DcR3 重組蛋白對(duì)糖尿病大鼠心肌組織凋亡相關(guān)分子的表達(dá)及細(xì)胞凋亡的作用

黃黎月 莊國(guó)洪 丘勁華 陳 福 陶惠然 (廈門(mén)醫(yī)學(xué)高等專(zhuān)科學(xué)校，廈門(mén) 361008)

糖尿病是心力衰竭發(fā)生的一個(gè)獨(dú)立危險(xiǎn)因素，目前關(guān)于糖尿病心肌病變過(guò)程中心肌細(xì)胞凋亡作用的研究報(bào)道較少。心肌細(xì)胞凋亡與DM 的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)［1，2］。Fas/FasL 信號(hào)系統(tǒng)是心肌細(xì)胞凋亡的重要信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)。誘騙受體3(Decoy receptor 3，DcR3)是腫瘤壞死因子受體(Tumor necrosis factor receptor，TNFR)超家族新成員，能競(jìng)爭(zhēng)性地與FsaL 及LIGHT 結(jié)合并抑制其介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡［3-5］，故提示DcR3 可能對(duì)DM 心肌細(xì)胞凋亡有保護(hù)作用。DcR3 mRNA 在正常大鼠和DM 大鼠心肌組織的表達(dá)如何?外源性DcR3 重組蛋白對(duì)DM 心肌細(xì)胞凋亡有無(wú)保護(hù)作用?對(duì)DM 大鼠心肌凋亡相關(guān)分子的表達(dá)有何影響?這些問(wèn)題目前尚未見(jiàn)相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo)，本文就此作初步探討。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 雄性Sprague-Dawiey(SD)大鼠60 只，體重(200±2)g，2 月齡，由上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限責(zé)任公司提供。自由飲食、水，適應(yīng)性飼養(yǎng)5 d 后開(kāi)始實(shí)驗(yàn)。

1.1.2 主要試劑 鏈脲佐菌素(Streptozotocin，STZ)Sigma 公司產(chǎn)品，大鼠腫瘤壞死因子-α(TNFα)、白細(xì)胞介素1β(IL-1β)和γ-干擾素(IFN-γ)的ELISA 檢測(cè)試劑盒均購(gòu)自武漢博士德生物工程有限公司，Trizol 試劑、AMV 一步法RT-PCR 試劑盒購(gòu)自上海生工公司。兔抗Caspase-8 mAb、Bcl-2mAb 和HRP 標(biāo)記的大鼠抗兔IgG 抗體購(gòu)自Sigma 公司。DcR3 蛋白由本實(shí)驗(yàn)室制備(純度≥99%)［6］。

1.2 方法

1.2.1 動(dòng)物分組及DM 模型的建立 將大鼠隨機(jī)分成6 組，每組10 只。A 組:Normal(正常對(duì)照組);B 組:Normal +DcR3［0.8 mg/(鼠·d)］;C 組:DM組;D 組:DcR3 重組蛋白低劑量［0.4 mg/(鼠·d)］治療組;E 組:DcR3 重組蛋白中劑量［0.8 mg/(鼠·d)］治療組;F 組:DcR3 重組蛋白高劑量［1.2 mg/(鼠·d)］治療組。大鼠禁食(約8 h)不禁水，C、D、E、F 組大鼠于左下腹腔內(nèi)一次性注射STZ(50 mg/kg)，A、B 組大鼠注射與STZ 同體積的磷酸鹽緩沖液。48 h 后用血糖儀檢測(cè)血糖，重復(fù)2 次以非空腹血糖超過(guò)16.7 mmol/L 的大鼠為制模成功，本實(shí)驗(yàn)的制模成功率為100%，實(shí)驗(yàn)過(guò)程中有6 只大鼠死亡被剔除。

B、D、E、F 組大鼠每天一次尾靜脈注射相應(yīng)劑量的DcR3，A、C 組大鼠注射同體積的生理鹽水，連續(xù)用藥40 d，測(cè)大鼠血糖、尿糖、體重及尿量。40 d后處死大鼠，進(jìn)行各項(xiàng)指標(biāo)檢測(cè)。

1.2.2 血清TNF-α、IL-1β、IFN-γ 含量的檢測(cè) 摘除大鼠眼球取血，分離血清，-20℃凍存?zhèn)溆谩２捎秒p抗夾心ELISA 檢測(cè)大鼠血清TNF-α、IL-1β、IFN-γ的含量。

