基地重點(diǎn)病種多囊卵巢綜合征患者血標(biāo)本的質(zhì)量可控性※

黃 晶 李 威 廖立艷 吳效科

（黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第一醫(yī)院婦科實(shí)驗(yàn)室，哈爾濱 1 5 0 0 4 0）

臨床樣本資源的搜集是開展科學(xué)研究的基礎(chǔ)，利用樣本資源開展研究，闡釋疾病的病因，旨在為疾病的臨床診斷和治療提供理論基礎(chǔ)[1]，為基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)和臨床轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)研究奠定生物數(shù)據(jù)基礎(chǔ)[2]。如何保存和提供高質(zhì)量的生物樣本資源和數(shù)據(jù)以用于科學(xué)研究是應(yīng)該重視的問題[3]。

多囊卵巢綜合征是一種多起因、臨床表現(xiàn)多樣性的女性生殖內(nèi)分泌系統(tǒng)疾病，以雄激素過多和持續(xù)無排卵為臨床主要特征，表現(xiàn)為月經(jīng)稀發(fā)、閉經(jīng)、不孕、多毛、肥胖、痤瘡、卵巢多囊性改變等。隨著中西醫(yī)研究的深入，多囊卵巢綜合征日益顯示出其復(fù)雜性和重要性，本病已成為婦科生殖內(nèi)分泌研究的熱點(diǎn)和難點(diǎn)[4-5]。我院婦科國家臨床研究基地的建立，為多囊卵巢綜合征疑難疾病的防控和治療提供了中醫(yī)藥研究領(lǐng)域的領(lǐng)先平臺，給多囊卵巢綜合征患者帶來了福音。為了確定多囊卵巢綜合征療效的靶點(diǎn)[6]，提高排卵率、著床率、妊娠率、活產(chǎn)率[7]，為中醫(yī)藥的臨床治療研究提供可靠的檢測數(shù)據(jù)依據(jù)，對多囊卵巢綜合征患者進(jìn)行血標(biāo)本的質(zhì)控[8]尤為重要。

多囊卵巢綜合征血標(biāo)本質(zhì)控流程見圖1：

圖1多囊卵巢綜合征血標(biāo)本質(zhì)控流程

多囊卵巢綜合征血標(biāo)本采集運(yùn)輸流程、檢測指標(biāo)的確定、血標(biāo)本的保存及送檢、存檔意義報(bào)告如下：

1 多囊卵巢綜合征血標(biāo)本采集運(yùn)輸流程

1.1采血時間 按照納入標(biāo)準(zhǔn)的時間進(jìn)行采血，訪問類型（0個月/3個月/6個月）。

1.2采血前的準(zhǔn)備 受試者需空腹8~12小時，再進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室檢查。

1.3采血的操作要求

1.3.1 收集血清樣本 ①各分中心采用的靜脈采血方式。②裝滿兩個5毫升的黃管。③上下輕搖管子5次（避免溶血），室溫下靜置15分鐘后離心，不得超過30分鐘。不要在4℃冰箱貯存后再離心。④靜置15分鐘后，室溫下離心20分鐘，3000轉(zhuǎn)/分鐘。然后將血清轉(zhuǎn)移至EP管中，每個EP管內(nèi)的最大容量不要超過1.3ml，并且需要用黑色標(biāo)記筆在EP管上標(biāo)記出分中心名稱代號、受試者藥物編號和姓名縮寫、采血日期、訪問類型等詳細(xì)情況。最后定期（3個月）運(yùn)往中心實(shí)驗(yàn)室檢測。⑤標(biāo)本量要適中。如果標(biāo)本量過少，將無法檢測。如果標(biāo)本過滿，凍存后膨脹導(dǎo)致標(biāo)本溢出。每一訪問類型的總血清量不要少于3ml的血清放入管內(nèi)，送往中心實(shí)驗(yàn)室（每個EP管中血清體積約1-1.3ml，如有少量剩余也要單獨(dú)裝在EP管中標(biāo)記清楚）。

