At 12 hpi the relative quantity ofTLR4 in caecum in WL chickens was higher than that in BJY chickens，while at 24 hpi BJY chickens was significantly higher than that in WL chickens(P<0.05).There were significant differences for methyltransferase genes (DNMT1，DNMT3AandDNMT3B) expression in caecum between the two breeds(P<0.05).The results demonstrated that the two breeds differed markedly in immune traits afterS.Enteritidisinfection.BJY chicken was superior than WL chickens in considering of immune index.

Beijing-You chicken；White Leghorn chicken；S.Enteritidis；immune traits

10.11843/j.issn.0366-6964.2015.06.005

2014-11-07

國家現(xiàn)代農(nóng)業(yè)肉雞產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系(CARS-42)；江蘇省農(nóng)業(yè)科技支撐計(jì)劃(BE2013392)

劉 璐(1990-)，女，江蘇徐州人，碩士，主要從事家禽遺傳育種研究，E-mail：m13051343248@163.com。劉 璐和李建超同為第一作者

*通信作者：趙桂蘋，研究員，主要從事家禽遺傳育種研究，Tel：010-62816019，E-mail：zhgp0402@iascaas.net.cn；陳國宏，教授，主要從事家禽遺傳育種研究，Tel：0514-87979206，E-mail：ghchen@yzu.edu.cn

S831；S813.3

A

0366-6964(2015)06-0903-08