干細(xì)胞移植治療肝功能衰竭的研究進(jìn)展及應(yīng)用前景

吳貽琛 萬志紅 辛紹杰

干細(xì)胞移植治療肝功能衰竭的研究進(jìn)展及應(yīng)用前景

吳貽琛 萬志紅 辛紹杰

肝臟是機(jī)體新陳代謝的中心，參與多種生理功能，肝功能衰竭是多種因素引起的嚴(yán)重肝臟損害，導(dǎo)致降解各種毒性物質(zhì)、合成白蛋白等必需物質(zhì)、分泌細(xì)胞因子、防御細(xì)菌病毒入侵等功能發(fā)生嚴(yán)重障礙或失代償，病情常于短時(shí)間內(nèi)迅猛進(jìn)展，出現(xiàn)以凝血機(jī)制障礙、黃疸、肝性腦病、腹水等為主要表現(xiàn)的一組臨床癥候群［1］。其發(fā)生機(jī)制十分復(fù)雜，從肝細(xì)胞大量死亡角度看，肝組織在肝功能衰竭發(fā)生過程中依次經(jīng)受了免疫損傷、缺血缺氧性損傷和內(nèi)毒素血癥的三重致死性打擊，在疾病的不同時(shí)期，各自占有一定的主導(dǎo)地位［2］。因此，在疾病的不同時(shí)期，治療方法也有所不同，但目前總體病死率高，治療仍是世界性難題。

目前臨床上治療肝功能衰竭的有效手段，主要包括人工肝和原位肝臟移植［3］。人工肝治療技術(shù)開展比較廣泛，結(jié)合內(nèi)科綜合治療，可以降低病死率，但存在潛在未知感染的風(fēng)險(xiǎn)，且該手段并非病因治療，最終恢復(fù)還需依賴患者自身肝細(xì)胞的再生，故療效尚不理想。原位肝移植是目前公認(rèn)的治療肝功能衰竭最為有效的方法，但因供體缺乏、手術(shù)損傷、免疫排斥、長(zhǎng)期應(yīng)用免疫抑制劑和高額的費(fèi)用等缺陷，其臨床應(yīng)用嚴(yán)重受限，很多患者在漫長(zhǎng)地等待移植供體過程中死亡。因此，及時(shí)有效的支持治療和最大限度促進(jìn)肝細(xì)胞再生將有助于肝功能衰竭患者自行恢復(fù)或者渡過等待移植時(shí)間的難關(guān)［4］。

近年來隨著細(xì)胞生物學(xué)尤其是干細(xì)胞生物學(xué)的迅速發(fā)展，干細(xì)胞治療在基礎(chǔ)研究領(lǐng)域取得了重大進(jìn)展。干細(xì)胞治療是指將干細(xì)胞或由其分化產(chǎn)生的功能細(xì)胞直接或經(jīng)體外遺傳技術(shù)處理后，植入病變部位，使干細(xì)胞在組織中生長(zhǎng)分化，以代替喪失功能的病變細(xì)胞，重構(gòu)損傷組織，恢復(fù)器官功能［5-9］。有研究［10-11］證實(shí)干細(xì)胞在治療肝臟疾病的實(shí)驗(yàn)中已取得不錯(cuò)的療效。干細(xì)胞移植具有供體細(xì)胞來源豐富、手術(shù)損傷小、免疫排斥少、可重復(fù)使用、費(fèi)用低等優(yōu)點(diǎn)，有望成為替代療法的新選擇，為肝功能衰竭治療開辟新的途徑。

干細(xì)胞以多種形式存在于人體內(nèi)，他們的共同特點(diǎn)是增殖能力極強(qiáng)并且可以分化為其他多種細(xì)胞。自細(xì)胞治療技術(shù)開展以來，治療細(xì)胞由最初的同種異體成熟肝細(xì)胞，發(fā)展為異種肝細(xì)胞、胎肝細(xì)胞、骨髓干細(xì)胞、臍血干細(xì)胞、外周血干細(xì)胞、胚胎干細(xì)胞、誘導(dǎo)型多能干細(xì)胞等。

