DKK-3基因甲基化在胃癌病情及預(yù)后評(píng)估中的價(jià)值

孔繁靜(湖北省荊州市第二人民醫(yī)院消化內(nèi)科 434000)

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DKK-3基因甲基化在胃癌病情及預(yù)后評(píng)估中的價(jià)值

孔繁靜(湖北省荊州市第二人民醫(yī)院消化內(nèi)科 434000)

目的 研究胃鏡活檢組織Dickkopf相關(guān)蛋白(DKK-3)基因甲基化在胃癌病情及預(yù)后評(píng)估中的價(jià)值。方法 采用甲基化特異性聚合酶鏈反應(yīng)檢測(cè)胃癌患者腫瘤組織、癌旁正常組織及健康人胃鏡活檢組織的DKK-3基因甲基化，比較不同臨床病理因素中DKK-3基因甲基化的差異，分析3年生存率與DKK-3基因甲基化的關(guān)系。結(jié)果 觀察組研究對(duì)象腫瘤組織DKK-3基因甲基化率顯著高于癌旁正常組織和健康對(duì)照組研究對(duì)象正常組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，DKK-3基因甲基化率在癌旁正常組織和健康對(duì)照組研究對(duì)象正常組織差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。觀察組胃癌患者腫瘤組織中DKK-3基因甲基化率在性別、年齡、病變部位、肉眼形態(tài)、幽門螺桿菌感染和病理類型中差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，在分化程度、腫瘤直徑、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移和TNM分期中差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。DKK-3基因甲基化胃癌患者3年生存率為23.8%，未甲基化胃癌患者3年生存率為52.6%，DKK-3基因甲基化胃癌患者3年生存率顯著高于未甲基化患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論 胃癌患者胃鏡活檢組織DKK-3基因甲基化率越高則病情越重、預(yù)后越差，可作為胃癌病情及預(yù)后評(píng)估的標(biāo)志物。

胃癌； 胃鏡； Dickkopf相關(guān)蛋白； 病情； 預(yù)后

胃癌的發(fā)病機(jī)制與基因表達(dá)異常密切相關(guān)，其中甲基化導(dǎo)致抑癌基因表達(dá)沉默是目前研究的熱點(diǎn)，有研究表明其可作為胃癌病情及預(yù)后評(píng)估的標(biāo)志物[1-2]。Dickkopf相關(guān)蛋白3(DKK-3)具有抑制細(xì)胞增殖的作用,在越來越多的腫瘤中可檢測(cè)到其表觀遺傳學(xué)改變[3]。本研究檢測(cè)胃癌患者和健康人胃鏡活檢組織DKK-3基因甲基化，研究DKK-3基因甲基化在胃癌病情及預(yù)后評(píng)估中的價(jià)值，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 在研究選擇2009年1月至2011年6月在本院胃鏡檢查的胃癌患者作為研究對(duì)象(觀察組)，入選標(biāo)準(zhǔn)：(1)經(jīng)癥狀體征、CT增強(qiáng)、胃鏡和(或)手術(shù)切除標(biāo)本病理學(xué)檢查確診為胃癌；(2)首次診治患者，排除既往行手術(shù)、放療和化療及合并其他腫瘤。觀察組研究對(duì)象80例，男46例，女34例；平均年齡(53.5±5.9)歲。另選擇同期健康體檢的80例健康人為對(duì)照(對(duì)照組)，男45例，女35例；平均年齡(53.2±5.4)歲。兩組研究對(duì)象性別和年齡差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2 DKK-3基因甲基化檢測(cè) 觀察組胃癌患者取腫瘤組織和癌旁正常組織，對(duì)照組健康人取正常胃黏膜。采用甲基化特異性聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)檢測(cè)觀察組胃癌腫瘤組織和癌旁正常組織、對(duì)照組健康人胃黏膜DKK-3基因甲基化，采用Methyl Primer Express v1.0設(shè)計(jì)引物，引物序列見表1。PCR循環(huán)條件為：95 ℃預(yù)變性10 min，95℃變性45 s，63 ℃退火30 s，72 ℃延伸30 s，共28個(gè)循環(huán)，最后一輪72 ℃延伸8 min。最后PCR產(chǎn)物行瓊脂糖凝膠電泳顯影。

