臨床組織病理診斷技術進展評述

袁錦玉，盧碧燕

（東莞衛(wèi)生學校，廣東 東莞 523018）

臨床組織病理診斷技術進展評述

袁錦玉，盧碧燕

（東莞衛(wèi)生學校，廣東 東莞 523018）

病理技術；組織化學；組織芯片

臨床病理學屬于診斷學，組織病理技術已從制作常規(guī)的石蠟切片及染色發(fā)展到綜合運用免疫組化技術、分子生物技術、激光掃描共聚焦顯微鏡技術以及芯片技術等現(xiàn)代方法的階段，極大地提高了病理診斷的效率，為更全面地了解疾病提供了有力依據(jù)。

1 常規(guī)組織病理技術和染色

16世紀出現(xiàn)了尸體解剖的記載，18世紀病理解剖學已成為一門獨立的學科。19世紀，德國病理學家魏爾嘯的《細胞病理學》專著出版，奠定了以人體細胞水平的病理變化作為診斷的理論基礎［1］。20世紀40年代希臘醫(yī)生發(fā)明了巴氏染色，使巴氏五級細胞學篩查在婦女防癌普查和婦科常規(guī)檢查中起到了重要作用，為當今盛行的細胞學宮頸癌篩查新技術TCT（液基薄層細胞學檢測技術）和TBS（診斷分類方法）奠定了基礎［2］。TCT是20世紀末細胞學最顯著的進步。

自從Guthrie首創(chuàng)針吸活檢病理，細胞穿刺就逐漸被臨床應用，如骨穿、胸腰椎穿刺、乳腺甲狀腺等皮下腫瘤的穿刺［3］，B超引導下的肝臟穿刺和腎臟穿刺，CT引導下的經(jīng)皮肺穿刺，都為臨床提供了常規(guī)、簡便、有效的服務。

2 電子顯微鏡技術

電子顯微鏡是根據(jù)電子光學的原理，使物體非常細微的結構能在極高的放大倍數(shù)下成像。20世紀50年代電子顯微鏡的出現(xiàn)，將病理引入了超微結構，在電子顯微鏡下，可觀察到艾滋病病毒，甚至DNA分子。目前主要應用在腎病病理診斷［4］和少數(shù)腫瘤的鑒別診斷中，20世紀70年代冷凍技術原理應用于病理，有了冰凍切片技術，這是一種用冰凍切片機將手術標本快速冷凍變硬利于制片的方法，在手術過程中可得到快速病理報告［5］。

3 酶組織化學技術、免疫組織化學技術和細胞化學技術

3.1 酶組織化學技術

酶是由生物體產(chǎn)生的一類具有催化活性的物質(zhì)，酶組織化學技術是利用酶可以催化某些反應的特性來檢測酶的活性，并對其進行定性和定量的研究，常用的方法有沉淀法、酶偶聯(lián)法和合成法等。徐永平等［6］應用乙酰膽堿酯酶組織化學技術觀察了28條不同胚齡的雞腦內(nèi)微血管，發(fā)現(xiàn)在孵化的第18天出現(xiàn)了含乙酰膽堿酯酶陽性反應物的微血管，提供了重要的形態(tài)學資料。

3.2 免疫組織化學技術和細胞化學技術

免疫組織化學技術是利用抗原與抗體的特異性結合反應來鑒定組織或細胞中特定化學物的一種組織化學方法，是研究和觀察細胞中某些結構和分子物質(zhì)及組織細胞間成分的主要手段。當20世紀80年代制備出多克隆、單克隆抗體，免疫組織化學方法——免疫病理被快速推廣應用，在整個病理學發(fā)展中是個突破，在臨床中很大程度上解決了腫瘤性質(zhì)和來源的問題，如對胃腫物LCA和CK類的檢測，可鑒別是胃癌還是胃淋巴瘤。CK7/CK20/Villin的聯(lián)合標記，有助于確定轉移癌的原發(fā)部位。腫瘤細胞的耐藥標記可判斷預后，如ER（雌激素受體）、PR（孕激素受體）的陽性表達是乳腺癌預后良好的指標，c-erbB-2的陽性表達是乳腺癌預后不良的指標。免疫病理的應用提高了病理診斷的準確性和實用性［7］，成為目前疑難腫瘤診斷中常規(guī)的檢查項目。而細胞化學技術可提高細胞學的診斷準確性，并在鑒定上皮性、間葉性或淋巴性腫瘤方面以及淋巴瘤亞型分類中發(fā)揮著重要作用。