一、胚胎干細(xì)胞

胚胎干細(xì)胞（em bryonic stem cell，ESC）：ESC屬于全能干細(xì)胞，是干細(xì)胞家族分化潛能最高的一種細(xì)胞，可經(jīng)誘導(dǎo)分化為外、中、內(nèi)胚層的多種細(xì)胞，從而成為一個(gè)身體組織或器官的細(xì)胞，包括肝細(xì)胞。因此，理論上它們可用于肝再生。ESC目前的研究工作大多數(shù)集中于探索有效的方法來誘導(dǎo)其分化，使其成為有功能的肝細(xì)胞，并科學(xué)、客觀地確定這種分化的完整性。Touboul等［12］應(yīng)用激活素、成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子（fibroblast growth factor，F(xiàn) G F）-2、骨形態(tài)生成蛋白-4、磷酸肌醇-3激酶（phosphoinositide-3kinase，PI-3 K）抑制劑和F G F-10、維甲酸、激活素受體拮抗劑分兩步誘導(dǎo)ESC分化，并成功獲得了肝細(xì)胞。ESC分化的判斷標(biāo)準(zhǔn)非常重要，確定是否成功誘導(dǎo)分化出有功能的肝細(xì)胞，不僅在于白蛋白的合成和分泌，也在于吲哚花青綠的吸收和釋放、糖原儲(chǔ)存、細(xì)胞色素P450氧化代謝功能等。目前，人類胚胎內(nèi)胚層分化而來的ESC移植給急性肝損傷小鼠后，可在小鼠體內(nèi)分化成肝細(xì)胞，完成肝細(xì)胞的功能［13］。但是，ESC作為肝干細(xì)胞移植的種子細(xì)胞還存在一些限制，例如，它的獲得需要克服倫理的障礙，而且移植后又有致畸胎瘤的潛在風(fēng)險(xiǎn)。

二、骨髓干細(xì)胞

骨髓干細(xì)胞（bone marrow stem cell，B M SC）是目前干細(xì)胞研究的重點(diǎn)及熱點(diǎn)，原因可能是不論體內(nèi)還是體外實(shí)驗(yàn)，B M SC的獲得都相對(duì)更加容易。B M SC主要有以下兩種，即可生成各種血細(xì)胞的造血干細(xì)胞和位于骨髓間質(zhì)的間充質(zhì)細(xì)胞，它們都具有在一定條件下誘導(dǎo)分化為其他細(xì)胞的能力，因此理論上在特定的條件及環(huán)境誘導(dǎo)下，它們可以逐步分化為肝臟再生所需的細(xì)胞，幫助受損肝臟完成正常生理功能，達(dá)到治療目的，且不涉及醫(yī)學(xué)倫理。Petersen等［14］1999年首先報(bào)道，用2-A FF（2-acetvlamin of luorene）阻斷大鼠肝細(xì)胞增殖，C Cl4造成肝細(xì)胞損傷后，進(jìn)行性別交叉骨髓細(xì)胞移植或者全肝移植，在肝臟中發(fā)現(xiàn)來源于骨髓的肝細(xì)胞。Theise等［15］又報(bào)道了女性患者接受男性供體的骨髓移植后，受體的一些肝細(xì)胞和膽管上皮細(xì)胞核內(nèi)含有Y染色體。兩者均證明了骨髓干細(xì)胞能夠在肝內(nèi)轉(zhuǎn)化為肝卵圓細(xì)胞甚至成熟的肝細(xì)胞和膽管細(xì)胞。Miyazaki等［16］通過切除90%的動(dòng)物肝臟建立A L F模型，并體外誘導(dǎo)B M SCs向肝樣細(xì)胞分化后治療動(dòng)物A L F，取得了良好的效果。