1.3.2 全血D N A①采集每個受試者的血液，將全血裝在2個5ml的紫色抗凝管中（包含EDTA），上下輕搖管子8次后，靜置于試管架上室溫放置10分鐘，然后將全血轉(zhuǎn)移至黃色的全血凍存管中。②在凍存管外用黑色的標(biāo)記筆進(jìn)行標(biāo)記，標(biāo)記內(nèi)容包括：分中心名稱代號、受試者藥物編號和姓名縮寫、采血日期、訪問類型等詳細(xì)情況，先由分中心保存在-20℃或-70℃的冰箱/冰柜中直到裝運(yùn)。

1.4采血注意事項(xiàng)

1.4.1 醫(yī)生及患者準(zhǔn)備 醫(yī)生向患者告知檢驗(yàn)?zāi)康?、樣品采集時的注意事項(xiàng)及要點(diǎn)和采集時間。

1.4.2 血液樣品采集前患者的準(zhǔn)備 ①由醫(yī)護(hù)人員告知患者需要靜脈采血及采血時間。②在采血的前一天晚上不應(yīng)有劇烈的運(yùn)動，采血當(dāng)日早晨應(yīng)避免劇烈運(yùn)動和勞動，采血前應(yīng)有10分鐘的休息。采血時，患者要保持相對安靜和情緒穩(wěn)定。冬季采血時應(yīng)要求患者暖和后保持血液循環(huán)通暢并休息10分鐘后采血，以保證檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。③一般采血前24小時要素食。避免食用或少食用高脂類食物及水果，同時停止飲用咖啡/咖啡類飲料、濃茶類飲料及酒類。空腹時間不宜過長，最好是空腹8～12小時采血，尤其是早晨空腹采血。④一般采血前要避免吸煙或飲酒。⑤某些用藥患者根據(jù)具體情況，盡量避免藥物干擾。一般要求病人停用藥物2天后采血。⑥體位影響血液循環(huán)，因此采血病人的體位應(yīng)相對固定，一般采用坐位采血，采血前應(yīng)讓病人有10分鐘的時間穩(wěn)定自己的體位。⑦采血前應(yīng)向患者做適當(dāng)?shù)慕忉?，以消除患者的疑惑及恐慌。⑧血脂：血脂采血?天禁止食用高脂肪食物，應(yīng)在禁食12小時后采血檢測，采血前不要過量飲水?；颊咦詈糜诓裳?周不要改變飲食習(xí)慣，采集樣品前4周，體重應(yīng)處于穩(wěn)定狀態(tài)。并于前3天至采血前禁飲咖啡或酒?；颊呷舴媒笛愃帲柙跈z查前24小時內(nèi)停止服用，以保證結(jié)果的準(zhǔn)確性。

1.5血標(biāo)本的標(biāo)記 制作實(shí)驗(yàn)室標(biāo)本記錄，內(nèi)容包括：分中心名稱代號、受試者藥物編號和姓名、采血日期、訪問類型、管的數(shù)量。

1.6血標(biāo)本的登記管理 ①將標(biāo)本放入-70℃冰箱內(nèi)儲藏，可永久貯存?；蚍湃?20℃冰箱中，非無霜冰箱，貯存時間不得超過3個月，3個月后需轉(zhuǎn)移至-70℃冰箱。同時更新補(bǔ)充完善血標(biāo)本登記EXEL表格。②每個人的標(biāo)本需要裝在一個獨(dú)立的四封袋里，四封袋里要裝有血清和血樣貯存登記卡。每次將標(biāo)本放入貯存的盒中都應(yīng)將信息添加至血樣收集登記表匯總表中。信息包括序號、受試者藥物編號、訪問類型、凍存管的數(shù)量、EP管的數(shù)量。

