白芍粗提物及芍藥苷對(duì)變異鏈球菌作用的體外實(shí)驗(yàn)

陳 昶， 盧友光， 潘在興， 邵旭媛， 蘇柏華， 馮 巖

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白芍粗提物及芍藥苷對(duì)變異鏈球菌作用的體外實(shí)驗(yàn)

陳 昶1， 盧友光2， 潘在興1， 邵旭媛1， 蘇柏華2， 馮 巖2

目的 研究白芍粗提物及其主要成分芍藥苷對(duì)變異鏈球菌的作用。方法采用醇提法制取白芍粗提物，通過高效液相色譜法測(cè)定白芍粗提物的主要活性成分，分別觀察白芍粗提物及其主要成分芍藥苷在不同藥物濃度下對(duì)變異鏈球菌的粘附、產(chǎn)酸、合成水不溶性胞外多糖以及葡聚糖轉(zhuǎn)移酶(GTF)比活力等方面的影響。結(jié)果白芍粗提物及芍藥苷對(duì)變異鏈球菌的體外生長(zhǎng)最小抑菌濃度(MIC)分別為3.130和1.770 mg/mL，當(dāng)兩者的濃度分別為≥1.565和≥0.885 mg/mL時(shí)，有明顯的抑制變異鏈球菌粘附、合成水不溶性胞外多糖和GTF比活力的作用(P<0.05)；當(dāng)白芍粗提物濃度為3.130 mg/mL時(shí)，有明顯的抑制變異鏈球菌產(chǎn)酸的作用(P<0.05)，而不同濃度的芍藥苷對(duì)變異鏈球菌產(chǎn)酸均無影響(P>0.05)。不同濃度白芍粗提物組和芍藥苷組的水不溶性胞外多糖含量和GTF比活力之間均呈正向直線相關(guān)。結(jié)論白芍粗提物可抑制變異鏈球菌的粘附、產(chǎn)酸、合成水不溶性胞外多糖和GTF活性，其主要活性成分芍藥苷可抑制變異鏈球菌的粘附、合成水不溶性胞外多糖和GTF活性，但不影響變異鏈球菌的產(chǎn)酸活動(dòng)。

白芍； 芍藥苷； 鏈球菌屬； 鏈球菌，變異； 多糖類； 轉(zhuǎn)移酶類

齲病是多種因素綜合作用導(dǎo)致牙齒硬組織的慢性進(jìn)行性病損，表現(xiàn)為無機(jī)物的脫礦和有機(jī)物的分解，是人類的常見病和多發(fā)病。世界衛(wèi)生組織已將齲病、癌癥和心血管疾病并列為人類三大重點(diǎn)防治疾病。自從20世紀(jì)50年代明確了變異鏈球菌是人類齲病的主要致病菌以來，諸多學(xué)者從抑制或殺滅變異鏈球菌的藥物著手進(jìn)行了大量研究，其中研究和應(yīng)用最多的是化學(xué)合成藥物和植物提取物[1]。白芍為常用中藥材，源于毛茛科植物芍藥的干燥根[2]。本實(shí)驗(yàn)通過觀察白芍粗提物及其主要活性成分芍藥苷對(duì)變異鏈球菌的粘附、產(chǎn)酸、合成胞外多糖以及抑制細(xì)菌酶等方面的影響，探討其防齲機(jī)制，為白芍及其主要活性成分芍藥苷成為防齲藥物提供實(shí)驗(yàn)室依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料 實(shí)驗(yàn)菌株：變異鏈球菌ATCC 25175(福州樂華生物技術(shù)有限公司)。試劑：白芍(安徽德昌藥業(yè)飲片有限公司)；芍藥苷對(duì)照品(批號(hào)110736-201337，中國食品藥品檢定研究院)；蒽酮[生工生物工程(上海)股份有限公司]；考馬斯亮藍(lán)(Biosharp生物技術(shù)公司)；蛋白濃度測(cè)定試劑盒、蔗糖、0.5 mol/L磷酸鹽緩沖液、TPY培養(yǎng)基、固體硫酸銨、乙醇(分析純)、乙腈(色譜純)、甲醇(色譜純)、超純水(福州樂華生物技術(shù)有限公司)。儀器：高效液相色譜儀(LC-20AT，日本島津公司)；CO2水套培養(yǎng)箱(HEPACLASS100型，熱電公司)；超純水機(jī)(5L/H50w型，艾科浦公司)；電子分析天平(AL204型，上海梅特勒-托利多儀器有限公司)；數(shù)顯恒溫水浴鍋(HH-2，江蘇金壇市江南儀器廠)；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(RE-2000B，上海亞榮生化儀器廠)；pH計(jì)(美國奧立龍868酸度計(jì))；酶標(biāo)儀(LD400，美國貝克曼庫爾特公司)。

