癌胚抗原定量測(cè)定試劑盒（化學(xué)發(fā)光免疫分析法）的臨床性能評(píng)價(jià)

梁麗萍　李志雄　董志寧　李　明　吳英松★

癌胚抗原定量測(cè)定試劑盒（化學(xué)發(fā)光免疫分析法）的臨床性能評(píng)價(jià)

梁麗萍1李志雄1董志寧1李明2吳英松2★

［摘要］目的對(duì)自制的癌胚抗原定量測(cè)定試劑盒（化學(xué)發(fā)光免疫分析法）進(jìn)行臨床應(yīng)用研究及臨床性能評(píng)價(jià)。方法用自制試劑盒檢測(cè)采集到的血清1 156例和101例血漿，以羅氏公司癌胚抗原定量測(cè)定試劑盒（電化學(xué)發(fā)光法）為對(duì)照試劑，雅培公司癌胚抗原測(cè)定試劑盒（化學(xué)發(fā)光微粒子免疫檢測(cè)法）作為復(fù)核試劑，對(duì)自制試劑盒的一致性和相關(guān)性等指標(biāo)進(jìn)行計(jì)算分析。結(jié)果同羅氏試劑盒相比，自制試劑盒異常符合率達(dá)96．1%，正常符合率達(dá)97．8%，總符合率達(dá)97．3%，Kappa值達(dá)0．931（P＜0．01）。從定量測(cè)定值分析，與羅氏試劑盒測(cè)值相比，自制試劑盒測(cè)值的線性回歸方程為Y＝0．091＋1．009X，相關(guān)系數(shù)為0．987（P＜0．01），相關(guān)性良好。結(jié)論本試劑盒檢測(cè)性能滿足臨床應(yīng)用的需要。

［關(guān)鍵詞］癌胚抗原；臨床研究；化學(xué)發(fā)光免疫分析法

作者單位：1．廣州市達(dá)瑞生物技術(shù)股份有限公司，廣東，廣州510665 2．南方醫(yī)科大學(xué)生物技術(shù)學(xué)院，廣東，廣州510515

The clinic research of the carcinoembryonic antigen (CEA) quantitative diagnostic kit by chemiluminescent immunoassay (CLIA)

LIANG Liping1, LI Zhixiong1, DONG Zhining1, LI Ming2, WU Yingsong2★
(1. Darui Biotechnology Co., Ltd., Guangzhou, Guangdong, China, 510665; 2. School of Biotechnology, Southern Medical University, Guangzhou, Guangdong, China, 510515)

[ABSTRACT] Objective To investigate the clinic research of the carcinoembryonic antigen (CEA) quantitative diagnostic kit by chemiluminescent immunoassay (CLIA) (CEA-CLIA).Methods 1 156 cases of serum and 101 cases of plasma were detected with the self-made kit. Roche carcinoembryonic antigen quantitative determination kit (ECL) were used as control agents, and Abbott carcinoembryonic antigen determination kit (CMIA) were used as a reagent in review. Consistency and correlation were calculated. Results The positive accordant ratio, the negative accordant ratio,the Kappa value was 96.1%,97.8%, 0.931 (P<0.01), respectively. Compared to Roche's kit in the quantitative analysis, the linear regression equation of the reagent was Y=0.091+1.009X.The correlation coefficient was 0.987 (P<0.01). And the correlation coefficient was satisfy. Conclusion CEA-CLIA was a valuable diagnostic kit for clinic application.

[KEY WORDS] Carcinoembryonic antigen (CEA); Clinic research; Chemiluminescent Immunoassay (CLIA)

癌胚抗原（carcinoembryonic antigen，CEA）是一種分子量為175 kDa～200 kDa糖蛋白抗原，1965年首先由加拿大學(xué)者Gold和Freedman從胎兒及結(jié)腸癌組織中發(fā)現(xiàn)［1］。胚胎期主要存在于胃腸道、肝臟和胰腺等器官，出生后含量很低。其濃度與多種腫瘤尤其是消化道腫瘤相關(guān)，如結(jié)腸癌、直腸癌、胃癌、胰腺癌、膽管癌等，肺、乳腺及泌尿生殖系統(tǒng)的惡性腫瘤也升高［2］。在臨床中CEA常與多個(gè)腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合檢測(cè)，用于肺癌、胃癌、結(jié)直腸癌等多種腫瘤的早期診斷、療效和預(yù)后評(píng)價(jià)［3－5］，在臨床上已作為一項(xiàng)常規(guī)的檢查項(xiàng)目。