1.7血標(biāo)本的運(yùn)輸 每次裝運(yùn)前形成一個新的電子版血樣收集登記表（此次運(yùn)輸?shù)难獦邮占怯浨闆r電子版）。此外，還需在原有的word版血樣收集登記匯總表上進(jìn)行添加更新，以保證采血匯總記錄的全面性。①血樣收集后，定期由專門的冷鏈運(yùn)輸公司負(fù)責(zé)將標(biāo)本運(yùn)往中心實(shí)驗(yàn)室，具體運(yùn)輸頻率由中心實(shí)驗(yàn)室統(tǒng)一確定。如分中心標(biāo)本已經(jīng)存滿需要轉(zhuǎn)運(yùn)的，請及時通知中心實(shí)驗(yàn)室以便確定運(yùn)輸事宜。②冷鏈公司由中心實(shí)驗(yàn)室指定并與之簽訂運(yùn)輸合同，每次運(yùn)輸前由中心實(shí)驗(yàn)室通知分中心研究助手，運(yùn)輸公司將直接與研究助手聯(lián)系確定具體的運(yùn)輸時間。③每次運(yùn)輸前研究助手須填寫運(yùn)輸標(biāo)本信息登記表，登記內(nèi)容包括：當(dāng)次運(yùn)輸標(biāo)本的總數(shù)量、每份標(biāo)本的藥物編號及采血次序標(biāo)記（0個月/3個月/6個月），并將登記表格電子版發(fā)給項(xiàng)目辦。④標(biāo)本托運(yùn)當(dāng)日，研究助手與運(yùn)輸公司進(jìn)行交接時須填寫運(yùn)輸公司的運(yùn)輸表格，內(nèi)容包括托運(yùn)者的姓名、起運(yùn)的單位、所托運(yùn)標(biāo)本的總數(shù)目、收件地址為黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬一院婦科實(shí)驗(yàn)室。⑤之前填寫的標(biāo)本信息登記表紙質(zhì)版須與標(biāo)本一同運(yùn)輸回中心實(shí)驗(yàn)室。⑥標(biāo)本由冷鏈運(yùn)輸公司采用干冰包埋的方式進(jìn)行運(yùn)輸及保溫，要求研究助手在標(biāo)本裝箱過程中必須在場。保證標(biāo)本從冰箱中取出后盡快轉(zhuǎn)移至運(yùn)輸保溫箱中。⑦如出現(xiàn)運(yùn)輸標(biāo)本過多，冷鏈公司運(yùn)輸箱容量不足的情況時，可由研究助手酌情減少所運(yùn)輸標(biāo)本的數(shù)量，并將取出的標(biāo)本盡快放回存儲的冰箱中。

2 多囊卵巢綜合征血標(biāo)本檢測指標(biāo)的確定

根據(jù)多囊卵巢綜合征臨床癥狀，制定檢測指標(biāo)與檢測方案，確定檢測項(xiàng)目[9-11]。

2.1性激素相關(guān)指標(biāo) 促黃體生成素（LH）、促卵泡生成素（FSH）、泌乳素（PRL）、雌二醇（E2）、孕酮（P）、睪酮（T）、17羥基孕酮、雄烯二酮（A）、硫酸脫氫表雄酮（DHEAS）。

2.2炎性因子 C反應(yīng)蛋白。

2.3胰島素代謝相關(guān)指標(biāo) 胰島素、胰島素原、C肽。

2.4藥物安全性指標(biāo) 肝功：GPT、GOT、AKP；腎功：BUN、CRE、BMG。

2.5脂代謝相關(guān)指標(biāo) 血脂系列：TG、CHO、HDL、LDL、APOAL、APOB、TBA、ADA、脂蛋白 （a）。

2.6著床相關(guān)因子 胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白-1（IGFBP-1）、白血病抑制因子（LIF）、糖鏈接蛋白（Glycodelin）、抗苗勒氏管激素（AMH）。

3 中心實(shí)驗(yàn)室血標(biāo)本信息的錄入、血標(biāo)本保存、質(zhì)量的確認(rèn)及送檢

3.1采血與記錄 分別將全國25個分中心第一次采血（0個月）、第二次采血（3個月）、第三次采血（6個月）的血標(biāo)本數(shù)進(jìn)行橫向及縱向統(tǒng)計(jì)，橫向統(tǒng)計(jì)出每個分中心三次采血的血標(biāo)本數(shù)及縱向統(tǒng)計(jì)所有分中心分別三次采血的總標(biāo)本數(shù)，做成表格，分別用紙質(zhì)與電子版的形式記錄，并及時反饋給項(xiàng)目管理辦公室，作為監(jiān)管的數(shù)據(jù)依據(jù)。