1.2 方法

1.2.1 白芍粗提物的制備 將白芍藥材低溫烘干后粉碎，精密稱取100 g過50目篩的粉末,置于干燥圓底燒瓶中，加入500 mL 60%乙醇溶液，加熱回流提取，濾過，收集濾液。重復(fù)提取2次，合并濾液。濾液減壓干燥，負(fù)壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至浸膏狀。

1.2.2 高效液相色譜法測(cè)定白芍粗提物的主要活性成分芍藥苷

1.2.2.1 色譜條件 色譜柱：Inertsil ODS-SPC18(250 mm×46 mm，5 μm)；流動(dòng)相：乙腈-0.1%磷酸(25∶75)；流速：0.8 mL/min；柱溫：25 ℃；進(jìn)樣量：10 μL；檢測(cè)波長(zhǎng)：230 nm。

1.2.2.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備 取真空干燥至恒定質(zhì)量的芍藥苷對(duì)照品適量，用甲醇稀釋至1 mL含0.980 mg芍藥苷的對(duì)照品溶液Ⅰ。精密量取對(duì)照品溶液Ⅰ1 mL，分別稀釋成濃度為0.490，0.245，0.049，0.019 mg/mL的對(duì)照品溶液Ⅱ～Ⅴ，混勻待進(jìn)樣。在1.2.2.1的色譜條件下，測(cè)得對(duì)照品溶液Ⅰ～Ⅴ的峰面積值。以對(duì)照品溶液的濃度為橫坐標(biāo)，以測(cè)得的峰面積值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并做回歸曲線。

1.2.2.3 白芍粗提物的藥物成分分析 取白芍粉末6份，各0.1 g，精密稱取，分別加入60%乙醇60 mL，回流提取1 h，濾過，收集濾液。濾渣加入60%乙醇60 mL，加熱回流提取1 h，過濾，收集濾液。合并濾液，濾液減壓干燥，用95%乙醇定容在50 mL容量瓶，得到樣品溶液Ⅰ～Ⅵ。按上述色譜條件進(jìn)行測(cè)定，將測(cè)得的峰面積值代入所得標(biāo)準(zhǔn)品的線性方程，得出粗提物樣品中含有芍藥苷的濃度。

1.2.3 變異鏈球菌菌液調(diào)整 將變異鏈球菌ATCC 25175接種于TPY液體培養(yǎng)基中，在80% N2、20% CO2和37 ℃的條件下，于厭氧箱中培養(yǎng)24 h，然后以3 500 r/min離心15 min，收集細(xì)菌，無菌生理鹽水洗菌2次，用無菌生理鹽水將菌懸液調(diào)在波長(zhǎng)630 nm處吸光度(A630 nm)為1.0，備用。

1.2.4 白芍粗提物和芍藥苷對(duì)變異鏈球菌黏附作用的影響 取10 mL的玻璃試管24個(gè)，每組4個(gè)平行管，分別將白芍粗提物和芍藥苷以倍比稀釋配制成5個(gè)濃度的實(shí)驗(yàn)組藥液和1個(gè)為TPY液體培養(yǎng)基(不含藥液)的對(duì)照組溶液后，分別加入以上備好的菌液0.05 mL、TPY液體培養(yǎng)基2 mL和50%蔗糖-0.5 mol/L磷酸緩沖液0.45 mL，混勻。各試管與地平面呈30°，在80% N2、20% CO2和37 ℃的厭氧箱中培養(yǎng)18 h。然后將試管中溶液輕輕移去，將粘附到試管壁的細(xì)菌用蒸餾水洗脫，每次3 mL，共計(jì)3次，以3 500 r/min離心15 min，收集細(xì)菌，置于3 mL蒸餾水中，混勻。用酶標(biāo)儀測(cè)定A630 nm，計(jì)算粘附抑制率。