1.2.3 RT-PCR 分析心、肝、脾、肺、腎、胰腺和睪丸組織中Fas、FasL 和DcR3 mRNA 的表達(dá) 用TRIzol試劑提取各組織器官中的總RNA，進(jìn)行RT-PCR。以2～4 μl 逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物為模板，分別以擴(kuò)增DcR3、Fas、FasL 基因的引物，以β-actin 基因?yàn)閮?nèi)參照，進(jìn)行PCR。DcR3 基因mRNA 序列:上游引物:5'-TAG GCC ATG GAT GTG GCA G-3'，下游引物:5'-CAA GAT GCA TGC TCC AAG-3'，序列長(zhǎng)度為320 bp。Fas 上游引物:5-'CAT GAC AAT CCA GGA AGC-3'，下游引物:5'-CCA AGG TCC TTC TGG ACC-3'，序列長(zhǎng)度為220 bp 。FasL 上游引物:5'-GTA CCA TGG CGA TGC AGC AGC-3'，下游引物:5'-ATA CAA AGT ACA GCC CAG-3'，序列長(zhǎng)度為580 bp。β-actin 上游引物:5'-TCT TCC AGC CCT CCT TCC TG-3'，下游引物:5'-CGT TTC TGC GCC GTT AGG T-3'，序列長(zhǎng)度為409 bp。反應(yīng)條件為:95℃變性4 min，95℃變性45 s，55℃退火45 s，72℃延伸1 min，循環(huán)數(shù)30，72 ℃10 min。PCR 產(chǎn)物進(jìn)行1% 瓊脂糖凝膠電泳鑒定。Bio-Rad 凝膠成像系統(tǒng)(Quantity One-4.6)灰度分析各基因的相對(duì)表達(dá)量。

1.2.4 Western blot 檢測(cè)上述組織Caspase-8、Bcl-2的蛋白表達(dá) ①SDS-PAGE:將組織研磨后，加細(xì)胞裂解液提取蛋白，然后進(jìn)行SDS-PAGE 分離蛋白質(zhì)。②轉(zhuǎn)膜:把分離的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素膜。③Ag-Ab 反應(yīng):加入一抗，反應(yīng)1 h，洗滌液洗滌3 次;加入HRP 標(biāo)記的二抗，反應(yīng)1 h，洗滌。④顯色:DAB 顯色。結(jié)果判斷和數(shù)據(jù)處理:膠片或考馬斯蘭干膠后采用Gel-doc 200 掃描，用Quantity one 軟件進(jìn)行條帶分析。

1.2.5 心肌細(xì)胞凋亡的觀察 取各組大鼠左心室前壁組織，行常規(guī)脫水、包埋及組織切片，做HE 染色。光鏡下觀察并做半定量分析:隨機(jī)抽取C 組和E 組各10 張切片，400 倍高倍視野下，用標(biāo)準(zhǔn)的10×10 目鏡方格測(cè)試系統(tǒng)計(jì)數(shù)10 個(gè)視野凋亡細(xì)胞數(shù)目，取其均值。

2 結(jié)果

2.1 DcR3 對(duì)大鼠血糖、尿糖、體重及尿量的影響 DcR3 對(duì)正常大鼠血糖、尿糖、體重及尿量無(wú)明顯影響。A 組(Normal)大鼠血糖(6.9±0.12)mmol/L，尿糖(-)，體重(338.6±23.18)g，24 h 尿量(12.75±4.11)ml。B 組(Normal+DcR3)血糖(7.1±0.24)mmol/L，尿糖(-)，體重(353.6±28.31)g，24 h 尿量(13.23±5.17)ml，A 組與B 組間各項(xiàng)指標(biāo)無(wú)顯著性差異。C 組的大鼠血糖(22.6±3.77)mmol/L，尿糖(+++～++++)，體重(190.48±27.04)g，24 h 尿量(58.75±18.17)ml，各項(xiàng)指標(biāo)均顯著高于A 組(P ＜0.01)。不同劑量的DcR3 連續(xù)治療40 d 后結(jié)果發(fā)現(xiàn)，D、E、F 與C 組比較血糖呈下降趨勢(shì)，但無(wú)顯著性差異(P ＞0.05)。尿糖、體重及尿量差異無(wú)顯著性(P ＞0.05，數(shù)據(jù)略)。

