全自動(dòng)血型分析儀在血站血型篩查工作中的應(yīng)用

武麗娟(河南省安陽(yáng)市中心血站檢驗(yàn)科 455000)

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全自動(dòng)血型分析儀在血站血型篩查工作中的應(yīng)用

武麗娟(河南省安陽(yáng)市中心血站檢驗(yàn)科 455000)

目的 探討并評(píng)價(jià)全自動(dòng)血型分析儀應(yīng)用于血站獻(xiàn)血者血型篩查的可行性。方法 采用全自動(dòng)血型分析儀(全自動(dòng)法) 對(duì)20 335例獻(xiàn)血者標(biāo)本進(jìn)行ABO及Rh(D)血型鑒定、鹽水不規(guī)則抗體初篩，并與U型微板法(半自動(dòng)法)進(jìn)行比對(duì)試驗(yàn)。結(jié)果 全自動(dòng)法與半自動(dòng)法比較，ABO血型1次準(zhǔn)確定型率：99.93%>98.84%，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；Rh-D血型鑒定正確率均為100.0%；O細(xì)胞凝集陽(yáng)性率：0.13%>0.06%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；可保持反定型檢測(cè)準(zhǔn)確度達(dá)100.0%的血漿稀釋倍數(shù)為1∶64，高于1∶4；脂血標(biāo)本和溶血標(biāo)本導(dǎo)致的誤判率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論 全自動(dòng)血型分析儀具有較高的準(zhǔn)確度、靈敏度及抗干擾能力,更易發(fā)現(xiàn)鹽水不規(guī)則抗體，適合于血站開展獻(xiàn)血者血型篩查工作。

血型； 篩查； 血型分析儀

血站血型檢測(cè)是無(wú)償獻(xiàn)血血液檢測(cè)的重要組成部分，其結(jié)果判定的正確與否，是保證輸血安全的首要條件，錯(cuò)誤的定型結(jié)果會(huì)危害患者的生命安全。隨著檢測(cè)技術(shù)的發(fā)展，采用全自動(dòng)血型儀進(jìn)行規(guī)范化、自動(dòng)化的血型檢測(cè)已逐漸取代了紙片法和U型微板法。本血站于2012年12月購(gòu)置了1臺(tái)深圳愛康Metis200全自動(dòng)血型分析儀，實(shí)現(xiàn)了常規(guī)ABO、Rh(D)和不規(guī)則抗體篩查的檢測(cè)自動(dòng)化。本文對(duì)全自動(dòng)血型儀檢測(cè)血型與U型微板法檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行比對(duì)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 標(biāo)本來(lái)源 2013年9～12月本血站采集的無(wú)償獻(xiàn)血者全血標(biāo)本20 335人份，每人用乙二胺四乙酸二鉀試管留取5 mL血樣。

1.2 儀器與試劑 單克隆抗-A、抗-B(批號(hào)：2012093025、2012123035)由北京金豪制藥股份有限公司提供；抗-D血清(批號(hào)：20111026、20120320)由上海血液生物醫(yī)藥有限責(zé)任公司提供；A、B、O試劑紅細(xì)胞(批號(hào)：20135324、20135326、20135327、20135329、20135330)由上海生物醫(yī)藥有限責(zé)任公司提供。ML-STAR全自動(dòng)樣本加樣儀(瑞士哈美頓公司)；孵育振蕩器(奧地利Anthos公司)；平板離心機(jī)(德國(guó)產(chǎn))；HT3酶標(biāo)儀(奧地利Anthos公司)；全自動(dòng)血型儀(深圳愛康公司)。

