尿液對(duì)羥基苯丙氨酸檢測(cè)在惡性腫瘤早期預(yù)測(cè)中的應(yīng)用價(jià)值*

黃學(xué)梅，吳立翔，呂自蘭，李 影，郭變琴△(.重慶市腫瘤研究所檢驗(yàn)科 400030;.重慶醫(yī)科 大學(xué)第一附屬醫(yī)院臨床分子醫(yī)學(xué)檢測(cè)中心,重慶 40006)

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·論 著·

尿液對(duì)羥基苯丙氨酸檢測(cè)在惡性腫瘤早期預(yù)測(cè)中的應(yīng)用價(jià)值*

黃學(xué)梅1，吳立翔1，呂自蘭1，李 影2，郭變琴1△(1.重慶市腫瘤研究所檢驗(yàn)科 400030;2.重慶醫(yī)科 大學(xué)第一附屬醫(yī)院臨床分子醫(yī)學(xué)檢測(cè)中心,重慶 400016)

目的 探討尿液對(duì)羥基苯丙氨酸檢測(cè)在惡性腫瘤預(yù)測(cè)中的臨床應(yīng)用價(jià)值。方法 采用比色法對(duì)重慶市腫瘤研究所395例尿液樣本(其中90例健康者、92例良性腫瘤、213例病理確診的惡性腫瘤)對(duì)羥基苯丙氨酸進(jìn)行檢測(cè)分析。結(jié)果 健康對(duì)照組、良性腫瘤組、惡性腫瘤組的陽性檢出率分別為8.89%、14.13%、68.54%；與健康對(duì)照組比較，良性腫瘤組的陽性率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),惡性腫瘤組的陽性率明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；與良性腫瘤組比較，惡性腫瘤組的陽性率明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；惡性腫瘤組中的消化道惡性腫瘤、鼻咽癌、淋巴瘤、乳腺癌、婦科惡性腫瘤、肺癌及其他惡性腫瘤的陽性檢出率分別是78.82%、72.22%、71.42%、65.38%、62.50%、60.00%和 72.22%，不同病種間的陽性率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；尿液對(duì)羥基苯丙氨酸對(duì)惡性腫瘤的檢測(cè)靈敏度68.54%，特異性88.46%，準(zhǔn)確度77.72%，陽性預(yù)測(cè)值87.00%，陰性預(yù)測(cè)值71.00%。結(jié)論 尿液對(duì)羥基苯丙氨酸作為一種新的腫瘤標(biāo)志物，適用于惡性腫瘤的廣譜篩查；對(duì)良、惡性腫瘤的鑒別診斷具有重要的臨床意義。

尿液對(duì)羥基苯丙氨酸； 惡性腫瘤； 篩查

在世界范圍內(nèi)，惡性腫瘤已超過其他疾病成為人類的第一大死亡病因，且發(fā)病率呈上升趨勢(shì)，嚴(yán)重威脅人類健康。功能基因組學(xué)策略已被應(yīng)用于檢測(cè)腫瘤生物標(biāo)志物，包括基因表達(dá)和蛋白譜。近年來，越來越多的代謝組學(xué)研究表明，體液代謝產(chǎn)物同樣可能作為早期發(fā)現(xiàn)或監(jiān)測(cè)多種腫瘤進(jìn)程的標(biāo)志物，如乳腺癌、結(jié)腸癌、肝癌、胃癌、前列腺癌等[1-8]。多年來，對(duì)惡性腫瘤的早期發(fā)現(xiàn)與早期診斷已進(jìn)行了大量的研究，發(fā)現(xiàn)了多種血清腫瘤標(biāo)志物，并將其作為腫瘤診斷的重要手段之一，但血清腫瘤標(biāo)志物存在操作繁瑣、成本高、有創(chuàng)性、早期檢出率不理想等因素，不利于腫瘤的大規(guī)模篩查，因此，發(fā)現(xiàn)一種取材方便、操作易行、無創(chuàng)傷、且能用于早期廣譜篩查惡性腫瘤的檢測(cè)方法十分重要。尿液標(biāo)本易于收集且無創(chuàng)傷，患者依從性高，目前尿液對(duì)羥基苯丙氨酸在惡性腫瘤早期篩查中的研究少見。本研究將采用吉林生物研究院研制的對(duì)羥基苯丙氨酸尿液檢測(cè)試劑對(duì)395例尿液樣本進(jìn)行檢測(cè)分析，以探討其在惡性腫瘤早期篩查中的臨床應(yīng)用價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2014年3～8月于重慶市腫瘤醫(yī)院住院并經(jīng)病理或臨床診斷為良性腫瘤的患者92例(包括乳腺腫瘤38例、婦科腫瘤21例、肺部良性疾病11例、頭頸部腫瘤10例及其他腫瘤12例)，其中男15例，女76例，年齡16～90歲，平均(44.6±16.2)歲；診斷為惡性腫瘤的患者213例(包括乳腺癌52例、肺癌45例、消化道惡性腫瘤47例、卵巢癌和宮頸癌16例、惡性淋巴瘤14例、鼻咽癌18例、其他惡性腫瘤21例)，其中男106例，女107例，年齡25～85歲，平均(55.1±13.4)歲。另選同期健康體檢者90例作為健康對(duì)照組，其中男55例，女35例，年齡22～70歲，平均(39.2±11.3)歲。