2.2 大鼠血清TNF-α、IL-1β 和IFN-γ 水平的變化 B 組與A 組比較，血清中TNF-α、IL-1β 和IFN-γ水平無(wú)顯著性差異(P ＞0.05);造模后40 d，C 組的TNF-α、IL-1β 較A 組的TNF-α、IL-1β 明顯增加(P ＜0.05，P ＜0.01);D、E、F 組與C 組相比，血清的TNF-α、IL-1β 和IFN-γ 水平均有不同程度的降低(P ＜0.05，P ＜0.01，表1)。

2.3 各組織中Fas、FasL 和DcR3 mRNA 的表達(dá)

2.3.1 DcR3 mRNA 的表達(dá) 應(yīng)用RT-PCR 檢測(cè)A組、B 組、C 組、D 組、E 組及F 組大鼠各器官DcR3 mRNA 的表達(dá)。結(jié)果提示:A 組DcR3 mRNA 在心、脾、肺、腎中有明顯表達(dá)，睪丸組織中弱表達(dá)，其他組織中無(wú)表達(dá)。B 組DcR3 mRNA 在心、肺、腎、胰腺中有明顯表達(dá)，其他組織中無(wú)表達(dá)。C 組DcR3 mRNA 在肝、肺、腎中有明顯表達(dá)，其他組織中無(wú)表達(dá)。D 組DcR3 mRNA 在心、肝、肺、胰腺中有表達(dá)，其他組織中無(wú)表達(dá);E 組DcR3 mRNA 在心、肺、睪丸中有明顯表達(dá)，其他組織中無(wú)表達(dá);F 組DcR3 mRNA在心、肝、肺、腎中有明顯表達(dá)，其他組織中無(wú)表達(dá)(圖1)。DcR3 mRNA 的表達(dá)產(chǎn)物大小為320 bp，電泳結(jié)果與理論計(jì)算值相符。

2.3.2 Fas、FasL mRNA 的表達(dá) 應(yīng)用RT-PCR 檢測(cè)各組大鼠各器官中Fas mRNA 的表達(dá)。結(jié)果提示:Fas mRNA 在A 組大鼠心、肝、脾、肺、腎、胰腺、睪丸中均有表達(dá);B 組Fas mRNA 在心、肝、肺、腎、胰腺中均有表達(dá)，其他組織中無(wú)表達(dá);C 組Fas mRNA 在心、肝、脾、肺中有明顯表達(dá)，其他組織中無(wú)表達(dá);D 組Fas mRNA 在心、腎、胰腺中有表達(dá)，其他組織中無(wú)表達(dá)，E 組Fas mRNA 在心肌組織無(wú)表達(dá)，只在脾、睪丸組織中有表達(dá);F 組在心肌組織無(wú)表達(dá)，在脾、肺、腎中明顯表達(dá)(圖2)。Fas mRNA、FasL mRNA 的表達(dá)產(chǎn)物大小為220 bp 和585 bp，電泳結(jié)果與理論計(jì)算值相符。

FasL mRNA 在A 組大鼠心及脾、肺、腎、睪丸中有表達(dá)，其他組織中未見(jiàn)表達(dá);B 組FasL mRNA 在心及脾、肺、胰腺中有明顯表達(dá)，其他組織中無(wú)表達(dá);C 組FasL mRNA 在所有組織中均有表達(dá);D 組FasL mRNA 在心及脾、肺、腎、胰腺中有表達(dá)，其他組織無(wú)表達(dá);E 組FasL mRNA 在心、腎組織中無(wú)表達(dá)，其他組織中有明顯表達(dá);F 組FasL mRNA 在心及肝、肺、脾、胰腺中無(wú)表達(dá)，在腎、睪丸組織中有表達(dá)。

表1 DcR3 對(duì)大鼠血清TNF-α、IL-1β 和IFN-γ 水平的影響(±s，n=6)Tab.1 Effects of DcR3 on TNF-α，IL-1β and IFN-γ in DM rats serum(±s，n=6)

表1 DcR3 對(duì)大鼠血清TNF-α、IL-1β 和IFN-γ 水平的影響(±s，n=6)Tab.1 Effects of DcR3 on TNF-α，IL-1β and IFN-γ in DM rats serum(±s，n=6)

Note:1)P ＜0.05，2)P ＜0.01 vs normal;3)P ＜0.05，4)P ＜0.01 vs DM.