（一）造血干細(xì)胞 造血干細(xì)胞（H ematopoietic stem cells，H SC）是人類最早發(fā)現(xiàn)的一種，也是目前研究最多的一種，已廣泛應(yīng)用于細(xì)胞替代治療、基因治療及組織工程，體外分離、純化技術(shù)也最成熟。H SC表面抗原標(biāo)志主要有：C D34+、C D34-Lin-、C D133+、K D R+等，來源于多種組織，如骨髓、臍血、外周血和胎肝等，以骨髓中數(shù)量最多。有研究證實(shí)［17］，高度純化的H SC不僅能補(bǔ)充多種造血系統(tǒng)成分，還可以在添加酪氨酸的肝損傷動(dòng)物模型中分化為肝細(xì)胞，治療肝功能衰竭。目前，國內(nèi)外已開展多項(xiàng)骨髓來源H SC治療肝功能衰竭的臨床試驗(yàn)，結(jié)果顯示，接受H SC治療的患者體內(nèi)可檢測(cè)到肝細(xì)胞再生，并伴有血清T BIL下降、A L B升高及凝血功能改善［18-19］。另外，多個(gè)研究中心也開展了外周血H SC治療肝病的研究。如Di Cam pli等［20］用G-CSF動(dòng)員急性肝功能衰竭患者H SC，證實(shí)外周血C D34+細(xì)胞數(shù)量增加。國內(nèi)的Yan等［21］采用外周血H SC治療H B V相關(guān)的慢性肝功能衰竭，1周后患者的A L B明顯升高，A L T、A ST和T BIL下降，隨訪1年，患者Child-Turcotte-Pugh評(píng)分明顯改善。Gordon等［22］先予采用G-CSF動(dòng)員，再由外周血中提取C D34+細(xì)胞，體外培養(yǎng)擴(kuò)增后回輸?shù)闹委煼椒?，患者癥狀緩解、肝功能改善，所有患者在治療1年后仍存活，生化指標(biāo)持續(xù)改善。李楠等［23］開展的外周血H SC治療慢性肝功能衰竭也有相似的結(jié)果。

（二）間充質(zhì)干細(xì)胞（mesenchy mal stem cell，M SC） 這是一種具有多向分化潛能的非造血干細(xì)胞，可分化為肝細(xì)胞、庫普弗細(xì)胞、膽管細(xì)胞及肝竇內(nèi)皮細(xì)胞等多種肝臟組成細(xì)胞。M SC最初是由骨髓中分離得到，為造血干細(xì)胞的發(fā)育分化提供必需的微環(huán)境，之后又在皮膚、胰腺、臍帶及脂肪等多種組織中分離得到，來源豐富。研究發(fā)現(xiàn)M SC具有多種細(xì)胞表面抗原，但無特異性，一般認(rèn)為表達(dá)C D13、C D29、C D44、C D54、C D73、C D90、C D105、C D166、Stro-1等，不表達(dá)C D11b、C D14、C D31、C D34、C D45、C D79a、H L A-D R等［24］。M SC可以在體外大量擴(kuò)增和長(zhǎng)期培養(yǎng)，不僅可作為肝干細(xì)胞移植的種子細(xì)胞，而且易于接受外源基因的導(dǎo)入，用作基因治療的靶細(xì)胞。目前已發(fā)表的B M-M SCs移植試驗(yàn)中，大部分應(yīng)用單純B M-M SCs移植的方法，總體療效良好，有較高的安全性。B M-M SCs除了部分分化為相應(yīng)組織細(xì)胞如肝細(xì)胞外，同時(shí)可合成多種生長(zhǎng)因子，對(duì)肝臟內(nèi)局部微環(huán)境產(chǎn)生營養(yǎng)性旁分泌作用，包括抗炎、刺激內(nèi)源性細(xì)胞增殖和血管增生等。Suganu ma等［25，26］應(yīng)用B M-M SCs移植治療肝功能衰竭大鼠，發(fā)現(xiàn) B M-M SCs能夠分泌多種生長(zhǎng)因子和細(xì)胞因子，促進(jìn)肝臟血管再生及肝細(xì)胞增殖，抑制免疫細(xì)胞向肝臟遷移，調(diào)節(jié)肝功能衰竭大鼠肝臟及全身炎癥反應(yīng)，提高了大鼠的生存率。研究還表明［27］，B M-M SCs分泌的因子能夠逆轉(zhuǎn)急性組織損傷，可能與其上調(diào)IL-10水平有關(guān)。另有研究發(fā)現(xiàn)，損傷的肝組織可以通過分泌細(xì)胞因子的方式促進(jìn)干細(xì)胞向肝細(xì)胞的分化［28］。隨著B M-M SC再生研究的深入，發(fā)現(xiàn)其具有遷徙至損傷或者炎癥病變部位的能力，并可參與組織再生，但確切作用機(jī)制還沒有得到完全清楚的闡述。近年來，有關(guān)此方面的研究已經(jīng)逐步開展臨床實(shí)驗(yàn)。Pietrosi［29］等分析了全世界27例肝功能衰竭患者 B M-M SCs移植術(shù)后的臨床資料，結(jié)果顯示，大部分患者病情有不同程度的好轉(zhuǎn)。Peng等［30］進(jìn)行的自體B M-M SC移植的臨床研究，選取53例終末期乙肝患者為治療組，選擇同期105例終末期乙肝患者作為對(duì)照組，經(jīng)過隨訪觀察，證實(shí)治療組肝功、M eld評(píng)分等指標(biāo)改善均明顯優(yōu)于對(duì)照組，未發(fā)現(xiàn)嚴(yán)重不良反應(yīng)及并發(fā)癥。以上一系列研究表明，自體 B M-M SCs移植安全有效，對(duì)于肝臟疾病的恢復(fù)具有較好的治療作用。