粘附抑制率=(對(duì)照組A630 nm-實(shí)驗(yàn)組A630 nm)/對(duì)照組A630 nm×100%

1.2.5 白芍粗提物和芍藥苷對(duì)變異鏈球菌產(chǎn)酸作用的影響 實(shí)驗(yàn)分組同上。采用酸度計(jì)將已配制好的藥物溶液和對(duì)照組溶液調(diào)定初始pH值為7.4，按菌液與藥液1∶10(v/v)比例接種變異鏈球菌，在80% N2、20% CO2和37 ℃的厭氧箱中培養(yǎng)18 h，測(cè)定上清液的pH值，每管測(cè)定3次，結(jié)果取平均值，并計(jì)算培養(yǎng)前后pH值的變化值(ΔpH)。

ΔpH=初始pH值(7.4)-終末pH值

1.2.6 白芍粗提物和芍藥苷對(duì)變異鏈球菌合成胞外多糖的影響 實(shí)驗(yàn)分組同上。按菌液與TPY液體培養(yǎng)基1∶10(v/v)的比例接種變異鏈球菌，在80% N2、20% CO2和37 ℃的厭氧箱中培養(yǎng)24 h，培養(yǎng)液以6 000 r/min離心25 min，沉淀物用5 mL蒸餾水洗滌、離心2次，水洗后的沉淀物加入0.4 mol/L的NaOH 5 mL洗滌、離心3次，合并上清液作為樣品。取適量上清液，以蒽酮法測(cè)定水不溶性多糖的含量，每管測(cè)定3次，結(jié)果取平均值。

1.2.7 白芍粗提物和芍藥苷對(duì)變異鏈球菌葡聚糖轉(zhuǎn)移酶(glucan transferase,GTF)的影響 實(shí)驗(yàn)分組同上。將已配制好的3 mL各濃度藥液按菌液與藥液1∶10(v/v)比例接種于已調(diào)定A值為1.0的菌液0.3 mL，在80% N2、20% CO2和37 ℃的厭氧箱中培養(yǎng)24 h。將細(xì)菌培養(yǎng)物離心，收集上清液，加入固體硫酸銨，達(dá)60%飽和度，置于4 ℃冰箱過夜后離心，將沉淀溶于磷酸鹽緩沖液中透析48 h，得GTF粗酶。取GTF粗酶0.1 mL，加入蒸餾水4 mL，采用考馬斯亮藍(lán)法測(cè)定總蛋白含量，采用Somogyi法測(cè)定酶-底物反應(yīng)液中的還原糖量，每管測(cè)定3次，結(jié)果取平均值。GTF活力單位(IU)定義為標(biāo)準(zhǔn)條件下(37 ℃反應(yīng)1 h)每分鐘從蔗糖釋放1 μmol還原糖所需的酶量，并計(jì)算酶的比活力。

比活力=酶活力(mIU)/總蛋白量(μg)

2 結(jié) 果

2.1 白芍粗提物中的活性成分芍藥苷的含量

2.1.1 白芍供試品與芍藥苷對(duì)照品色譜圖 芍藥苷對(duì)照品和白芍供試品色譜圖顯示，在1.2.2.1的條件下，芍藥苷和其他峰能達(dá)到基線分離(圖1)，對(duì)照品芍藥苷的出峰時(shí)間為9.25 min。根據(jù)對(duì)照品芍藥苷的保留時(shí)間判斷，樣品中保留時(shí)間為9.25 min的峰1鑒定為芍藥苷。

2.1.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 以對(duì)照品溶液的濃度為橫坐標(biāo)，以峰面積值為縱坐標(biāo)，繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線見圖2?；貧w方程：Y=1E+0.7X+20 800，測(cè)得r2為0.999 9，表示線性良好。

2.1.3 白芍中芍藥苷含量測(cè)定 按照供試品溶液制備方法制備樣品，按上述色譜條件測(cè)定峰面積，計(jì)算含量，結(jié)果見表1，可見白芍中芍藥苷的含量為2.629%。

2.2 白芍粗提物、芍藥苷對(duì)變異鏈球菌粘附作用的影響 不同濃度白芍粗提物、芍藥苷對(duì)變異鏈球菌粘附作用的影響見表2?？梢婋S著白芍粗提物濃度的升高，粘附抑制率也隨之增高。經(jīng)ANOVA檢驗(yàn)，白芍各藥物濃度組粘附的A值總體均數(shù)不全相等(F=82.833，P=0.000)。經(jīng)Dunnett-t檢驗(yàn)，當(dāng)白芍濃度為3.130，1.565 mg/mL時(shí)，可以降低變異鏈球菌的黏附性(P<0.05)；當(dāng)白芍濃度為0.783，0.391，0.196 mg/mL時(shí)，隨著濃度的升高，粘附抑制率也隨之增高(P>0.05)。經(jīng)ANOVA檢驗(yàn)，芍藥苷各藥物濃度組粘附的A值總體均數(shù)不全相等(F=2316.416，P=0.000)。經(jīng)Dunnett-t檢驗(yàn)，當(dāng)芍藥苷濃度為1.770，0.885 mg/mL時(shí)，可以降低變異鏈球菌的粘附性(P<0.05)；當(dāng)芍藥苷濃度為0.443，0.221，0.111 mg/mL時(shí)，對(duì)變異鏈球菌的粘附性無明顯影響(P>0.05)。