圖1 RT-PCR 檢測(cè)各組織中DcR3 mRNA 的表達(dá)Fig.1 mRNA expression of DcR3 was measured by RTPCR DcR3

圖2 RT-PCR 檢測(cè)各組織中Fas、FasL mRNA 的表達(dá)Fig.2 mRNA expression of Fas and FasL was measured by RT-PCR

2.4 Caspase-8、Bcl-2 蛋白的表達(dá) 應(yīng)用Western blot 檢測(cè)各組大鼠各器官中Caspase-8、Bcl-2 蛋白的表達(dá)。結(jié)果提示:Caspase-8 蛋白在A 組大鼠心及肝、腎中有表達(dá)，在其他組織中未見(jiàn)表達(dá);B 組Caspase-8 蛋白在心、脾、胰腺中有明顯表達(dá)，其他組織中無(wú)表達(dá);C 組Caspase-8 蛋白在心及肝、肺、腎、睪丸中有表達(dá)，而在脾、胰腺中無(wú)表達(dá);D 組Caspase-8 蛋白在心和睪丸中有表達(dá)，其他組織中無(wú)表達(dá);E 組Caspase-8 蛋白在肝、肺、睪丸中有表達(dá)，在心肌組織中無(wú)表達(dá);F 組Caspase-8 蛋白在肝、肺、胰腺、睪丸中有明顯表達(dá)，心及脾、腎中無(wú)表達(dá)。(圖3)。Caspase-8、Bcl-2 蛋白的表達(dá)產(chǎn)物分別為55 kD 和26 kD，電泳結(jié)果與理論計(jì)算值相符。

Bcl-2 蛋白在A 組大鼠心及脾、肺中有表達(dá)，在其他組織中未見(jiàn)表達(dá);B 組Bcl-2 蛋白在心、肝、肺、腎中有明顯表達(dá)，胰腺、脾及睪丸中無(wú)表達(dá);C 組Bcl-2 蛋白在肝、腎、睪丸中有弱表達(dá)，在心、脾、肺、胰腺組織中無(wú)表達(dá);D 組Bcl-2 蛋白在心、脾中有表達(dá)，而在其他組織中無(wú)表達(dá);E 組Bcl-2 蛋白在心、脾和肺中有表達(dá)，在肝、腎、胰腺和睪丸中均無(wú)表達(dá);F組Bcl-2 蛋白在心、脾、胰腺和睪丸中有明顯表達(dá)，其他組織中無(wú)表達(dá)。

2.5 心肌細(xì)胞凋亡的計(jì)算 與正常組相比DM 組心肌細(xì)胞凋亡數(shù)量增加明顯，差異顯著(P ＜0.01)，見(jiàn)圖4;而DM+DcR3(0.8)組，心肌細(xì)胞凋亡數(shù)量明顯減少，與DM 組相比差異顯著(P ＜0.05)，見(jiàn)表2。

圖3 Western blot 檢測(cè)各組織中Caspase-8、Bcl-2 蛋白的表達(dá)Fig.3 Protein expression of Caspase-8 was measured by Western blot

圖4 心肌細(xì)胞的凋亡(HE，10 ×40)Fig.4 Apoptosis of myocardial cells(HE，10 ×40)

表2 重組蛋白DcR3 對(duì)大鼠心肌細(xì)胞凋亡的影響(±s，n=6，apoptosis cells/mm2)Tab.2 Effects of DcR3 on myocardium apoptosis in rats(±s，n=6，apoptosis cells/mm2)

表2 重組蛋白DcR3 對(duì)大鼠心肌細(xì)胞凋亡的影響(±s，n=6，apoptosis cells/mm2)Tab.2 Effects of DcR3 on myocardium apoptosis in rats(±s，n=6，apoptosis cells/mm2)

Note:1)P ＜0.05，2)P ＜0.01 vs normal;3)P ＜0.05，4)P ＜0.01 vs DM.

3 討論

誘騙受體3(Decoy receptor 3，DcR3)是1998 年P(guān)itti 等［7］發(fā)現(xiàn)的一組腫瘤壞死因子受體(Tumor necrosis factor receptor，TNFR)超家族成員，它能競(jìng)爭(zhēng)性地與LIGHT 和FasL 結(jié)合并抑制其介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡。對(duì)腫瘤細(xì)胞HT29 的生存能力分析表明，F(xiàn)asL 誘導(dǎo)HT29 細(xì)胞的凋亡具有劑量依賴(lài)性，最大效應(yīng)濃度為1～10 ng/ml，而在DcR3.Fc 存在的情況下，即使FasL 的濃度達(dá)到100 ng/ml，F(xiàn)asL 也不能誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。胰島移植的研究發(fā)現(xiàn)，DcR3 可抑制FasL、IFN-γ 誘導(dǎo)的胰島細(xì)胞凋亡，從而預(yù)防胰島移植后胰島原發(fā)性無(wú)功能的發(fā)生。給嚴(yán)重的非肥胖糖尿病且免疫缺陷大鼠用DcR3.Fc 培養(yǎng)的樹(shù)狀突細(xì)胞治療后，能延緩糖尿病的發(fā)病進(jìn)程和嚴(yán)重程度，提示DcR3 與DM 的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。