1.3 方法

1.3.1 U型微板法 俗稱半自動(dòng)法。根據(jù)紅細(xì)胞通過(guò)微板在鹽水介質(zhì)凝集的原理，在U型微板上通過(guò)ML-STAR全自動(dòng)樣本加樣儀處理標(biāo)本和試劑。反定型板布局Ac、Bc、Oc，每塊板檢測(cè)30份標(biāo)本；正定型布局抗-A、抗-B，每塊板檢測(cè)44份標(biāo)本；Rh(D)檢測(cè)單獨(dú)在一塊微板檢測(cè)，正、反定型檢測(cè)和Rh(D)檢測(cè)試劑和標(biāo)本量為50 μL∶30 μL。完成分配的微板手工轉(zhuǎn)移至孵育振蕩器中，轉(zhuǎn)速400 r、振幅3F、振蕩6 min；手工轉(zhuǎn)移至平板離心機(jī)，選擇500 r的轉(zhuǎn)速離心1 min；轉(zhuǎn)移到孵育振蕩器，選擇轉(zhuǎn)速1 000 r、振幅1F、振蕩2 min，靜置3 min，用HT3酶標(biāo)儀比色，通過(guò)ITSWELL軟件進(jìn)行分析判斷，同時(shí)肉眼判斷結(jié)果符合性。對(duì)可疑標(biāo)本再重復(fù)檢測(cè)，仍無(wú)法得到明確結(jié)果時(shí)，送血型室確認(rèn)。

1.3.2 全自動(dòng)法 根據(jù)紅細(xì)胞通過(guò)微板在鹽水介質(zhì)凝集的原理，反定型布局Ac、Bc、Oc，每塊板檢測(cè)30份標(biāo)本；正定型布局抗-A、抗-B、抗-D，每塊板檢測(cè)30份標(biāo)本。在全自動(dòng)血型儀上采用UV型板，從標(biāo)本條碼的采集、標(biāo)本分配、試劑分配、再到孵育、離心、振蕩、CCD成像、分析判斷、傳輸結(jié)果等步驟，過(guò)程全自動(dòng)化。對(duì)可疑標(biāo)本再重復(fù)檢測(cè)，仍無(wú)法得到明確結(jié)果時(shí)，送血型室確認(rèn)。

1.3.3 質(zhì)量控制 每批標(biāo)本檢測(cè)前進(jìn)行抗-A、抗-B、抗-D和Ac、Bc質(zhì)控試劑的符合性試驗(yàn)，用來(lái)控制試劑質(zhì)量，如發(fā)現(xiàn)質(zhì)控試劑符合性試驗(yàn)結(jié)果異常，暫停試驗(yàn)，分析發(fā)生異常的原因。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，各組數(shù)據(jù)比較用χ2分析，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 全自動(dòng)法和U型微板法兩種方法檢測(cè)同樣標(biāo)本血型篩查結(jié)果比較 見表1。58例Rh(D)(-)送本血站血型室鑒定均為Rh(D)(-)，其中1例檢測(cè)出抗-C。與U型微板法比較，一次準(zhǔn)確定型差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=0.727，P>0.05)；Oc凝集差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=5.153,P<0.05)。

2.2 全自動(dòng)法與U型微板法Oc凝集發(fā)現(xiàn)的鹽水不規(guī)則抗體參比試驗(yàn)室鑒定結(jié)果比對(duì) 見表2。

表1 兩種方法血型篩查結(jié)果比較[n(%)]

注：與U型微板法比較,*P<0.05。

表2 兩種方法Oc 凝集發(fā)現(xiàn)的鹽水不規(guī)則抗體參比試驗(yàn)室鑒定結(jié)果比對(duì)

表3 兩種方法對(duì)倍比稀釋后的血漿反定型檢測(cè)結(jié)果比較

注：(+)表示陽(yáng)性，(-)表示陰性。

2.3 全自動(dòng)法和U型微板法倍比稀釋后的血漿反定型檢測(cè)結(jié)果比較 見表3。2.4 全自動(dòng)法和U型微板法對(duì)脂血和溶血標(biāo)本血型判讀結(jié)果比較 見表4。