表1 MSP檢測(cè)DKK-3基因甲基化引物序列

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SigmaPlot12.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。觀察組胃癌患者DKK-3基因甲基化在不同臨床病理因素中的差異采用χ2檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 DKK-3基因甲基化 觀察組研究對(duì)象腫瘤組織中DKK-3基因甲基化42例，甲基化率為52.5%，癌旁正常組織中1例DKK-3基因甲基化，甲基化率為1.3%，對(duì)照組研究對(duì)象未檢測(cè)到DKK-3基因甲基化，甲基化率為0.0%，觀察組研究對(duì)象腫瘤組織DKK-3基因甲基化率顯著高于癌旁正常組織和對(duì)照組研究對(duì)象正常組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，DKK-3基因甲基化率在癌旁正常組織和對(duì)照組研究對(duì)象正常組織差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

2.2 DKK-3基因甲基化與臨床病理因素的關(guān)系 見表2。觀察組胃癌患者腫瘤組織中DKK-3基因甲基化率在性別、年齡、病變部位、肉眼形態(tài)、Hp感染和病理類型中差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；在分化程度、腫瘤直徑、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移和TNM分期中差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。腫瘤直徑大、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移和TNM分期晚的患者DKK-3基因甲基化率顯著高于腫瘤直徑小、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移和TNM分期早的患者。

表2 不同臨床病理因素中DKK-3基因甲基化差異(n)

續(xù)表2 不同臨床病理因素中DKK-3基因甲基化差異(n)

2.3 DKK-3基因甲基化與3年生存率的關(guān)系 對(duì)觀察組胃癌患者隨訪3年，DKK-3基因甲基化胃癌患者3年生存率為23.8%，DKK-3基因未甲基化胃癌患者3年生存率為52.6%，DKK-3基因甲基化胃癌患者3年生存率顯著高于未甲基化患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

3 討 論

DKK-3基因?qū)儆贒ickkopf家族成員，作為經(jīng)典的Wnt信號(hào)傳導(dǎo)通路拮抗因子，具有抑制細(xì)胞增殖的作用，在越來越多的腫瘤中發(fā)現(xiàn)其表觀遺傳學(xué)表達(dá)沉默與病情及預(yù)后密切相關(guān)[4]。甲基化是表觀遺傳學(xué)最常見的轉(zhuǎn)錄前調(diào)控機(jī)制，甲基化CG自身或結(jié)合甲基結(jié)合蛋白后可阻遏轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合至基因啟動(dòng)子，從而抑制基因表達(dá)，是繼基因突變、單核苷酸多態(tài)性后的研究熱點(diǎn)[5]。楊子榮等[6]采用組織芯片檢測(cè)胃癌中DKK-3基因表達(dá)，發(fā)現(xiàn)其表達(dá)水平顯著低于健康人。基于基因表達(dá)法則，推測(cè)DKK-3的表觀遺傳學(xué)表達(dá)沉默可能與胃癌的發(fā)病機(jī)制、病情及預(yù)后緊密相關(guān)。本研究中觀察組研究對(duì)象腫瘤組織中DKK-3基因甲基化42例，甲基化率為52.5%，癌旁正常組織中1例DKK-3基因甲基化，甲基化率為1.3%，對(duì)照組研究對(duì)象未檢測(cè)到DKK-3基因甲基化，甲基化率為0.0%，觀察組研究對(duì)象腫瘤組織DKK-3基因甲基化率顯著高于癌旁正常組織和對(duì)照組研究對(duì)象正常組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；DKK-3基因甲基化率癌旁正常組織和對(duì)照組研究對(duì)象正常組織中差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。這些證據(jù)證實(shí)DKK-3在胃癌中存在高甲基化表達(dá)沉默狀態(tài)，推測(cè)其可能在胃癌的病情及預(yù)后評(píng)估中具有重要臨床價(jià)值。