然而，并不是所有的研究都很樂觀，近期一些機(jī)構(gòu)的研究就曾證實(shí)［31-34］，由骨髓干細(xì)胞分化而來的肝細(xì)胞樣細(xì)胞沒有像所預(yù)期的那樣，擁有理想的自我復(fù)制能力。更有研究指出［35］，一定概率下骨髓干細(xì)胞可以分化為可生成膠質(zhì)纖維的肝星狀細(xì)胞和成纖維細(xì)胞，使肝臟內(nèi)生成了無法逆轉(zhuǎn)的瘢痕樣組織，當(dāng)其移植到患者體內(nèi)后，有可能促進(jìn)肝纖維化的發(fā)展。

三、臍血干細(xì)胞

臍血干細(xì)胞（u m bilical cord blood stem cell，U C BSC）：臍血中含有無限制成體干細(xì)胞、間充質(zhì)干細(xì)胞、造血干細(xì)胞等多種干細(xì)胞成分。臍血中干細(xì)胞比例明顯高于成人骨髓及外周血。與B M SC相比，U C BSC更為原始，免疫原性較弱，不表達(dá)主要組織相 容 性復(fù) 合 基 因 （M H C）Ⅱ 類 分 子和 死 亡 因 子 配體（FasL），不表達(dá) M H CⅠ類分子，也不表達(dá)白細(xì)胞分化因子7-1 （B7-1）、B7-2、C D40、C D40L等分子，可以逃避免疫監(jiān)視，來源廣泛，數(shù)量多，分化能力強(qiáng)，易于采集和保存，臍血受胎盤屏障的保護(hù)，被病毒、細(xì)菌污染的概率低，并且沒有倫理學(xué)的限制。目前，U C BSC分化為肝細(xì)胞的可行性及其移植的療效也已經(jīng)得 以 證 實(shí)［36，37］。