表4 兩種方法對(duì)脂血和溶血標(biāo)本血型篩查結(jié)果比較

注：與U型微板法比較,χ2=10.607,△P<0.05;χ2=7.626,*P<0.05。

3 討 論

以往血型鑒定通常是采用試管法，該法是經(jīng)典的ABO、Rh(D)血型鑒定方法，其結(jié)果準(zhǔn)確可靠，但其操作難以規(guī)范化，不適宜大批量標(biāo)本的處理及結(jié)果的保存[1]。U型微板法雖然已作為常規(guī)的血型檢測(cè)方法應(yīng)用于血站的血型鑒定，但是，由于該方法采用全自動(dòng)加樣儀添加標(biāo)本和試劑，其他操作步驟如微板離心、振蕩、比色、結(jié)果比對(duì)等均需要人工操作，操作人員的經(jīng)驗(yàn)豐富與否會(huì)直接影響血型結(jié)果的判斷[2-3]。全自動(dòng)法是在微板法基礎(chǔ)上近幾年發(fā)展起來(lái)的，從加樣到判定，全部由血型儀完成，同時(shí)在試驗(yàn)過(guò)程中，凝集結(jié)果和CCD成像結(jié)果自動(dòng)備份保存，全過(guò)程可監(jiān)控，真正實(shí)現(xiàn)了全自動(dòng)血型檢測(cè)，減少了人為因素對(duì)試驗(yàn)的影響。

從表1數(shù)據(jù)來(lái)看，20 335份標(biāo)本中采用全自動(dòng)法檢測(cè)的ABO一次準(zhǔn)確定型率(99.93%)高于U型微板法的ABO一次準(zhǔn)確定型率(98.74%)，Rh(D)血型定型正確率100.00%。從表3數(shù)據(jù)來(lái)看，將血漿倍比稀釋后，全自動(dòng)法在血漿稀釋度小于或等于64倍時(shí)定型準(zhǔn)確，稀釋度達(dá)到128倍時(shí)可出現(xiàn)誤判；U型微板法在血漿稀釋度小于或等于4倍時(shí)定型準(zhǔn)確，稀釋度達(dá)到8倍時(shí)可出現(xiàn)誤判。由此說(shuō)明本血站采用全自動(dòng)法檢測(cè)血型無(wú)論準(zhǔn)確性還是靈敏性，結(jié)果可靠性要都優(yōu)于U型微板法。另外，每份標(biāo)本采用全自動(dòng)法檢測(cè)正、反定型和Rh(D)血型添加的試劑量?jī)H為U型微板法的一半，降低了血型試劑成本。

紅細(xì)胞血型不規(guī)則抗體是引起血型鑒定、交叉配型困難及輸血不良反應(yīng)的主要原因之一[4]。為了提高血液質(zhì)量，避免臨床患者輸注含有不規(guī)則抗體的血液制品而發(fā)生溶血性輸血反應(yīng)，保證輸血安全，本血站采用隨機(jī)3人份混合Oc試劑對(duì)獻(xiàn)血者血漿檢測(cè)，可以檢出部分鹽水不規(guī)則抗體[5]。從表1和表2統(tǒng)計(jì)的兩種方法檢出的Oc凝集數(shù)據(jù)比較來(lái)看，經(jīng)血型室確認(rèn)后，全自動(dòng)血型儀Oc凝集陽(yáng)性率明顯高于U型微板法，說(shuō)明用全自動(dòng)血型儀做鹽水不規(guī)則抗體初篩，更容易發(fā)現(xiàn)鹽水不規(guī)則抗體,輸血安全得到了進(jìn)一步保證。

用全自動(dòng)血型儀檢測(cè)出的6例正、反定型不符的標(biāo)本經(jīng)本站血型室確認(rèn)2例均為亞型，其中有1例含有不規(guī)則抗體,3例為正常血型；用U型微板法檢出的僅1例正、反定型不符標(biāo)本經(jīng)本站血型室確認(rèn)也為亞型。分析原因，主要是由于U型微板法在整個(gè)檢測(cè)過(guò)程存在人工干預(yù)。該5例標(biāo)本血清中的抗體效價(jià)較低，導(dǎo)致凝集側(cè)凝集顆粒不明顯，U型微板法在比色判讀前首先進(jìn)行人工肉眼的初步判斷，當(dāng)出現(xiàn)比色結(jié)果和人工判斷不一致時(shí)，檢測(cè)人員會(huì)采取吸取微孔上清液來(lái)達(dá)到增加該孔透明度，再次比色反定型凝集弱的問(wèn)題消除。同樣血清效價(jià)較低的標(biāo)本用全自動(dòng)血型儀檢測(cè)時(shí)，加樣前還要進(jìn)行30 μL生理鹽水稀釋標(biāo)本血清，導(dǎo)致凝集度更弱，這種情況下，反定型進(jìn)行CCD拍照讀值時(shí)，會(huì)出現(xiàn)Tc值在可疑區(qū)域，而正定型讀值正常，從而導(dǎo)致正、反定型不符。但是經(jīng)過(guò)手工試管法重新檢測(cè)，并未造成血型錯(cuò)判。由此可見，當(dāng)ABO 血型全自動(dòng)化檢測(cè)儀正、反定型不一時(shí)，必須再用常規(guī)試管法進(jìn)一步確認(rèn)，以保證檢驗(yàn)結(jié)果的正確性[6]。