3.2挑選與分裝 將分中心送來的血標(biāo)本進(jìn)行挑選、分裝，全血標(biāo)本裝在一起，血清標(biāo)本裝在一起，分別裝在全血及血清各81孔的盒子中，盒子外面分別標(biāo)上課題名稱、全血或血清、分中心名稱、盒子編號，用橡皮套套牢。在分裝的同時，將標(biāo)有藥物編號的全血或血清在81孔盒子中的準(zhǔn)確定位分別標(biāo)注在相應(yīng)的紙質(zhì)登記上，再將紙質(zhì)登記以電子版的形式輸入表格，做為以后備查。分裝好的全血和血清標(biāo)本盒放入-70℃的超低溫冰箱中儲存，并記好在冰箱中的定位。

3.3編碼標(biāo)注與送檢 檢測前，按照檢測方法及指標(biāo)類型重新分類（化學(xué)發(fā)光法、放免法、生化測定、酶免法），將分裝好的各分中心標(biāo)有藥物編號的血標(biāo)本進(jìn)行重編碼。表格橫向依次設(shè)計(jì)為：重編碼、藥物編號、患者姓名、所屬分中心；表格縱向按順序依次為：A11-A19、A21-A29……A91-A99(A為盒子編號，B盒依次類推：B11-B19、B21-B29……)。血清標(biāo)本送檢前需進(jìn)行性狀及體積的確認(rèn)及標(biāo)注。異常血標(biāo)本，如溶血、微溶、重溶血、渾濁等，要標(biāo)注準(zhǔn)確，記錄詳細(xì)。同時，送檢項(xiàng)目、送檢人、送檢時間、記錄時間，一并標(biāo)注在“送檢前標(biāo)本質(zhì)量登記”紙質(zhì)本（按重編碼的順序）上，由專人保管。送檢到檢測部門時及檢測后，都要與對方進(jìn)行血標(biāo)本數(shù)量的清點(diǎn)，檢測結(jié)果由檢測部門簽字蓋章。檢測項(xiàng)目、檢測人、檢測時間、記錄時間，一并標(biāo)注在“檢測結(jié)果”紙質(zhì)本上，由專人保管。檢測結(jié)果的電子版取回備查，并提交給項(xiàng)目管理辦公室一份，錄入網(wǎng)絡(luò)數(shù)據(jù)送檢后取回的血標(biāo)本，需進(jìn)行剩余體積的確認(rèn)及標(biāo)注，以備再次檢測時用。取檢項(xiàng)目、取檢人、取檢時間、記錄時間，一并標(biāo)注在“送檢后標(biāo)本質(zhì)量登記”紙質(zhì)本（按重編碼的順序）上，由專人保管。

3.4登記與存檔 按送樣批次及檢測項(xiàng)目進(jìn)行登記，設(shè)計(jì)出“十一五血標(biāo)本檢測目錄”，如表1，以便于對已檢測項(xiàng)目、取檢標(biāo)本數(shù)量及異常、缺失標(biāo)本有一個總的統(tǒng)計(jì)，其電子版反饋給項(xiàng)目管理辦公室存檔。

表1血標(biāo)本檢測目錄

4 存檔意義

檢測結(jié)果紙質(zhì)版保存在中心實(shí)驗(yàn)室，檢測結(jié)果電子版及血樣本檢測目錄電子版保存在項(xiàng)目管理辦公室，檢測結(jié)果電子版錄入網(wǎng)絡(luò)數(shù)據(jù)庫。原始檢測結(jié)果在檢測部門電子病歷系統(tǒng)中還留有備份。嚴(yán)格的管理、周密的流程、得當(dāng)?shù)谋４?，可確保多囊卵巢綜合征血標(biāo)本的高質(zhì)量，為多囊卵巢綜合征的中醫(yī)藥研究提供可靠的檢測數(shù)據(jù)支持。同時支持臨床研究結(jié)果的溯源、返查，為臨床研究充當(dāng)堅(jiān)實(shí)的后盾。

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