細(xì)胞凋亡是由體內(nèi)外因素觸發(fā)細(xì)胞內(nèi)預(yù)存的死亡程序而導(dǎo)致的細(xì)胞死亡過(guò)程。研究表明心肌細(xì)胞凋亡參與缺血性心臟病、缺血再灌注損傷、心力衰竭、病毒性心肌炎等病理過(guò)程，并在其中發(fā)揮著重要作用。Fiordaiso 等［8］用STZ 誘導(dǎo)大鼠DM 3 d 后心肌細(xì)胞凋亡明顯增加，在4 周時(shí)心肌細(xì)胞30%呈散在點(diǎn)狀凋亡，存活的心肌細(xì)胞體積增大。Backlund等［9］研究發(fā)現(xiàn)隨著DM 心功能障礙的加重，心肌細(xì)胞凋亡數(shù)量增加。已有研究證實(shí)在心肌細(xì)胞凋亡的同時(shí)促凋亡相關(guān)分子Fas、FasL 和Bax 的表達(dá)明顯上調(diào)，凋亡抑制分子Bcl-2 隨著細(xì)胞凋亡的增加表達(dá)明顯減弱，而且Fas 表達(dá)水平與DM 的病程進(jìn)展相一致［10］。本研究發(fā)現(xiàn)在STZ 誘導(dǎo)大鼠DM 40 d時(shí)，心肌細(xì)胞的胞漿濃染、細(xì)胞核固縮、細(xì)胞凋亡明顯增加，存活的心肌細(xì)胞肥大。心肌組織中Fas 和FasL 的表達(dá)明顯上調(diào)，Bcl-2 的表達(dá)下調(diào)，這些實(shí)驗(yàn)結(jié)果與上述文獻(xiàn)報(bào)道基本一致。

近年的研究發(fā)現(xiàn)，DM 大鼠心肌細(xì)胞凋亡時(shí)心肌組織中腫瘤壞死因子-α(TNF-α)和腫瘤壞死因子-α 轉(zhuǎn)化酶(TACE)高表達(dá)［11］。TNF-α 刺激白介素1(IL-1)等細(xì)胞因子的生成并參與心肌病理變化過(guò)程。本研究各實(shí)驗(yàn)組大鼠連續(xù)用DcR3 重組蛋白40 d 后，空白對(duì)照組大鼠血清中IL-1β、TNF-α 和IFN-γ 水平與正常對(duì)照組比較無(wú)顯著性差異;損傷組的TNF-α、IL-1β 和IFN-γ 水平較正常對(duì)照明顯升高;三個(gè)劑量的DcR3 治療組均可使DM 大鼠血清的IL-1β、TNF-α 和IFN-γ 水平有不同程度的顯著性降低，且TNF-α 和IFN-γ 水平的降低呈明顯的劑量依賴(lài)性。

通過(guò)RT-PCR 檢測(cè)各組大鼠心肌組織中DcR3 mRNA 的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)外源性DcR3 重組蛋白對(duì)DM 大鼠心肌細(xì)胞凋亡的作用可能與細(xì)胞表面DcR3(內(nèi)源性)的表達(dá)差異有相關(guān)性，中劑量和高劑量的DcR3 作用于DM 大鼠后，增加了心肌組織中DcR3 mRNA 的表達(dá)。降低了心肌組織Fas mRNA 和FasL mRNA 的表達(dá)，使FasL 與心肌組織中的效應(yīng)細(xì)胞表面Fas 的結(jié)合減少，降低了效應(yīng)細(xì)胞的活化，從而減少了相關(guān)細(xì)胞因子的分泌;高表達(dá)的DcR3 能競(jìng)爭(zhēng)性地與FsaL 結(jié)合，抑制其介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡，我們推測(cè)DcR3 的差異性表達(dá)可能是選擇性抑制心肌細(xì)胞凋亡的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。