從表4統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)可以看出，檢驗(yàn)科用全自動(dòng)血型儀對(duì)143例脂血標(biāo)本和126例溶血標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)，脂血標(biāo)本血型鑒定正確率100.0%(143/143)，溶血標(biāo)本中有2例重度溶血標(biāo)本判讀出現(xiàn)偏差。采用U型微板法進(jìn)行脂血和溶血標(biāo)本檢測(cè)，血型誤判率和無(wú)法判讀率分別達(dá)到了7.7%(11/143)和10.3%(13/126)，與文獻(xiàn)[7]報(bào)道基本一致。這些誤判和無(wú)法判讀的脂血、溶血標(biāo)本都需要工作人員采用手工試管法進(jìn)行確認(rèn)，不僅增加了工作量，同時(shí)也會(huì)延誤報(bào)告時(shí)間。全自動(dòng)血型儀對(duì)脂血、溶血標(biāo)本檢測(cè)正確率之所以這么高，一方面是因?yàn)橛萌詣?dòng)血型儀加樣，標(biāo)本血漿量、試劑量用量都很少，反應(yīng)總體積也很小，再加上生理鹽水的稀釋，因此脂血或溶血血漿被稀釋的效果非常明顯，降低了脂血和溶血對(duì)結(jié)果判讀的影響[8]。另一方面是因?yàn)槿詣?dòng)血型儀進(jìn)行CCD判讀時(shí)從板底掃描，很大程度上降低了反應(yīng)體系中上清液的濁度對(duì)判讀的影響。

[1]周國(guó)平，周結(jié)，向東，等.全自動(dòng)血型分析儀應(yīng)用于獻(xiàn)血者血型篩查[J].中國(guó)輸血雜志，2011，24(5)：395-398.

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[3]韓惠云，仝興明，竇茉莉.微板法全自動(dòng)血型檢測(cè)影響因素探討[J].中國(guó)實(shí)用醫(yī)藥，2010，5(22)：227-228.

[4]Moise KJ.Red blood cell alloimmunization in pregnancy[J].Semin Hematol,2005,42(3):169-178.

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[6]鄭磊，張鵬，王前，等.ABO血型實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法現(xiàn)狀及進(jìn)展[J].中國(guó)輸血雜志，2006，19(1)：80-82.

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Application of fully automatic blood analyzer in blood type screening work in blood stations

WULi-juan

(AnyangMunicipalCentralBloodStation,Anyang,Henan455000,China)

Objective To research and evaluate the feasibility for applying the fully automatic blood analyzer in donators′ blood type screening in blood station.Methods The fully automatic blood analyzer (automatic method) was adopted to conduct the ABO and Rh-D blood typing and brine irregular antibody preliminary screening in 20 335 specimens of blood donors,and then the detection results were compared with those detected by using the U microplate method (semi-automatic contrast test).Results Comparing the fully automatic method with the semi-automatic method,the once accurate typing rate of ABO type:99.93%>98.84%,the difference had no statistical significance (P>0.05);the accuracy rate of Rh(D)type identification was 100.0%;the positive rate of O cell agglutination：0.13%>0.06%,the difference was statistically significant(P<0.05);the plasma dilution ratio of keeping the reverse typing detection′s accuracy up to 100.0% was 1∶64,higher than 1∶4;the difference in the misjudgment rate caused by hemolysis and lipemia blood specimens was statistically significant(P<0.01).Conclusion The fully automatic blood analyzer has higher accuracy,sensitivity and anti-interference ability,is easier to find the brine irregular antibodies and suitable for the donors′ blood type screening work in blood station.

blood types； screening； blood analyzer

武麗娟，女，本科，主管技師，主要從事輸血檢驗(yàn)方面的工作。

10.3969/j.issn.1672-9455.2015.09.035

A

1672-9455(2015)09-1268-03

2014-11-10

2015-01-28)