A：白芍供試品；B：芍藥苷對(duì)照品.1：芍藥苷色譜峰.圖1 白芍供試品及芍藥苷對(duì)照品色譜圖Fig 1 Chromatogram of radix paeoniae alba experimental article and chromatogram of paeoniflorin reference substance

圖2 芍藥苷標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig 2 Paeoniflorin standard curve

2.3 白芍粗提物、芍藥苷對(duì)變異鏈球菌產(chǎn)酸作用的影響 不同濃度白芍粗提物、芍藥苷對(duì)變異鏈球菌產(chǎn)酸作用的影響見表2，可見隨著白芍粗提物濃度的升高，ΔpH越來越小。經(jīng)ANOVA檢驗(yàn)，白芍各藥物濃度組ΔpH值總體均數(shù)不全相等(F=16.887，P=0.000)。經(jīng)Dunnett-t檢驗(yàn)，當(dāng)白芍濃度為3.130 mg/mL時(shí)，可抑制變異鏈球菌產(chǎn)酸(P=0.000)；當(dāng)白芍濃度為1.565，0.783，0.391 mg/mL時(shí)，對(duì)變異鏈球菌產(chǎn)酸無影響(P>0.05)；當(dāng)白芍濃度為0.196 mg/mL時(shí)，可促進(jìn)變異鏈球菌產(chǎn)酸(P=0.014)。芍藥苷各藥物濃度組的ΔpH值經(jīng)ANOVA檢驗(yàn)顯示，芍藥苷對(duì)變異鏈球菌產(chǎn)酸無影響(F=1.614，P=0.189)。

表1 白芍中芍藥苷含量Tab 1 The content of paeoniflorin in radix paeoniae alba

n=6.

2.4 白芍粗提物、芍藥苷對(duì)變異鏈球菌合成胞外多糖的影響 不同濃度白芍粗提物、芍藥苷對(duì)變異鏈球菌合成胞外多糖的影響見表2，可見隨著白芍粗提物濃度的升高，水不溶性胞外多糖含量越來越小。經(jīng)ANOVA檢驗(yàn)，白芍各藥物濃度組合成胞外多糖含量總體均數(shù)不全相等(F=12.272，P=0.000)。經(jīng)Dunnett-t檢驗(yàn)，當(dāng)白芍濃度為3.130，1.565 mg/mL時(shí)，可抑制變異鏈球菌產(chǎn)生胞外多糖(P<0.05)；當(dāng)白芍濃度為0.783，0.391，0.196 mg/mL時(shí)，對(duì)變異鏈球菌產(chǎn)生胞外多糖無影響(P>0.05)。隨著芍藥苷濃度的升高，水不溶性胞外多糖含量越來越小，經(jīng)ANOVA檢驗(yàn)，芍藥苷各藥物濃度組合成胞外多糖含量總體均數(shù)不全相等(F=132.888，P=0.000)，經(jīng)Dunnett-t檢驗(yàn)，當(dāng)芍藥苷濃度為1.770，0.885 mg/mL時(shí)，可抑制變異鏈球菌產(chǎn)生胞外多糖(P=0.000)；當(dāng)芍藥苷濃度為0.443，0.221，0.111 mg/mL時(shí)，對(duì)變異鏈球菌產(chǎn)生胞外多糖無影響(P>0.05)。

