IL-32 在COPD 患者誘導(dǎo)痰和血清中的表達(dá)及意義

王 慧，陳小菊，鄭玉瓊

慢性阻塞性肺疾病(COPD)是一種累及全部氣道、肺泡壁及肺部血管的慢性肺部疾病，其患病率和死亡率在全世界均處于較高水平。 目前COPD 發(fā)病機(jī)制尚不十分清楚，有多種細(xì)胞因子參與其發(fā)病過(guò)程。 白細(xì)胞介素-32(IL-32)是新近發(fā)現(xiàn)的一種炎癥細(xì)胞因子，可由活化的T 細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞、單核細(xì)胞和上皮細(xì)胞產(chǎn)生。 目前發(fā)現(xiàn)IL-32 主要作用是誘導(dǎo)細(xì)胞因子的產(chǎn)生，在多種炎性疾病的演變中起重要作用。 本研究通過(guò)檢測(cè)IL-32 在COPD 穩(wěn)定期患者誘導(dǎo)痰和血清中的表達(dá)， 探討其是否參與COPD 穩(wěn)定期持續(xù)的慢性炎癥及其臨床意義。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象 選取2013 年1 月～2014 年1 月在核工業(yè)416 醫(yī)院呼吸科門診就診的38 例COPD 穩(wěn)定期患者作為COPD 組， 其中男性28 例， 女性10例， 年齡50～78 歲， 平均63.8 歲。 納入標(biāo)準(zhǔn)： 符合2007 年中華醫(yī)學(xué)會(huì)制定的COPD 診治指南[1]中COPD穩(wěn)定期診斷標(biāo)準(zhǔn)。 排除標(biāo)準(zhǔn)：合并其他肺部炎性疾病，如支氣管擴(kuò)張、肺結(jié)核、肺炎、肺膿腫等；肺癌或其他部位腫瘤患者；糖尿病、高血壓患者；近1 個(gè)月使用過(guò)免疫制劑者；近1 個(gè)月COPD 急性感染發(fā)作者。 另同期收集35 例健康體檢者作為正常對(duì)照組，其中男性26 例， 女性9 例， 年齡49～77 歲， 平均62.5 歲。 兩組的年齡、性別等一般資料比較無(wú)顯著性差異。

1.2 檢測(cè)指標(biāo)及方法

1.2.1 血清及誘導(dǎo)痰IL-32 在研究對(duì)象入組后，采集外周靜脈血4 ml，2 h 內(nèi)離心分離血清，置-20 ℃冰箱中保存；采血后，按照參考文獻(xiàn)[2]的方法采集誘導(dǎo)痰標(biāo)本： 受檢者漱口后吸入沙丁胺醇，然后超聲霧化吸入3%高滲鹽水，用力咳痰至培養(yǎng)皿，加入0.1%二硫蘇糖醇(DDT)溶液，振蕩后離心，取上清液分裝，-20 ℃保存待測(cè)。 采用雙抗體夾心ABC-ELISA 法測(cè)定誘導(dǎo)痰和血清中IL-32 含量。 試劑盒由美國(guó)R&D 公司提供，IL-32 濃度由酶標(biāo)儀（Theromo MulliskanAscant） 測(cè) 定 各 孔 吸 光 度 值（optical density，OD）后計(jì)算得出。

1.2.2 肺功能 采用德國(guó)耶格公司生產(chǎn)的Master Screen 型肺功能儀，輸入受試者身高、體重、年齡等生理參數(shù)，測(cè)定第1 秒用力呼氣容積實(shí)際值占預(yù)計(jì)值百分比（FEV1%）。

1.2.3 慢 性 阻 塞 性 肺 疾 病 評(píng) 估 測(cè) 試（COPD assessment test, CAT） 評(píng)分 在采集標(biāo)本、 完成肺功能測(cè)定當(dāng)天，采用CAT 量表對(duì)COPD 患者進(jìn)行評(píng)分。 填寫量表前，使用統(tǒng)一用語(yǔ)講解，患者獨(dú)立完成，現(xiàn)場(chǎng)回收。 CAT 量表的內(nèi)容包括咳嗽、咳痰、胸悶、爬坡或上一層樓梯的感覺(jué)、家務(wù)活動(dòng)、離家外出信心程度、 睡眠和精力等8 個(gè)項(xiàng)目。 每個(gè)項(xiàng)目0～5分，總分值為0～40 分。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 所有數(shù)據(jù)采用SPSS13.0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行處理，計(jì)量資料以±s 表示，兩組間比較用t 檢驗(yàn)；采用Pearson 相關(guān)分析確定兩變量間是否存在直線相關(guān)關(guān)系，P ＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組誘導(dǎo)痰和血清IL-32 水平比較 COPD組誘導(dǎo)痰及血清IL-32 水平均高于正常對(duì)照組（P ＜0.01，表1）。

表1 兩組誘導(dǎo)痰和血清lL-32水平比較(pg/ml)

2.2 相 關(guān) 性 分 析 COPD 組FEV1%為40.51±13.86，CAT 評(píng)分為（25.30 ±5.19）分。相關(guān)分析結(jié)果顯示，COPD 患者誘導(dǎo)痰和血清IL-32 水平均與FEV1%呈顯著負(fù)相關(guān)，與CAT 評(píng)分呈正相關(guān)。 見(jiàn)表2。