四、誘導(dǎo)多能干細(xì)胞

誘導(dǎo)多能 干細(xì)胞（induced pluripotent stem cell，iPSC）：2006年，Takahashi［38］從24種與細(xì)胞多能性相關(guān)的基因中篩選出了4個(gè)轉(zhuǎn)錄基因（Oct4、Sox2、Klf4和c-M yc，O S K M），利用逆轉(zhuǎn)錄病毒載體將這些因子轉(zhuǎn)染到小鼠的成體細(xì)胞（小鼠胚胎成纖維細(xì)胞和成體尾巴成纖維細(xì)胞），使這些細(xì)胞重新編程，利用另一個(gè)多能性標(biāo)記分子Fbx15的表達(dá)對(duì)轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞進(jìn)行篩選，得到了類似小鼠胚胎干細(xì)胞特性的多潛能干細(xì)胞，這就是誘導(dǎo)多能干細(xì)胞。2007 年，Takahashi［39］利用 O S K M 四種基因轉(zhuǎn)錄因子將人皮膚的成纖維細(xì)胞重新編程為iPSC。自此不同種屬、不同組織來源、不同年齡、不同疾病患者的細(xì)胞均可誘導(dǎo)產(chǎn)生iPSC。iPSC像胚胎干細(xì)胞一樣具有多向分化潛能，在體內(nèi)可以分化為3個(gè)胚層來源的所有細(xì)胞，進(jìn)而參與形成機(jī)體某種組織和器官，如肝臟［40］。理論上iPSC也可能發(fā)育為胚胎，重新孕育生命。Sullivan等［41］證實(shí)iPSC可分化為肝臟內(nèi)胚層細(xì)胞，且有效分化率為70%～90% ，iPSC源性肝細(xì)胞可表達(dá)肝細(xì)胞核因子（hepatocyte nuclear factor，H N F）-4α，并合成Alb、A FP、細(xì)胞色素（cytochro me P450，C Y P）-7 A1等肝臟功能性蛋白。iPSC的建立為獲得多潛能性干細(xì)胞提供了一個(gè)相對(duì)簡(jiǎn)易可靠的新方法，而且個(gè)體特異來源的iPSC不會(huì)引起免疫排斥反應(yīng)，更為重要的是iPSC細(xì)胞的建立不需要卵細(xì)胞，也不需要破壞胚胎發(fā)育，避免了倫理上的限制，但仍存在重編程效率低、編程基因致癌風(fēng)險(xiǎn)高、細(xì)胞增殖分化不可控等問題。

五、肝干細(xì)胞移植的理論基礎(chǔ)

目前關(guān)于歸巢的干細(xì)胞在終末期肝病治療中的作用機(jī)理尚無定論，主要有3種假說：①細(xì)胞轉(zhuǎn)分化學(xué)說，認(rèn)為歸巢的干細(xì)胞在體內(nèi)分化為功能性肝細(xì)胞，替代肝臟原有功能。②細(xì)胞融合學(xué)說，認(rèn)為歸巢的干細(xì)胞與原有肝細(xì)胞融合成為含兩套或多套染色體的細(xì)胞，再經(jīng)減數(shù)分裂形成“中間細(xì)胞”，從而發(fā)揮作用。③旁分泌學(xué)說［42］，目前被大多數(shù)學(xué)者所接受，該學(xué)說認(rèn)為歸巢的干細(xì)胞通過分泌各種細(xì)胞因子，如IL-6、T N F-α和H G F等，一方面作用于已損傷的肝細(xì)胞，改善其功能狀態(tài)；另一方面，抑制局部免疫反應(yīng)、增加血管再生，促進(jìn)干細(xì)胞歸巢并減少其凋亡，延緩纖維化進(jìn)展。目前還需要大量相關(guān)研究以明確干細(xì)胞的作用機(jī)理。