傳統(tǒng)的用于評(píng)估胃癌病情及預(yù)后的常見指標(biāo)有腫瘤分化程度和TNM分期，其中分化程度低表示腫瘤惡性程度高，TNM分期越晚預(yù)示預(yù)后越差，可客觀準(zhǔn)確地反映腫瘤的病情及預(yù)后[7]。本研究中，觀察組胃癌患者腫瘤組織中DKK-3基因甲基化率在分化程度、腫瘤直徑、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移和TNM分期中差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，腫瘤直徑大、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移和TNM分期晚的患者DKK-3基因甲基化率顯著高于腫瘤直徑小、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移和TNM分期早的患者。這些證據(jù)表明DKK-3基因甲基化與胃癌患者的病情密切相關(guān)，為臨床胃癌病情評(píng)估提供客觀科學(xué)的證據(jù)。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，DKK-3基因甲基化胃癌患者3年生存率為23.8%，DKK-3基因未甲基化胃癌患者3年生存率為52.6%，DKK-3基因甲基化胃癌患者3年生存率顯著高于未甲基化患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，表明DKK-3基因甲基化的胃癌患者預(yù)后差于未甲基化患者。

目前基因與胃癌病情及預(yù)后均為對(duì)手術(shù)切除的病理標(biāo)本檢測(cè)，其最大不足為無法在術(shù)前提供客觀證據(jù)，因此能在術(shù)前評(píng)估病情及預(yù)后的分子標(biāo)志物具有重要意義[8]。胃鏡活檢組織與傳統(tǒng)病理標(biāo)本相比，能在術(shù)前提供分子水平的證據(jù)，加上其標(biāo)本取得手段簡(jiǎn)單方便，因此具有更廣泛的臨床價(jià)值。

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Value of DKK-3 gene methylation for evaluating disease condition and prognosis in gastric cancer

KONGFan-jing

(DepartmentofGastroenterology,JingzhouMunicipalSecondPeople′sHospital,Jingzhou,Hubei434000,China)

Objective To study the value of Dickkopf-related protein-3(DKK-3) gene methylation by gastroscopy biopsy for evaluating the disease condition and prognosis in gastric cancer.Methods The methylation specific PCR was used to detect the DKK-3 gene methylation by gastroscopy biopsy in gastric cancer tissue,paracancerous normal tissue and healthy controls.The DKK-3 methylation rates were compared among different clinicopathological factors.Results The DKK-3 methylation rate in the tumor tissues of the observation group was significantly higher than that in the paracancerous normal tissues of the observation group and the healthy contol group,the differences were statistically significant(P<0.05).The DKK-3 methylation rates had no statistical differrences in the gender,age,lesion position,gross morphology,Hp infection and pathological type in the cancerous tissue of the observation group,but the differences in the differentiation degree,caner diameter,lymph node metastasis,distant metastasis and TNM staging were statisticlly significant(P<0.05).The 3-year survival rate was 23.8% in the gastric cancer patients with DKK-3 methylation and 52.6% in the patients without DKK-3 methylation,which indicated that the 3-year survival rate in the patients with DKK-3 methylation was significantly lower than that without DKK-3 methylation,the difference was statistically significant(P<0.05).Conclusion The higher the DKK-3 methylation rate by gastroscopy biopsy,the poor the prognosis,so DKK-3 methylation may serve as the marker for evaluating the disease condition and prognosis.

gastric cancer; gastroscopy; DKK-3; disease condition; prognosis

孔繁靜，女，本科，主治醫(yī)師，主要從事消化內(nèi)科疾病的診治。

10.3969/j.issn.1672-9455.2015.09.029

A

1672-9455(2015)09-1253-03

2014-11-05

2015-01-15)