本文對(duì)自行研制的癌胚抗原定量測(cè)定試劑盒（化學(xué)發(fā)光免疫分析法）進(jìn)行了臨床性能評(píng)價(jià)，分析比較了其與現(xiàn)行使用的進(jìn)口試劑盒在樣本檢測(cè)中的符合率、相關(guān)性和一致性等指標(biāo)，對(duì)其有效性及安全性提供了重要依據(jù)。

1　材料與方法

1．1材料

1．1．1自制癌胚抗原定量測(cè)定試劑盒（化學(xué)發(fā)光免疫分析法）

羅氏公司的癌胚抗原定量測(cè)定試劑盒（電化學(xué)發(fā)光法），對(duì)照用試劑；雅培公司的癌胚抗原測(cè)定試劑盒（化學(xué)發(fā)光微粒子免疫檢測(cè)法），復(fù)核用試劑。

1．1．2CEA質(zhì)控品

質(zhì)控品C1（7 ng／mL～13 ng／mL）、質(zhì)控品C2 （21 ng／mL～39 ng／mL）、質(zhì)控品C3（70 ng／mL～130 ng／mL）為廣州市達(dá)瑞生物技術(shù)股份有限公司自配。

1．1．3樣本

（1）血清樣本：臨床結(jié)腸癌患者或其他腫瘤（如肺癌、肝癌、乳腺癌等）患者和正常查體者血清，共有1 156例。（2）血漿樣本：101例，同一病例的血漿樣本包含于上述血清樣本中。（3）特異性樣本：甲胎蛋白11例、類(lèi)風(fēng)濕因子11例、抗核抗體12例、溶血13例、脂血11例、黃疸12例。以上樣本分別由中國(guó)人民解放軍第302醫(yī)院、南方醫(yī)科大學(xué)南方醫(yī)院、北京地壇醫(yī)院和廈門(mén)大學(xué)附屬第一醫(yī)院提供，均用羅氏公司的癌胚抗原定量測(cè)定試劑盒（電化學(xué)發(fā)光法）測(cè)定血清CEA濃度。

1．1．4實(shí)驗(yàn)儀器

應(yīng)用廈門(mén)優(yōu)邁科醫(yī)學(xué)儀器有限公司的全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀Caris200。

1．2方法

1．2．1試驗(yàn)設(shè)計(jì)

（1）將采集的血清樣本病例編碼，采用對(duì)照方法和自制試劑盒同時(shí)進(jìn)行盲法檢測(cè)，試驗(yàn)結(jié)束后揭盲，對(duì)不符樣本采用復(fù)核方法進(jìn)行復(fù)核。（2）用自制試劑盒對(duì)采集的同一病例的血清與血漿樣本同時(shí)進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。

1．2．2樣本正常參考值

羅氏試劑盒、雅培試劑盒及自制試劑盒的正常參考值均為0 ng／mL～5 ng／mL。

1．2．3統(tǒng)計(jì)處理

利用SPSS 13．0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行一致性及相關(guān)性分析；用Medcalc軟件進(jìn)行Bland-Altman定量分析。

2　結(jié)果

2．1血清樣本的檢測(cè)結(jié)果分析

2．1．1一致性分析

自制試劑盒和羅氏公司對(duì)照試劑盒相比較（見(jiàn)表1），正常符合率為97．8%，異常符合率為96．1%，總符合率為97．3%；Kappa值為0．931（P＜0．01）（見(jiàn)表2）。說(shuō)明自制試劑盒的測(cè)定結(jié)果與羅氏公司試劑盒的測(cè)定結(jié)果符合率較高，有較好的一致性。