本文應(yīng)用Western blot 檢測(cè)各組大鼠各器官中Bcl-2、Caspase-8 蛋白的表達(dá)時(shí)發(fā)現(xiàn)，Bcl-2 僅在DM組大鼠肝、腎和睪丸組織中有表達(dá)，心肌組織中均未見(jiàn)表達(dá);Caspase-8 在DM 組大鼠除脾和胰腺之外，心肌和其他各組織均有明顯表達(dá)，提示Bcl-2、Caspase-8 與DM 心肌細(xì)胞凋亡的發(fā)生相關(guān)。給予外源性DcR3 重組作用于DM 大鼠后，心肌組織中Bcl-2 的表達(dá)上調(diào)，Caspase-8 蛋白的表達(dá)下調(diào)。Bcl-2 促進(jìn)細(xì)胞生存，延長(zhǎng)細(xì)胞壽命，抑制細(xì)胞凋亡的作用是增高線(xiàn)粒體的跨膜電位和阻止線(xiàn)粒體膜通透性的改變，使Bcl-2 的表達(dá)上調(diào)，阻止凋亡啟動(dòng)因子如細(xì)胞色素C 等的釋放，切斷細(xì)胞凋亡級(jí)聯(lián)反應(yīng)。Caspase-8 是細(xì)胞凋亡過(guò)程中介導(dǎo)死亡受體途徑的啟動(dòng)酶，中劑量和高劑量的DcR3 使DM 大鼠心肌Caspase-8 蛋白表達(dá)下調(diào)，提示可能通過(guò)抑制死亡受體介導(dǎo)的凋亡途徑，抑制了心肌細(xì)胞凋亡的發(fā)生。

綜上所述，本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)外源性DcR3 可使DM 大鼠心肌組織中DcR3 mRNA 的表達(dá)增加，F(xiàn)as mRNA和FasL mRNA 的表達(dá)下調(diào)，Bcl-2 的表達(dá)上調(diào)，Caspase-8 蛋白的表達(dá)下調(diào)，細(xì)胞因子水平降低，使DM 大鼠心肌細(xì)胞凋亡的百分率下降。這對(duì)認(rèn)識(shí)DcR3 抑制DM 大鼠心肌細(xì)胞凋亡的作用，以及深入研究糖尿病心肌細(xì)胞凋亡的分子機(jī)制提供新的啟示。

［1］Cao L，Wang Y，Zhou G，et al.Attenuation by metallothionein of early cardiac cell death via suppression of mitochondrial oxidative stress results in a prevention of diabetic cardiomyopathy［J］.J Am Coll Cardiol，2006，48(8):1688-1697.

［2］Sajjad A，Novoyatleva T，Vergarajauregui S，et al.Lysine methyltransferase Smyd2 suppresses p53-dependent cardiomyocyte apoptosis［J］.Biochim Biophys Acta，2014，8:2556-2562.

［3］Wortinger MA，F(xiàn)oley JW，Larocque P，et al.Fas ligand-induced murinepulmonary inflammation is reduced by a stable decoy receptor 3 analogue［J］.Immunology，2003，110:225-233.

［4］Wang W，Zhang M，Sun W，et al.Reduction of decoy receptor 3 enhances TRAIL-mediated apoptosis in pancreatic cancer［J］.PLoS One，2013，8(10):e74272.

［5］Shen E，Li Y，Li Y，et al.Rac1 is required for cardiomyocyte apoptosis during hyperglycemia［J］.Diabetes，2009，58 (10):2386-2395.

［6］李文珠，陶惠然，顏江華，等.DcR3 的構(gòu)建、表達(dá)純化及特異性鑒定［J］.細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志，2006，22(2):151-153.

［7］Pitti RM，Marsters SA，Lawrence DA，et al.Genomic of decoy receptor for Fas ligand in lung and colon cancer［J］.Nature，1998，369:699-703.

［8］Fiordaliso F，Li B，Latimi R，et al.Myocyte death in streptozotocininduced diabetes in rats in angiotensin dependent［J］.Lab Invest，2000，80(4):513.

［9］Backlund T，Palojoki E，Saraste A，et al.Sustained cardiomcyte apoptosis and left ventricular remodeling after myocardial infarction in experimental diabetes［J］.Daibetologia，2004，47(2)325-330.

［10］Ho FM，Liu SH，Liu CS，et al.High Glucose induced apoptosis in human endothelial cells is mediated by sequential activation of CjunNH(2)-teminalkinase and caspase-3［J］.Circulation，2000，101(22):2618-2624.

［11］鐘文亮，莊維特，陳 剛，等.腫瘤壞死因子-α 和腫瘤壞死因子-α 轉(zhuǎn)化酶在糖尿病心肌病變大鼠心肌中的表達(dá)［J］.中華糖尿病雜志，2005，13(4):306-308.