標(biāo)本放置時(shí)間對(duì)兒童末梢全血細(xì)胞計(jì)數(shù)的影響

王 科，鄭 嵐，鄭 浩，楊曉雙

隨著血細(xì)胞計(jì)數(shù)儀器的廣泛使用，完全有取代手工之勢(shì)，也減少不少主觀因素造成對(duì)結(jié)果的影響，但其他因素對(duì)其結(jié)果準(zhǔn)確性的干擾依舊存在。血常規(guī)在嬰幼兒病情診斷中愈來(lái)愈發(fā)揮著重要作用，而靜脈采樣一般較困難，大部分情況下采末梢血檢測(cè)。針對(duì)我院門(mén)診就診兒童采手指末梢血，運(yùn)用ABX M60 三分類(lèi)血細(xì)胞計(jì)數(shù)儀對(duì)放置時(shí)間不同的標(biāo)本檢測(cè)，以探討放置時(shí)間對(duì)血細(xì)胞計(jì)數(shù)是否存在影響。

1 材料與方法

1.1 材料(1)儀器:ABX M60 三分類(lèi)血細(xì)胞分析儀。(2)試劑:寧波美康配套試劑。(3)采樣管:湖南三力EDTA－K2靜脈血血樣采集容器。(4)標(biāo)本來(lái)源:29 名隨機(jī)就診兒童末梢血，男21 名，女8 名，年齡0～11 歲;采樣量至少200 μl，于抗凝管內(nèi)混勻備用。

1.2 方法 在檢測(cè)前檢查本底和質(zhì)控是否在規(guī)定范圍內(nèi)，確定儀器性能指標(biāo)均在正常情況下，將采集到的末梢全血標(biāo)本在室溫下20℃～28℃分別于即刻和2 min、5 min、10 min、30 min、60 min、120 min、240 min8 個(gè)時(shí)間點(diǎn)用ABX M60 血細(xì)胞分析儀檢測(cè)，充分混勻，切勿劇烈震蕩。測(cè)其血常規(guī)結(jié)果并紀(jì)錄主要指標(biāo)(WBC 總數(shù)，GRAN%、LYM%、MON%、RBC、Hb、Hct、Plt)值，與各組參數(shù)均值組比較。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用配對(duì)t 檢驗(yàn)，用EXCEL2007 處理數(shù)據(jù)

2 結(jié)果

29 例末梢全血標(biāo)本在不同時(shí)間測(cè)得的血細(xì)胞分析參數(shù)結(jié)果見(jiàn)表1。其檢驗(yàn)值t 和P 值，見(jiàn)表2。

表1 29 例末梢全血標(biāo)本在不同放置時(shí)間的測(cè)定結(jié)果(±s)

表1 29 例末梢全血標(biāo)本在不同放置時(shí)間的測(cè)定結(jié)果(±s)

注:* PLT 均值采用2～240 min 穩(wěn)定值均數(shù)。即刻組PLT(231 ±69)已經(jīng)偏離整體PLT 均數(shù)值(268 ±77)的95%可信區(qū)間，所以剔除該組重新計(jì)算均值作為對(duì)照組。

組別WBC(×109/L)GRAN%LYM%MONO%RBC(×1012/L)Hb(g/L)HCT(%)PLT(×109/L)即刻(0)9.72 ±3.1064.3 ±13.528.4 ±11.87.3 ±3.04.38 ±0.43117.64 ±9.32 34.74 ±3.16231 ±69 29.67 ±3.0364.5 ±13.728.3 ±11.87.3 ±3.14.38 ±0.42117.79 ±9.36 34.81 ±3.03270 ±78 59.67 ±3.0364.2 ±13.428.4 ±11.67.4 ±3.04.38 ±0.42117.75 ±9.41 34.71 ±3.2273 ±81 109.66 ±3.0564.3 ±13.528.3 ±11.77.4 ±3.04.38 ±0.41117.61 ±9.32 34.71 ±3.13274 ±82 309.67 ±3.0364.4 ±13.428.3 ±11.67.4 ±3.04.39 ±0.42118.18 ±9.63 34.59 ±2.86273 ±81 609.68 ±3.0364.4 ±13.628.3 ±11.87.3 ±2.94.40 ±0.42118.18 ±9.59 34.83 ±2.91275 ±85 1209.70 ±3.0064.0 ±13.528.5 ±11.87.5 ±3.04.40 ±0.43118.25 ±9.47 34.83 ±2.82274 ±81 2409.77 ±3.0763.8 ±13.528.7 ±11.87.5 ±3.14.40 ±0.44118.93 ±10.32 35.05 ±3.08276 ±81均值9.69 ±3.0464.2 ±13.528.4 ±11.77.4 ±3.04.39 ±0.42118.02 ±9.47 34.78 ±2.95274 ±80*