六、問題及展望

肝干細(xì)胞移植已經(jīng)初步應(yīng)用于臨床，但是作為一種新興的療法，目前仍存在一些技術(shù)問題：（一）干細(xì)胞本身生理特性的研究還需要進(jìn)一步加深，闡明干細(xì)胞移植治療的作用機(jī)制及干細(xì)胞誘導(dǎo)分化機(jī)制，對(duì)后續(xù)研究非常重要；（二）對(duì)干細(xì)胞體外分離、培養(yǎng)、鑒定等技術(shù)需要進(jìn)一步簡(jiǎn)化；（三）培養(yǎng)、分化過程中需要預(yù)防干細(xì)胞向腫瘤細(xì)胞分化；（四）移植細(xì)胞數(shù)量和療效之間的關(guān)系目前未闡明，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中移植數(shù)量多為 106～107個(gè)，而據(jù)推算，移植于人體的干細(xì)胞數(shù)量約需109個(gè)，確切的移植數(shù)量還需要大量研究來確定；（五）肝功能衰竭患者體內(nèi)的免疫狀態(tài)、內(nèi)毒素、高膽紅素使自身肝細(xì)胞呈大塊或亞大塊壞死而難以生存，干細(xì)胞的生存及功能狀態(tài)如何維持？（六）移植時(shí)機(jī)、移植途徑及細(xì)胞發(fā)揮功能所需時(shí)間也是值得研究的問題；（七）目前臨床上仍只能通過移植后功能檢測(cè)來評(píng)價(jià)干細(xì)胞移植后的療效，無法真正顯示干細(xì)胞的分布，因此需要尋求無創(chuàng)、簡(jiǎn)便、有效的示蹤手段加以監(jiān)測(cè)；（八）干細(xì)胞與體內(nèi)組織細(xì)胞的相互作用機(jī)制以及影響仍有待進(jìn)一步研究；（九）干細(xì)胞移植治療肝功能衰竭的療效還需要得到設(shè)計(jì)嚴(yán)格的臨床試驗(yàn)的驗(yàn)證。

盡管存在上述一些問題，但干細(xì)胞移植仍為肝功能衰竭患者提供了一條新的治療途徑。其具體作用機(jī)制仍亟待深入研究和探討，且干細(xì)胞真正應(yīng)用于臨床治療肝衰竭還有漫長(zhǎng)的道路要走，但相信不久的將來，干細(xì)胞移植技術(shù)必將發(fā)揮更加重要的作用。

1 中華醫(yī)學(xué)會(huì)感染病學(xué)分會(huì)肝衰竭與人工肝學(xué)組，中華醫(yī)學(xué)會(huì)肝病學(xué)分會(huì)重型肝病與人工肝學(xué)組.肝衰竭診治指南.中華臨床感染病雜志，2012，5：321-327.

2 葉一農(nóng)，高志良.乙型肝炎肝衰竭發(fā)生機(jī)制中的三重打擊.傳染病信息，2009，22：276-279.

3 O’Grady J.Liver transplantation for acute liver failure.Best Pract Res Clin Gastroenterol，2012，26：27-33.

4 Ezzat T M，Dhar D K，Newso me P N，et al.Use of hepatocyte and stem cells for treatment of post-resectional liver failure：are we there yet.Liver Int，2011，31：773-784.

5 Tan J，W u W，Xu X，et al.Induction therapy with autologous mesenchy mal stem cells in living-related kidney transplants：a rando mized controlled trial.JA M A，2012，307：1169-1177.

6 Mathieu E，Lamirault G，Toquet C，et al.Intramyocardial del ivery of mesenchy mal stem cell-seeded hydrogel preserves cardiac function and attenuates ventricular rem odeling after m yocardial infarction. P LoS O ne，2012，7：e51991.

7 Connick P，Kolappan M，Crawley C，et al.Autologous mesenchymal stem cells for the treatment of secondary progressive m ultiple sclerosis：an open-label phase 2a proof-of-concept study.Lancet Neurol，2012，11：150-156.

8 Davatchi F，A bdollahi BS，M ohyeddin M，et al.M esenchy mal stem celltrerapy for knee osteoarthritis.Preliminary report offour patients.Int J R heu m Dis，2011，14：211-215.

9 K haraziha P，H ellstr? m P M，N oorinayer B，et al.Im provement of liver function in liver cirrhosis patients after autologous mesenchy mal stem cells injection：a phase I-II clinical trial.Eur J Gastroenterol H epatol，2009，21：1199-1205.