1.2 方法 惡性腫瘤患者尿液標(biāo)本213例，良性疾病患者尿液標(biāo)本92例，健康體檢者標(biāo)本90例，均要求采取新鮮晨尿。采用吉林生物研究院研制提供的“預(yù)檢一號(hào)”，即對(duì)羥基苯丙氨酸(酪氨酸)尿液檢測(cè)試劑(YZB/吉00005-2011)，在室溫下，取新鮮清潔尿液5 mL加入裝有(0.60±0.03)mL檢測(cè)試劑的安培瓶中，振蕩混勻后靜置5 min，將沉淀物顏色與標(biāo)準(zhǔn)色板對(duì)比以判定結(jié)果。對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)色板，沉淀物白色或淺黃色為陰性(-)，淺紅色為弱陽性(±)，紅色為陽性(+)，磚紅色為強(qiáng)陽性(++)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS20.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理及統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)數(shù)資料采用百分率表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)。以α=0.05為檢驗(yàn)水準(zhǔn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 尿液對(duì)羥基苯丙氨酸檢測(cè)結(jié)果比較 見表1。

表1 395例尿液對(duì)羥基苯丙氨酸檢測(cè)結(jié)果比較

注：與健康對(duì)照組比較，△P<0.01；與良性疾病組比較，▼P<0.01；-表示無數(shù)值。

2.2 惡性腫瘤組不同病種的檢測(cè)結(jié)果比較 見表2。

表2 惡性腫瘤組不同病種的檢測(cè)結(jié)果比較

注：不同病種間比較，χ2=4.542 0，P>0.05。-表示無數(shù)值。

2.3 對(duì)羥基苯丙氨酸尿液檢測(cè)在惡性腫瘤診斷中的臨床價(jià)值 對(duì)羥基苯丙氨酸尿液檢測(cè)對(duì)惡性腫瘤的檢測(cè)靈敏度為68.54%，特異性達(dá)88.46%，準(zhǔn)確度為77.72%，陽性預(yù)測(cè)值為87.00%，陰性預(yù)測(cè)值為71.00%，提示對(duì)惡性腫瘤具有重要的診斷價(jià)值。

3 討 論

惡性腫瘤的發(fā)病率呈逐年上升趨勢(shì)，而且趨于年輕化，嚴(yán)重威脅著人類健康。早發(fā)現(xiàn)、早診斷在惡性腫瘤的診治中極為重要，其中腫瘤篩查是早期發(fā)現(xiàn)的重要手段之一。癌癥組織代謝不同于正常組織代謝，通過代謝組學(xué)研究癌癥可以找到新的腫瘤標(biāo)志物，對(duì)癌癥的診斷、治療和預(yù)后具有重要價(jià)值，已有報(bào)道發(fā)現(xiàn)結(jié)腸癌、肝癌、乳腺癌、膀胱癌、前列腺癌的尿液生物標(biāo)志物[9]。人體細(xì)胞在發(fā)生癌變的早、中期，由于惡性腫瘤細(xì)胞的異常增殖會(huì)引起正常細(xì)胞的應(yīng)激反應(yīng)，導(dǎo)致人體內(nèi)氨基酸類物質(zhì)的代謝異常，異常代謝的反應(yīng)產(chǎn)物中含有一類相對(duì)分子質(zhì)量不大的蛋白質(zhì)或多肽類物質(zhì)(如酪氨酸)，其濃度遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過健康人，并可從尿液中排出。據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道，已知的特定氨基酸的代謝及其濃度變化影響著身體器官的新陳代謝，可通過分析尿液氨基酸以檢測(cè)身體器官的代謝改變,這可能是應(yīng)用于早期癌癥診斷的方法之一。另外，有研究報(bào)道，與健康人比較，肺癌患者尿液中酪氨酸濃度明顯升高[10]。與健康人比較，前列腺癌患者尿液中的甘氨酸、絲氨酸、蘇氨酸和丙氨酸濃度明顯減少[11]。與相關(guān)的良性膀胱組織比較，膀胱癌組織的組氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸明顯增加，且與低風(fēng)險(xiǎn)膀胱癌患者相比，高風(fēng)險(xiǎn)膀胱癌患者組氨酸和酪氨酸明顯增加[12]。史棟棟等[13]用羽扇豆醇處理人乳腺癌細(xì)胞MCF-7，發(fā)現(xiàn)羽扇豆醇可能通過改變亮氨酸、異亮氨酸等11種代謝產(chǎn)物抑制MCF-7細(xì)胞的增殖。因此，檢測(cè)患者尿液中氨基酸及其代謝衍生物的濃度變化對(duì)腫瘤的早期診斷和治療具有重要的臨床意義。