表2 各參數(shù)不同時(shí)刻與相應(yīng)均值組t 檢驗(yàn)P 值

室溫下兒童末梢全血標(biāo)本隨著不同的放置時(shí)間，在0～4 h 內(nèi)，白細(xì)胞WBC 總數(shù)及分類(lèi)、紅細(xì)胞RBC、血紅蛋白Hb、紅細(xì)胞壓積Hct、有輕微的變化，與均值對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。其中，在即刻組中，中性粒細(xì)胞GRAN%較均值對(duì)照組略低，中值細(xì)胞MON%較均值對(duì)照組略高，其中有2 例變化較明顯，2 min 后的測(cè)定結(jié)果與均值無(wú)明顯變化。

血小板參數(shù)PLT 變化最為明顯，PLT 計(jì)數(shù)在即刻組測(cè)定的結(jié)果普遍較低，與均值對(duì)照組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，2 min 后逐漸升高，5 min 后趨于穩(wěn)定。

3 討論

ABX M60 三分類(lèi)血細(xì)胞分析儀采用電阻抗法原理，用血量極少20 μl，對(duì)于采幼兒末梢全血可以直接上機(jī)檢測(cè)，無(wú)需稀釋?zhuān)奖懔藱z測(cè)。全自動(dòng)血液分析儀直接對(duì)全血進(jìn)行檢查，減少了人為稀釋樣本及折算產(chǎn)生的誤差，使得臨床檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性及工作效率大大提高［1］。

末梢血的混勻方式對(duì)檢測(cè)結(jié)果有著重要影響，最佳混勻方式為輕輕撥動(dòng)8 次混勻方式，較顛倒混勻8 次、搖床10 min、手指彈3 次混勻更為規(guī)范［2］。

由于微量采血管用EDTA-K2 抗凝，抗凝劑多血細(xì)胞形態(tài)有著或多或少的改變。EDTA－K2 抗凝時(shí)，引起白細(xì)胞形態(tài)的改變，特別是中性粒細(xì)胞發(fā)生腫脹，放置時(shí)間過(guò)短，體積較小的中性粒細(xì)胞體積變化不大［3］，同時(shí)末梢血中組織液與血細(xì)胞及抗凝劑混勻不均，可導(dǎo)致細(xì)胞發(fā)生粘連，通過(guò)計(jì)數(shù)孔時(shí)誤將其或及淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)到中值細(xì)胞MON 中，導(dǎo)致即刻組GRAN%偏低，MON% 偏高，或LYM% 偏低，MON% 偏高或GRAN% 偏低LYM%偏低MON%偏高現(xiàn)象，誤差在可接受范圍之內(nèi)。

PLT 離體后，易粘附、聚集，在采集末梢血過(guò)程中，會(huì)親附于采血管壁，較血漿、組織液、其他有形成分下降緩慢，同時(shí)未與抗凝劑完全混勻?qū)е翽LT 聚集體產(chǎn)生的脈沖大于血球儀設(shè)定的單一PLT 脈沖值，無(wú)法計(jì)入PLT 結(jié)果內(nèi)，使得結(jié)果偏低?？赡婢奂疨LT 隨著標(biāo)本放置時(shí)間的延長(zhǎng)逐漸解聚形成分布均一的單個(gè)PLT［4］。立即檢測(cè)組的PLT 結(jié)果與均值比較顯著偏低，2 min 組與均值比較已無(wú)明顯差異，5 min 后結(jié)果趨于穩(wěn)定。

隨著每次檢測(cè)前的混勻及附著于管壁與空氣的接觸，導(dǎo)致水分的進(jìn)一步揮發(fā)，各參數(shù)濃度值相對(duì)升高，2 h 的測(cè)定值高于均數(shù)組，HGB 和Hct 可以更直觀的反映，P 值愈接近0.05。

綜上所述，末梢全血標(biāo)本進(jìn)行血細(xì)胞分析應(yīng)至少在2 min后進(jìn)行，最好在5 min 后檢測(cè)，放置不宜超過(guò)4 h 且不宜多次操作，個(gè)人認(rèn)為放置時(shí)間5～60 min 內(nèi)完成檢測(cè)，其結(jié)果差異不大，能最大限度的保證結(jié)果的準(zhǔn)確性，更好的為臨床診斷提供依據(jù)。

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