10 Ren H，Zhao Q，Cheng T，et al.No contribution of u m bilical cord mesenchy mal stro mal cells to capillarization and venularization of hepatic sinusoids acco m panied by hepatic differentiation in carbon tetrachloride-induced m ouse liver fibrosis.Cytotherapy，2010，12：371-383.

三相并網(wǎng)逆變器的MPDPC策略如圖3所示,不同的電壓矢量產(chǎn)生不同的有功和無功功率變化,因此,存在多種方式去選擇合適的開關(guān)狀態(tài)去控制有功和無功功率。采樣三相電網(wǎng)電壓和電流,分別在8個(gè)矢量的作用下計(jì)算出下一周期的功率預(yù)測(cè)值,將預(yù)測(cè)值代入式(9),根據(jù)誤差最小化原則,選取最優(yōu)矢量。p*由直流電壓外環(huán)PI調(diào)節(jié)器的輸出與直流電壓的乘積給定,q*通常設(shè)為0,以實(shí)現(xiàn)單位功率因數(shù)運(yùn)行。

11 Lee K D.A pplications of mesenehy mal stem cells：an updated review.Chang G ung M ed J，2008，31：228-236.

12 Touboul T，H annan N R，Corbineau S，et al.Generation of functional hepatocytes fro m hu man em bryonic stem cells under chemically defined conditions that recapitulate liver develop ment. H epatology，2010，51：1754-1765.

13 Navarro-Alvarez N，Soto-G utierrez A，K obayashi N.H epatic stem cells and liver develop ment.M ethods M ol Biol，2010，640：181-236.

14 Petersen B E，Bowen W C，Patrene K D，et al.Bone marrow as a potential source of hepatic oval cells.Science，1999，284：1168-1170.

15 T heise N D，Nim makayalu M，Gardner R，et al.Liver fro m bone marrow in hu mans.H epatology，2000，32：11-16.

16 Miyazaki M，H ardjo M，M asaka T，et al.Isolation of a bone marrow-derived stem cellline with high proliferation potential and its application for preventing acute fatal liver failure.Stem Cells，2007，25：2855-2863.

17 Cantz T，M anns M P，Ott M.Stem cells in liver regeneration and therapy.Cell Tissue Res，2008，331：271-282.

18 Terai S，Ishikawa T，O m ori K，et al.Im proved liver function in patients with liver cirrhosis after autologous bone marrow cell infusion therapy.Stem Cells，2006，24：2292-2298.

19 姚鵬，胡大榮，王帥，等.人自體骨髓干細(xì)胞移植治療慢性肝功能衰竭的研究.中華肝臟病雜志，2005，13：941-942.

20 Di Cam pli C，Zocco M A，Saulnier N，et al.Safety and efficacy profile of G-CSF therapy in patients with acute on chronic liver failure.Dig Liver Dis，2007，39：1071-1076.

21 Yan L，H an Y，W ang JB，et al.Peripheral blood m onocytes fro m patients with H B V related deco m pensated liver cirrhosis can differentiate into functional hepatocytes.A m J H ematol，2007，82：945-954.

22 Gordon M Y，Levicar N，Pai M，et al.Characterization and cl inical application of hu man C D34+stem/progenitor cell populations m obilized into the blood by granulocyte colony-stim ulating factor. Stem Cells，2006，24：1822-1830.

23 李楠，石玉玲，李娜，等.經(jīng)門靜脈外周血干細(xì)胞移植治療肝硬化失代償期的療效研究.中國全科醫(yī)學(xué)，2010，13：852-854.

24 Do minici M，Le Blanc K，M ueller I，et al.Minimal criteria for defining m ultipotent mesenchy mal stro mal cells.T he International Society for CellularT herapy position statement.Cytotherapy，2006，8：315-317.

25 Yagi H，Parekkadan B，Suganu ma K，et al.Long-term superior performance of a stem cell/hepatocyte device for the treatment of acute liver failure.Tissue Eng Part A，2009，15：3377-3388.