表2 COPD組誘導(dǎo)痰及血清lL-32與FEV1%和CAT評(píng)分的相關(guān)性

3 討論

COPD 是一種呼吸系統(tǒng)的慢性炎癥，以持續(xù)的氣流受限為特征，呈進(jìn)行性進(jìn)展過(guò)程，并且多與肺部對(duì)有害氣體或顆粒、尤其是吸煙的異常炎癥反應(yīng)相關(guān)。Calabrese 等[3]曾使用免疫組化技術(shù)檢測(cè)患COPD 的吸煙者、肺功能正常的吸煙者以及非吸煙正常組的外科手術(shù)切除肺臟標(biāo)本中IL-32 的表達(dá)情況， 發(fā)現(xiàn)在COPD 患者肺泡巨噬細(xì)胞、肺泡壁及支氣管上皮中IL-32 的表達(dá)明顯高于其他兩種人群。 本研究發(fā)現(xiàn)，COPD 穩(wěn)定期患者誘導(dǎo)痰中IL-32 水平高于正常對(duì)照組， 提示IL-32 可能參與了COPD 穩(wěn)定期氣道的持續(xù)炎癥反應(yīng)。

研究發(fā)現(xiàn)，IL-32 可激活核轉(zhuǎn)錄因子kappaB（NF-κB）和p38 絲裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）磷酸化，從而誘導(dǎo)炎癥因子的產(chǎn)生，如腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、IL-1β、IL-6、IL-8 和IL-18 等， 這些細(xì)胞因子均在COPD 發(fā)病機(jī)制中起重要作用[4-5]。同時(shí)，阻斷IL-32 表達(dá)， 這些炎癥介質(zhì)均下調(diào)，NF-κB 的活性也受抑制[6]。由此推斷，IL-32 在COPD 發(fā)病機(jī)制中具有前致炎性細(xì)胞因子的特性。 炎癥可能機(jī)制是：吸煙等氣道刺激可激活COPD 患者肺泡巨噬細(xì)胞、肺泡上皮細(xì)胞及支氣管上皮細(xì)胞等產(chǎn)生IL-32，IL-32 可誘導(dǎo)TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8 和IL-18 等炎癥因子的產(chǎn)生，這些炎癥因子及趨化因子又可促進(jìn)肺泡巨噬細(xì)胞及支氣管上皮細(xì)胞產(chǎn)生更多的炎癥因子，由此形成復(fù)雜的炎癥反應(yīng)網(wǎng)絡(luò)參與COPD 的炎癥機(jī)制。目前普遍認(rèn)為，COPD 不僅是一種肺部的慢性炎癥，也可以引起顯著的全身炎癥反應(yīng)。 本研究發(fā)現(xiàn)COPD 穩(wěn)定期患者血清中IL-32 水平也高于正常對(duì)照組， 提示IL-32 不僅參與了COPD 肺部的炎癥反應(yīng)， 還和全身炎癥反應(yīng)相關(guān)。 COPD 組氣道及全身IL-32 水平高于正常對(duì)照組，可能是造成COPD 持續(xù)慢性炎癥的機(jī)制之一。

FEV1%是評(píng)價(jià)COPD 患者呼吸功能的重要指標(biāo)之一，F(xiàn)EV1%降低預(yù)示COPD 的進(jìn)展及病死率增加。 本研究直線相關(guān)分析結(jié)果顯示，COPD 患者誘導(dǎo)痰及血清IL-32 水平與FEV1%呈顯著負(fù)相關(guān)關(guān)系，提示IL-32 可能與COPD 肺部病變的嚴(yán)重程度相關(guān)。

然而FEV1%只是呼吸功能的一項(xiàng)指標(biāo)，用于評(píng)價(jià)作為全身疾病的COPD 尚存在一定程度的局限性[7]。 在目前以人為本的醫(yī)學(xué)模式下，患者要求有更好的生活質(zhì)量。 CAT 是Jones 等[8]2009 年開(kāi)發(fā)的一種評(píng)價(jià)COPD 患者生活質(zhì)量的新方法， 操作簡(jiǎn)單，其可行性和效應(yīng)性已得到臨床充分驗(yàn)證，逐漸廣泛應(yīng)用于對(duì)COPD 患者的病情及治療療效等的評(píng)價(jià)，同時(shí)還應(yīng)用于預(yù)測(cè)患者的死亡風(fēng)險(xiǎn)[8-9]。 本研究結(jié)果顯示，COPD 患者誘導(dǎo)痰及血清IL-32 水平不僅與FEV1%呈負(fù)相關(guān)關(guān)系， 而且與CAT 評(píng)分呈顯著正相關(guān)， 提示IL-32 在一定程度上與COPD 患者病情嚴(yán)重程度及預(yù)后有關(guān)，其臨床實(shí)際評(píng)價(jià)和預(yù)測(cè)價(jià)值有待于進(jìn)一步研究證實(shí)。

綜上所述，IL-32 作為一種前致炎性細(xì)胞因子，可能參與了COPD 穩(wěn)定期氣道及全身的持續(xù)慢性炎癥，在一定程度上與COPD 患者病情嚴(yán)重程度及預(yù)后有關(guān)，故可作為COPD 患者病情評(píng)估和療效評(píng)價(jià)指標(biāo)之一。 在COPD 治療中，通過(guò)降低IL-32 水平來(lái)控制其介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)， 可能是未來(lái)研發(fā)治療COPD 新藥的又一理論基礎(chǔ)。

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