大豆異黃酮對(duì)蛋雞免疫性能的影響

大豆異黃酮（Soy isoflavones，ISO）主要存在于豆科植物中，其中在大豆中含量最高，其主要成分是黃豆苷元、染料木素和大豆黃素。ISO 在動(dòng)物生產(chǎn)中，對(duì)動(dòng)物生長(zhǎng)性能、免疫性能、生殖性能都有一定的影響[1-4]，是一種新型的飼料添加劑。ISO 作為植物雌激素精確地對(duì)免疫系統(tǒng)的影響還不是很清楚。先前對(duì)染料木素的研究比較多，但是ISO 除了染料木素還包含了許多生物活性物質(zhì)[5]，鑒于染料木素對(duì)動(dòng)物免疫性能的影響未必能代表大豆中所有復(fù)雜成分的作用，因此需要對(duì)ISO 進(jìn)行更多的研究，以便對(duì)其調(diào)節(jié)細(xì)胞免疫和體液免疫有更全面的了解。本試驗(yàn)主要研究大豆異黃酮對(duì)蛋雞免疫器官指數(shù)、細(xì)胞免疫和體液免疫的影響，為深入探討大豆異黃酮對(duì)蛋雞免疫性能的作用機(jī)制提供依據(jù)，且為其作為飼料添加劑在動(dòng)物生產(chǎn)中應(yīng)用提供理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料 大豆異黃酮提取物，購自湖南九匯有限公司；海藍(lán)褐蛋雞，購自鄭州牧專孵化場(chǎng)；一抗：IgG、IgM，購自北京博奧森生物技術(shù)開發(fā)有限公司；鼠抗雞PE-CD4+、PE-CD8+、FITC-CD3+單克隆抗體，購自Southern Biotech 公司。

1.2 方法 選取60 只1 日齡健康的蛋雞，隨機(jī)平均分為2 組：試驗(yàn)組（T 組）日糧中添加大豆異黃酮提取物20 mg/kg，對(duì)照組（C 組）飼喂基礎(chǔ)日糧，分別于7、14、21、28、35 日齡隨機(jī)抽取T 組和C 組蛋雞各5只，稱重后分別心臟采血，把血液分裝于兩支EP 管中，一支抗凝血制備淋巴細(xì)胞懸液，用流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定其中CD3+、CD4+、CD8+T 淋巴細(xì)胞亞群百分率，一支離心分離血清冷凍保存，用間接ELISA 法測(cè)定其中IgG、IgM含量。分別取氣管液、腸液、膽汁冷凍保存，用間接ELISA 法測(cè)定其中IgG、IgM 含量；分別取胸腺、脾臟、腔上囊稱重，脾臟研磨制成淋巴細(xì)胞懸液，用流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定其CD3+、CD4+、CD8+T 淋巴細(xì)胞亞群百分率。

2 結(jié)果

2.1 大豆異黃酮對(duì)蛋雞免疫器官指數(shù)的影響 與對(duì)照組相比，從7～35 日齡，試驗(yàn)組的腔上囊指數(shù)、胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)均有不同程度的增加，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異性。表明大豆異黃酮可以促進(jìn)免疫器官發(fā)育，這對(duì)于蛋雞機(jī)體免疫功能有積極意義。

2.2 大豆異黃酮對(duì)蛋雞細(xì)胞免疫的影響 蛋雞添加大豆異黃酮后7～35 d，試驗(yàn)組外周血、脾臟T 淋巴細(xì)胞亞群CD3+、CD4+百分率和CD4+/CD8+的比值高于對(duì)照組，差異均不顯著。外周血T 淋巴細(xì)胞亞群CD8+百分率的變化除在14 d 高于對(duì)照組外，在7、21、28、35 d 比對(duì)照組有所下降，但差異不顯著；脾臟T 淋巴細(xì)胞亞群CD8+百分率的變化除在7、14、21 d 高于對(duì)照組外，在28 d、35 d 比對(duì)照組有所下降，但差異不顯著（見表1）。

表1 外周血和脾臟CD3+，CD4+，CD8+T淋巴細(xì)胞亞群百分率和CD4+/CD8+比值的測(cè)定/% （n=5）

2.3 大豆異黃酮對(duì)蛋雞體液免疫的影響 蛋雞日糧中添加大豆異黃酮后7～35 d，氣管液中IgG含量高于對(duì)照組，以28 d 差異顯著（P＜0.05）；腸液中IgG 含量明顯高于對(duì)照組，14 d、28 d 差異顯著（P＜0.05），血清和膽汁中免疫球蛋白IgG，相對(duì)含量高于對(duì)照組，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異顯著性（見表2）。

蛋雞日糧中添加大豆異黃酮后7～35 d，氣管液中IgM 含量明顯高于對(duì)照組，并且在7、14、28、35 d 差異顯著（P＜0.05），腸液和膽汁中IgM 含量明顯高于對(duì)照組，都在7 d 差異顯著（P＜0.05）。血清中IgM 相對(duì)含量高于對(duì)照組，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異顯著性（見表2）。