表1　臨床檢測(cè)結(jié)果統(tǒng)計(jì)歸納表Table 1　Statistical induction of clinical detection results

2．1．2相關(guān)性分析

利用SPSS13．0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)自制試劑盒和對(duì)照試劑盒的臨床檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行相關(guān)性分析。相關(guān)系數(shù)r值為0．987（P＜0．01）（見(jiàn)表3），線性回歸方程為Y＝0．091＋1．009X（見(jiàn)表4），散點(diǎn)圖見(jiàn)圖1?？梢?jiàn)自制試劑盒與對(duì)照試劑測(cè)值相關(guān)性良好。

2．1．3Bland－Altman分析

以待考核試劑與對(duì)照試劑測(cè)值的均值為X軸，以兩者的差異值為Y軸，繪制散點(diǎn)圖（見(jiàn)圖2）。由圖2可見(jiàn)，2．8%（32／1 156）的點(diǎn)在95%一致性界限外；在一致性界限范圍（9．8，－10．2）內(nèi)，待考核試劑的測(cè)值與對(duì)照試劑的測(cè)值相比，差值的絕對(duì)值最大為9．35 ng／mL，而兩者的測(cè)量結(jié)果平均為100．725 ng／mL，這種相差的幅度在臨床上可以接受。因此認(rèn)為待考核試劑與對(duì)照試劑的測(cè)試結(jié)果具有較好的一致性。

表2　Kappa值的計(jì)算結(jié)果Table 2　The calculated results of Kappa values

表3　相關(guān)性分析結(jié)果Table 3　The results of correlation analysis

表4　線性回歸分析表Table 4 The analysis of linear regression

圖1　血樣測(cè)值相關(guān)性分析散點(diǎn)圖Figure 1　The scatter plot of correlation analysis

圖2　Bland-Altman分析圖Figure 2 The chart of Bland-Altman analysis

2．1．4差異樣本的分析

本次臨床考核共進(jìn)行了1 156例血清樣本的測(cè)試考核，其中有31例樣本自制試劑盒和對(duì)照試劑盒的檢測(cè)結(jié)果判斷不一致。對(duì)這31例差異樣本用復(fù)核試劑盒進(jìn)行檢測(cè)。復(fù)核試劑盒檢測(cè)結(jié)果顯示有21例樣本與考核試劑盒檢測(cè)結(jié)果一致，有10例與對(duì)照試劑盒檢測(cè)結(jié)果一致。說(shuō)明該待考核試劑盒測(cè)定結(jié)果較為準(zhǔn)確、穩(wěn)定和可靠。

可能的差異原因：差異樣本的CEA測(cè)值在正常參考值的上限附近，臨界值導(dǎo)致了判斷結(jié)果的不確定性。需要多次重復(fù)測(cè)定或進(jìn)行第三方檢測(cè)并作臨床追蹤檢測(cè)，才可明確實(shí)驗(yàn)結(jié)果和臨床意義。

2．2血清與血漿樣本的測(cè)值對(duì)比

本次臨床試驗(yàn)對(duì)101例同一病例的血清和血漿樣本用自制試劑盒進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果101例樣本判定結(jié)果一致（見(jiàn)表5）。經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析，與血清檢測(cè)結(jié)果相比，血漿的檢測(cè)結(jié)果Kappa達(dá)1．000（P＜0．01）（見(jiàn)表6），兩者測(cè)值相關(guān)系數(shù)r值達(dá)0．991（P＜0．01）（見(jiàn)表7），線性回歸方程為Y＝－1．292＋1．097X（見(jiàn)表8），散點(diǎn)圖見(jiàn)圖3。結(jié)果表明待考核試劑盒對(duì)血清或血漿的檢測(cè)結(jié)果一致性及相關(guān)性較好，待考核試劑盒適用于血清及血漿樣本的檢測(cè)。

表5　同一病例血清血漿對(duì)比表Table 5　The comparative table of the same patient serum and plasma

表6　同一病例血清和血漿Kappa值統(tǒng)計(jì)結(jié)果表Table 6　The statistical results of the same patient serum and plasma