根據(jù)化學(xué)反應(yīng)原理，在汞鹽和其他螯合劑的輔助下，在酸性介質(zhì)中，汞鹽和酪氨酸發(fā)生螯合反應(yīng)，生成磚紅色螯合物，通過螯合物的顏色不同即可判定受檢者體內(nèi)是否有相關(guān)的細(xì)胞代謝異常，以此早期發(fā)現(xiàn)惡性腫瘤。相對(duì)于血清腫瘤標(biāo)志物，本研究檢測(cè)標(biāo)本為受檢者尿液，取材方便、無創(chuàng)傷，檢測(cè)時(shí)不需要昂貴的儀器、操作簡(jiǎn)單易行、反應(yīng)快速，在腫瘤發(fā)生的早期即可進(jìn)行檢測(cè)，并且不存在器官特異性，滿足了腫瘤診斷中廣譜篩查、早期診斷的要求，適合大規(guī)模人群的腫瘤篩查。截至目前，以尿液為樣本進(jìn)行腫瘤篩查的報(bào)道并不多見。

在本研究中，表1顯示惡性腫瘤組陽性檢出率為68.54%，明顯高于良性疾病組和健康對(duì)照組(P<0.01)，健康對(duì)照組和良性腫瘤組的陽性檢出率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，且健康對(duì)照組和良性腫瘤組中沒有檢測(cè)到強(qiáng)陽性結(jié)果，該2組共有陽性3例，弱陽性18例，提示該項(xiàng)檢測(cè)對(duì)于良、惡性腫瘤的鑒別診斷有重要意義。惡性腫瘤組中的消化道惡性腫瘤(包括食道癌、胃癌、結(jié)腸癌、直腸癌)、鼻咽癌、淋巴瘤、乳腺癌、婦科惡性腫瘤(包括宮頸癌、卵巢癌、子宮內(nèi)膜癌)、肺癌及其他惡性腫瘤(包括腎癌、前列腺癌、甲狀腺癌、腮腺癌、膀胱癌、胰腺癌、膽囊癌等)的陽性檢出率分別是78.82%、72.22%、71.42%、65.38%、62.50%、60.00%和 71.42%，各癌種陽性檢出率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，提示本試驗(yàn)項(xiàng)目可作為一種廣譜的腫瘤標(biāo)志物。對(duì)羥基苯丙氨酸尿液檢測(cè)對(duì)惡性腫瘤的檢測(cè)靈敏度為68.54%，特異性達(dá)88.46%，準(zhǔn)確度為77.72%，陽性預(yù)測(cè)值為87.00%，陰性預(yù)測(cè)值為71.00%，提示對(duì)惡性腫瘤具有重要的診斷價(jià)值。

對(duì)羥基苯丙氨酸尿液檢測(cè)對(duì)惡性腫瘤的診斷價(jià)值表中可見特異性達(dá)88.46%、陽性預(yù)測(cè)值為87.00%，但陽性檢出率(68.54%)、靈敏度(68.54%)、準(zhǔn)確度(77.70%)、陰性預(yù)測(cè)值(71.00%)均不夠理想，分析其原因可能有以下幾點(diǎn)：(1)腫瘤患者手術(shù)治療前后，體內(nèi)的苯丙氨酸、色氨酸、酪氨酸等氨基酸代謝產(chǎn)物的濃度發(fā)生明顯變化，故同一患者，治療前后陽性率會(huì)有所下降[10]。通過查詢患者病歷發(fā)現(xiàn)此次試驗(yàn)的患者中大部分患者已接受治療，即在檢測(cè)時(shí)患者體內(nèi)的酪氨酸濃度可能已下降，從而降低了陽性檢出率。(2)本方法采用尿液標(biāo)本，在試驗(yàn)過程中，未排除患者服用食物、藥物等因素，導(dǎo)致可能存在假陽性或假陰性結(jié)果。(3)檢測(cè)前的樣本采集，雖然交代過患者需采集晨尿，但并不能排除部分標(biāo)本不是晨尿，從而導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果未能反映體內(nèi)真實(shí)酪氨酸代謝情況。