3 討論

一般認(rèn)為在一定范圍之內(nèi)，免疫器官重量下降為免疫抑制所致，而免疫器官重量增加則為免疫功能增強(qiáng)的表現(xiàn)[6]，免疫器官重量與指數(shù)一定程度上可以反映免疫器官內(nèi)淋巴細(xì)胞與巨噬細(xì)胞等免疫活性細(xì)胞的數(shù)量，可作為輔助性免疫檢測(cè)手段，了解體內(nèi)淋巴細(xì)胞總體抗體水平。本試驗(yàn)結(jié)果表明，與對(duì)照組相比，從7～35 日齡，試驗(yàn)組的腔上囊指數(shù)、胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)均有不同程度的增加，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異性。表明大豆異黃酮能夠促進(jìn)免疫器官發(fā)育，這對(duì)于蛋雞機(jī)體免疫功能有積極意義。這與高峰等[7]研究結(jié)果是一致的，高峰等研究表明，大豆黃酮顯著提高雛雞免疫器官胸腺和腔上囊的相對(duì)質(zhì)量。

細(xì)胞免疫主要是指T 淋巴細(xì)胞及淋巴因子介導(dǎo)的免疫應(yīng)答，其主要效應(yīng)細(xì)胞是T 細(xì)胞、自然殺傷性細(xì)胞（即NK 細(xì)胞）及K 細(xì)胞。從7～35 d，試驗(yàn)組外周血中CD3+、CD4+T 淋巴細(xì)胞亞群百分率和CD4+/CD8+的比值高于對(duì)照組，差異不顯著；CD8+T 淋巴細(xì)胞亞群百分率除在14d 高于對(duì)照組外，在7、21、28、35 d 比對(duì)照組有所下降，但差異不顯著。從7～35 d，試驗(yàn)組脾臟CD3+、CD4+T淋巴細(xì)胞亞群百分率和CD4+/CD8+的比值高于對(duì)照組，差異不顯著；CD8+T 淋巴細(xì)胞亞群百分率除在7、14、21 d 高于對(duì)照組外，在28 d、35 d 比對(duì)照組有所下降，但差異不顯著。本試驗(yàn)表明，大豆異黃酮調(diào)節(jié)動(dòng)物的細(xì)胞免疫性能是可行的。但I(xiàn)SO 對(duì)免疫是有益的還是有害的可能與動(dòng)物種類、性別、劑量、年齡以及所要觀察的對(duì)象有關(guān)。

表2 蛋雞血清、氣管液、腸液、膽汁中IgG和IgM相對(duì)含量的測(cè)定 （OD at 450 nm）（n=5）

國內(nèi)外文獻(xiàn)證明，大豆異黃酮有增強(qiáng)哺乳類動(dòng)物和家禽免疫的作用，但對(duì)于禽特異性免疫的影響還缺乏系統(tǒng)的研究。禽局部黏膜是病原入侵的主要門戶，局部黏膜的免疫狀態(tài)影響著禽抵抗病原的能力，本試驗(yàn)對(duì)服用大豆異黃酮的蛋雞的局部體液-氣管液、膽汁和腸液的IgM、IgG含量進(jìn)行動(dòng)態(tài)檢測(cè)，為大豆異黃酮的臨床應(yīng)用及進(jìn)一步闡明其免疫作用機(jī)理提供理論依據(jù)。試驗(yàn)結(jié)果表明，與對(duì)照組相比，從7～35 日齡，試驗(yàn)組蛋雞氣管液、膽汁、腸液的IgG、IgM 含量都有提高。氣管液中IgG 含量在28 日齡差異顯著（P＜0.05），IgM 含量在7、14、28、35 日齡差異顯著（P＜0.05）；腸液中IgG含量在14、28 日齡差異顯著（P＜0.05），IgM 含量在7 日齡差異顯著（P＜0.05）。表明在黏膜免疫系統(tǒng)中，試驗(yàn)組體液免疫功能略有所提高。

[1] 王國杰，韓正康，陳杰，等.大豆黃酮對(duì)肉雞生長(zhǎng)的影響及其作用機(jī)制的研究[J].廣東畜牧獸醫(yī)科技，1994，19（3）：17-18.

[2] 郭曉紅，趙恒壽.大豆黃酮對(duì)肉仔雞生長(zhǎng)相關(guān)激素水平與免疫機(jī)能的影響[J].動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào)，2005，17（2）：63-64．

[3] Cassidy A.Potential risks and benefits of phytoestrogen-rich diets[J].Vitamin and Nutrition Research，2003，73：120-126.

[4] 黃金明，劉兆彬，張利軍.大豆黃酮對(duì)急性應(yīng)激條件下公雞睪丸發(fā)育、精液品質(zhì)和血清甲狀腺素水平的影響[J].中國畜牧雜志，2006，42（5）：23-25．

[5] Erdman J W，Badger T M，Lampe J W，et al.Not all soy products are created equal：caution needed in interpretation of research results[J].Journal of Nutrition，2004，134（5）：1229S-1233S.

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[7] 高峰，周光宏，韓正康.大豆黃酮對(duì)雛公雞生產(chǎn)性能和機(jī)體免疫的影響[J].中國家禽，2000，22（10）：8-9.