表7　血漿與對(duì)應(yīng)血清測(cè)值相關(guān)性Table 7　The correlation analysis of the same patient serum and plasma

表8　血漿與對(duì)應(yīng)血清測(cè)值線性回歸分析表Table 8　The linear regression analysis of the serum and plasma

2．3特異性樣本試驗(yàn)分析

本次臨床試驗(yàn)共納入了70例特異性樣本，分別為甲胎蛋白11例、類(lèi)風(fēng)濕因子11例、抗核抗體12例、溶血13例、脂血11例、黃疸12例，均使用自制試劑盒與對(duì)照試劑進(jìn)行檢測(cè)，兩者檢測(cè)結(jié)果均正常，表明待考核試劑盒檢測(cè)血樣時(shí)不受甲胎蛋白、類(lèi)風(fēng)濕因子、抗核抗體、溶血、脂血、黃疸的干擾。

2．4可靠性分析

本實(shí)驗(yàn)在對(duì)質(zhì)控驗(yàn)證后方進(jìn)行測(cè)試，質(zhì)控結(jié)果表明標(biāo)準(zhǔn)差及濃度測(cè)值均符合質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)要求，實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)確可靠。

3　討論

臨床上檢測(cè)CEA的方法有放射性免疫分析法、酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定等。近年來(lái)發(fā)展了熒光免疫分析法、化學(xué)發(fā)光免疫分析法等，化學(xué)發(fā)光分析方法與免疫分析相結(jié)合已經(jīng)成為近年來(lái)檢測(cè)分析技術(shù)的研究熱點(diǎn)?；瘜W(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)是二十世紀(jì)八十年代繼放射免疫分析、酶聯(lián)免疫分析和熒光免疫分析后發(fā)展起來(lái)的一項(xiàng)新的免疫分析技術(shù)，具有靈敏度高、快速、準(zhǔn)確、重復(fù)性好、效期長(zhǎng)并安全無(wú)毒無(wú)污染等優(yōu)點(diǎn)［6］。

本研究以羅氏的癌胚抗原定量測(cè)定試劑盒（電化學(xué)發(fā)光法）為對(duì)照試劑，對(duì)自制的癌胚抗原定量測(cè)定試劑盒（化學(xué)發(fā)光免疫分析法）進(jìn)行臨床檢測(cè)性能評(píng)價(jià)。同對(duì)照試劑比較，自制試劑盒的正常符合率為97．8%，異常符合率為96．1%，總符合率為97．3%；Kappa值為0．931（P＜0．01）；兩者測(cè)值相近，相關(guān)系數(shù)達(dá)0．987（P＜0．01），線性回歸方程為Y＝0．091＋1．009X，相關(guān)性良好。采用Bland-Altman統(tǒng)計(jì)學(xué)方法對(duì)兩組測(cè)定結(jié)果進(jìn)行分析，有97．2%的點(diǎn)在一致性界限內(nèi)，兩者的測(cè)定結(jié)果具有較高的一致性。且通過(guò)對(duì)同一病例的血清與血漿的測(cè)值比較，兩者測(cè)值一致，相關(guān)系數(shù)r值達(dá)0．991（P＜0．01），說(shuō)明本試劑盒適用于人血清或血漿中CEA含量的檢測(cè)。同時(shí)，不受甲胎蛋白、類(lèi)風(fēng)濕因子、抗核抗體、溶血、脂血、黃疸的干擾。說(shuō)明自制的試劑盒與目前臨床廣為應(yīng)用的進(jìn)口試劑在指標(biāo)檢測(cè)性能上具有良好的等效性，可替代國(guó)外昂貴試劑應(yīng)用于臨床檢測(cè)和基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)的研究。

圖3　血漿與對(duì)應(yīng)血清測(cè)值相關(guān)性分析散點(diǎn)圖Figure 3　The scatter plot of correlation analysis of the serum and plasma

參考文獻(xiàn)

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通訊作者：★吳英松，E-mail：yingsongwu＠hotmail．com

基金項(xiàng)目：國(guó)家高技術(shù)研究發(fā)展計(jì)劃（863計(jì)劃）（2011AA02A101）