4 原子力顯微鏡和激光掃描共聚焦顯微鏡技術

20世紀90年代，原子力顯微鏡（AFM）——掃描探針顯微鏡問世，生物醫(yī)學領域就將其積極應用于分子結構的觀察。AFM可直觀呈現(xiàn)出物質(zhì)的分子和原子結構，提供真正的三維表型圖［8］。其應用前景包括細胞計數(shù)，細胞直徑、平均高度、體積、表面積測定，單個細胞的形態(tài)和動態(tài)觀察以及細胞膜表面微觀結構的觀察等。目前AFM的應用研究還處于初步階段，而且其成像范圍太小、速度慢、受探頭的影響太大，尚未在醫(yī)院應用。

20世紀90年代推出的激光掃描共聚焦顯微鏡（CLSM）很快得到了推廣應用［9］，它相當于細胞的“CT機”，通過對活細胞和組織或細胞切片進行斷層掃描和圖像分析軟件的幫助，可獲得清晰的細胞形狀，染色體、細胞器和細胞膜系統(tǒng)的三維圖像。它相當于多種常用光學顯微鏡的有機組合，如倒置光學顯微鏡、紫外線顯微鏡、熒光顯微鏡等，因此稱為萬能顯微鏡。國內(nèi)有些大學實驗室和研究所已經(jīng)開始應用。

5 組織芯片技術

組織芯片技術［10］能將多個甚至幾千個不同來源的組織固定到同一載體上，形成組織微陣列，可以對多個標本進行同一指標的研究，提高了檢測樣本的工作效率，使病理技術走向簡易化、標準化、程序化。它是繼基因芯片、蛋白質(zhì)芯片之后的一種特殊的生物芯片，并與傳統(tǒng)的組織化學技術、免疫組織化學技術（IHC）、原位雜交技術（ISH）、熒光核酸原位雜交技術（FISH）及原位PCR技術等相結合，能在DNA、RNA和蛋白質(zhì)等不同分子水平上研究病理組織，將在臨床有更廣泛的應用前景。

隨著科學技術的發(fā)展，病理學科也引進了許多自動化裝置，如病理標本的自動脫水機、自動包埋機、自動切片機、自動染色機等，且隨著互聯(lián)網(wǎng)技術的發(fā)展，開展了遠程病理圖文會診，為臨床提供了更便捷、更可靠、更有效的診斷治療建議。

6 結語

綜上所述，在一個世紀里，我國病理診斷技術經(jīng)歷了第一階段肉眼水平、第二階段光學顯微鏡水平、第三階段電子顯微鏡水平、第四階段分子技術水平、第五階段基因水平。我國許多病理學家和專業(yè)人才為病理學的發(fā)展做出了巨大貢獻，推出了很多新的儀器和實驗方法，并應用于醫(yī)學及其他生物科學領域的實際工作中。20世紀初，世界著名的臨床學家和診斷學家William Osler對病理學在醫(yī)學中的地位做了重要評價：As is our pathology，so is our medicine（病理為醫(yī)之本）。這種評價也包含著臨床對病理的需求和期待，賦予了病理更高的使命和責任。

［1］紀小龍.從病理看臨床醫(yī)學的難度和挑戰(zhàn)［J］.實用醫(yī)院臨床雜志，2004（1）：21-22.

［2］趙晶，王志宇，商文清.宮頸癌放療后液基薄層細胞學檢測分析［J］.中華放射腫瘤學雜志，2007（1）：45-47.

［3］于澤平，祈正茂.乳腺腫塊細針穿刺抽吸細胞學檢查［J］.江蘇醫(yī)藥，1991（6）：306-307.

［4］王素霞，鄒萬忠.腎活檢標本包埋后免疫電鏡技術［J］.北京大學學報，2002（3）：306-308.

［5］王杰，楊春育.甲狀腺癌術中冰凍切片病理檢查可信性分析［J］.實用外科雜志，1989（4）：185-186.

［6］徐永平，范光麗.應用乙酰膽堿酯酶組織化學技術對雞胚腦內(nèi)微血管的觀察［J］.動物醫(yī)學進展，1998，19（3）：33.

［7］朱力，李寶珠.原發(fā)性宮頸腺癌的臨床病理及免疫組織化學分析［J］.中華病理學雜志，1999（4）：252-254.

［8］紀小龍，申明識，尹彤.原子力顯微鏡對人尿液的直接觀察［J］.中國體視學與圖像分析，2002（2）：101-102.

［9］沈注，陳凌，李承新.尋常型銀屑病的皮膚CT特征初探［J］.中國麻風皮膚病雜志，2008（4）：301-303.

［10］周小鴿，張勁松，張小平.組織芯片技術在檢測正常組織和腫瘤組織抗原表達中的應用［J］.中華病理學雜志，2002（2）：181-182.

G353.11

A

1671-1246（2015）14-0149-02

東莞市科研基金項目“病理檢驗技術職業(yè)教育評價指標體系的研究”（20141051500041）