在進(jìn)行本研究的過程中，筆者發(fā)現(xiàn)本檢測(cè)法存在一定的局限性。由于本法是根據(jù)汞鹽與酪氨酸在酸性介質(zhì)中發(fā)生螯合反應(yīng)生成的沉淀物顏色來判定檢測(cè)結(jié)果，要求被檢測(cè)標(biāo)本為新鮮清潔尿樣，而尿液顏色較深者(比如尿膽紅素濃度高、血紅蛋白尿等)則不適合做該項(xiàng)檢測(cè)，且由于本方法判定結(jié)果為肉眼觀察比色，周圍環(huán)境的光線、檢驗(yàn)者的主觀判斷能力等均會(huì)對(duì)結(jié)果判斷產(chǎn)生一定的影響，使得本法檢測(cè)結(jié)果不易形成客觀統(tǒng)一性；本法檢測(cè)對(duì)象為機(jī)體排泄物尿液，患者服用的藥物和食物是本試驗(yàn)的主要影響因素，若患者在食用能大量分解氨基酸的食物或藥物后，可導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果出現(xiàn)假陽性[14-15]。同樣，若患者服用某些抑制氨基酸分解的藥物時(shí)，尿中代謝物減少，可出現(xiàn)假陰性，故該法還有待進(jìn)一步改良。建議做該檢測(cè)者應(yīng)以停藥3 d、晨尿(空腹8 h)為宜，可以在很大程度上避免假陽性、假陰性的出現(xiàn)。因此，嚴(yán)把檢驗(yàn)前、中、后的質(zhì)量控制關(guān)可以進(jìn)一步提高檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性，如果與其他腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合檢測(cè)則可進(jìn)一步提高惡性腫瘤的陽性檢出率。

綜上所述，尿液對(duì)羥基苯丙氨酸檢測(cè)，取材方便且無創(chuàng)傷、操作簡(jiǎn)單易行、檢測(cè)快捷，在惡性腫瘤廣譜篩查、早期診斷以及良、惡性腫瘤的鑒別診斷中具有重要的臨床價(jià)值。

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Application value of urine hydroxyl phenylalanine in early predicting malignant tumor*

HUANGXue-mei1,WULi-xiang1,LYUZi-lan1,LIYing2,GUOBian-qin1△

(1.DepartmentofClinicalLaboratory,ChongqingTumorInstitute,Chongqing400030,China;2.MolecularTestingCenterofClinicalMedicine,FirstAffiliatedHospitalofChongqingMedicalUniversity,Chongqing400016,China)

Objective To discuss the clinical application value of urine hydroxyl phenylalanine in predicting malignant tumor.Methods Hydroxyl phenylalanine in 395 urine samples (90 healthy subjects,92 patients with benign tumor,213 patients with malignant tumor) was detected by the hydroxy phenylalanine kits.Results The positive detection rate was 8.89% in the normal group,14.13% in the benign tumor group and 68.54% in the malignant tumor group.Compared with the normal group,the positive detection rate in the benign tumor group had no obviously difference (P>0.05);Compared with the benign tumor group,the positive detection rate in the malignant tumor group was obviously increased with statistical difference(P<0.05);the positive detection rate was 78.82% in digestive tract malignant tumor,72.22% in nasopharyngeal carcinoma,71.42% in lymphoma,65.38% in breast cancer,62.50% in gynecologic malignant tumors,60.00% in lung cancer and 72.22% in other malignant tumors.The positive detection rates had no statistical differences among different types of tumor (P>0.05).The sensitivity,specificity,accuracy,positive predictive value and negative predictive value of urine hydroxyl phenylalanine for predicting malignant tumor were 68.54%,88.46%,77.72%,87.00% and 71.00%,respectively.Conclusion Urine hydroxy phenylalanine as a new tumor marker is suitable for the broad spectrum screening of malignant tumor,which has an important significance for the differentiation diagnosis of benign and malignant tumors.

urine hydroxy phenylalanine; malignant tumor; screening

重慶市自然科學(xué)基金項(xiàng)目(cstc2014jcyjA1633)。

黃學(xué)梅,女，副主任技師，本科，主要從事臨床生化方面的研究。

△通訊作者，E-mail:178098941@qq.com。

10.3969/j.issn.1672-9455.2015.16.014

A

1672-9455(2015)16-2333-03

2015-02-20

2015-04-15)