26 Cho K A，Ju S Y，Cho SJ，et al.M esenchy mal stem cells showed the highest potential for the regeneration of injured liver tissue co m pared with other subpopulations of the bone marrow.Cell Biol Int，2009，33：772-777.

27 Milwid J M，Ichim ura T，Li M，et al.Secreted factors fro m bone marrow stro mal cells upregulate IL-10 and reverse acute kidney injury.Stem Cells Int，2012，2012：392050.

28 Chen Y，Xiang L X，Shao JZ，et al.Recruitment of endogenous bone marrow mesenchy mal stem cells towards injured liver.J Cell M ol M ed，2010，14：1494-1508.

29 Pietrosi G，Vizzini GB，Gruttadauria S，et al.Cl inical appl ications of hepatocyte transplantation. W orld J Gastroenterol，2009，15：2074-2077.

30 Peng L，Xie D Y，Lin B L，et al.A utologous bone m arro w mesenchy mal stem cell transplantation in liver failure patients caused by hepatitis B：short-term and long-term outco mes. H epatology，2011，54：820-828.

31 Dianat N，Steichen C，Vallier L，et al.H u man pluripotent stem cells for m odelling hu man liver diseases and cell therapy.Curr Gene T her，2013，13：120-132.

32 V osough M，O midinia E，K adivar M，et al.G eneration of functional hepatocyte-like cells fro m hu man pluripotent stem cells in a scalable suspension culture.Stem Cells Dev，2013，22：2693-2705.

33 M ohamadnejad M，Al imoghaddam K，Bagheri M，et al.Randomized placebo-controlled trial of mesenchy mal stem celltransplantation in deco m pensated cirrhosis.Liver Int，2013，33：1490-1496.

34 Golse N，Bucur P O，A da m R，et al.New paradig ms in posthepatecto m y liver failure.J Gastrointestinal Surg，2013，17：593-605.

35 M aiwal R，Kumar A，Sarin SK.Liver regeneration during acuteonchronic liver failure using growth factors：vivo indulgence of bone mar row？Gastroenterology，2013，145：901-904.

36 陳麗敏，唐曉鵬.臍血干細(xì)胞分化為肝細(xì)胞的試驗(yàn)與臨床.實(shí)用肝臟病雜志，2005，8：187-189.

37 陳海鷗，胡小宣，劉洪娟，等.臍血干細(xì)胞移植治療肝硬化的療效觀察.肝臟，2010，15：81-83.

38 Takahashi K，Ya manaka S.Induction of pluripotent stem cells fro m m ouse em bryonic and adult fibroblast cultures by defined factors.Cell，2006，126：663-676.

39 Takahashi K，Tanabe K，Ohnuki M，et al.Induction of pluripotent stem cells fro m adult hu man fibroblasts by defined factors.Cell，2007，131：861-872.

40 Robinton D A，Daley G Q.T he pro mise ofinduced pluripotent stem cells in research and therapy.Nature，2012，481：295-305.

41 Sullivan GJ，H ay D C，Park IH，et al.Generation of functional hu man hepatic endoderm fro m hu man induced pluripotent stem cells.H epatology，2010，51：329-335.

42 Elkhafif N，El Baz H，H a m ma m O，et al.C D133（+）hu man u m bilical cord blood stem cells enhance angiogenesis in experimental chronic hepatic fibrosis.A P M IS，2011，119：66-75.

2014-12-02）

（本文編輯：魏清）

國家“十二五”重大專項(xiàng)（2012Z X10002004-005）；全軍醫(yī)學(xué)科技青年培育項(xiàng)目（13 Q N P192）

100853 北京，解放軍醫(yī)學(xué)院（吳貽琛、辛紹杰）；解放軍第三○二醫(yī)院肝硬化診療中心（吳貽琛）；解放軍第三○二醫(yī)院肝衰竭診療與研究中心（萬志紅、辛紹杰）

辛紹杰，E mail：xinshaojie302@163.co m