2.5 白芍粗提物、芍藥苷對(duì)GTF的影響 不同濃度白芍粗提物、芍藥苷對(duì)GTF的影響見表3，可見隨著白芍粗提物濃度的升高，酶比活力越來越小。經(jīng)ANOVA檢驗(yàn)，白芍各藥物濃度組對(duì)變異鏈球菌酶比活力值總體均數(shù)不全相等(F=9.657，P=0.000)。經(jīng)Dunnett-t檢驗(yàn)，當(dāng)白芍濃度為3.130，1.565 mg/mL時(shí)，變異鏈球菌酶比活力降低(P<0.05)；當(dāng)白芍濃度為0.783，0.391，0.196 mg/mL時(shí)，對(duì)變異鏈球菌酶比活力無影響(P>0.05)。不同濃度白芍粗提物組的胞外多糖含量和酶比活力之間呈正向直線相關(guān)(r=0.950，P=0.013)。隨著芍藥苷濃度的升高，酶比活力越來越小。經(jīng)ANOVA檢驗(yàn)，芍藥苷各藥物濃度組對(duì)變異鏈球菌酶比活力值總體均數(shù)不全相等(F=12.331，P=0.000)。經(jīng)Dunnett-t檢驗(yàn)，當(dāng)芍藥苷濃度為1.770，0.885 mg/mL時(shí)，變異鏈球菌酶比活力降低(P<0.05)；當(dāng)芍藥苷濃度為0.443，0.221，0.111 mg/mL時(shí)，對(duì)變異鏈球菌酶比活力無影響(P>0.05)。不同濃度芍藥苷組的胞外多糖含量和酶比活力之間呈正向直線相關(guān)(r=0.990，P=0.001)。

表2 不同濃度白芍粗提物、芍藥苷對(duì)變異鏈球菌粘附、產(chǎn)酸、合成胞外多糖的影響

Tab 2 The influence of different concentrations of radix paeoniae alba crude extracts and paeoniflorin on the adhesion ability, acid generation and exopolysaccharide production of streptococcus mutaus

藥 物ρ藥物/(mg·mL-1)吸光度粘附抑制率/%ΔpHρ胞外多糖/(μg·mL-1)白芍3.1300.145±0.0047.780☆1.798±0.036☆45.565±5.645☆1.5650.145±0.0047.780☆2.000±0.05756.048±5.164☆0.7830.155±0.0051.2622.030±0.05570.161±7.9560.3910.155±0.0061.4312.088±0.04673.790±10.5660.1960.155±0.0061.1202.135±0.054☆76.613±8.171空白對(duì)照0.157±0.006-2.000±0.08180.645±7.565芍藥苷1.7700.509±0.00210.855☆-0.008±0.067152.016±2.030☆0.8850.514±0.00210.073☆-0.075±0.097168.145±3.325☆0.4430.569±0.0010.308-0.005±0.231197.581±8.0650.2210.570±0.0020.2650.268±0.230208.871±0.9310.1110.570±0.0020.1750.248±0.398204.839±3.951空白對(duì)照0.571±0.002--0.060±0.277204.839±1.862

與空白對(duì)照組比較，☆：P<0.05.

表3 不同濃度白芍粗提物、芍藥苷對(duì)變異鏈球菌葡聚糖轉(zhuǎn)移酶的影響

Tab 3 The influence of different concentrations of radix paeoniae alba crude extracts and paeoniflorin on glucan transferase of streptococcus mutaus

與空白對(duì)照組比較，☆：P<0.05.

3 討 論

現(xiàn)代藥理學(xué)研究認(rèn)為，白芍可用于月經(jīng)不調(diào)、盜汗、自汗、四肢痙攣、頭痛眩暈等癥[2]。白芍化學(xué)成分復(fù)雜，主要有效成分為芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷、氧芍藥苷、苯甲酰芍藥苷等成分，其主要活性成分芍藥苷是一種雙環(huán)單萜類糖苷化合物，具有鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)痛、抗炎、擴(kuò)張血管、改善微循環(huán)、免疫調(diào)節(jié)等活性[3-8]。有文獻(xiàn)報(bào)道，白芍對(duì)志賀氏菌、金黃色葡萄球菌等具有較強(qiáng)的抗菌作用[9]。文洪林等認(rèn)為，白芍對(duì)口腔厭氧菌有抑制作用[10]。張倩等的研究表明，芍藥苷能明顯減少炎癥因子的釋放，可改善細(xì)菌及其有效成分引起的炎癥反應(yīng)[11]。

變異鏈球菌的致齲因子包括對(duì)牙面的粘附、產(chǎn)酸、生成水不溶性胞外多糖和GTF。變異鏈球菌胞壁中的脂磷壁酸、葡聚糖連接蛋白等表面黏附物質(zhì)，以黏附素形式選擇性與膜表面有機(jī)受體結(jié)合，定植于牙表面，促使菌斑形成。變異鏈球菌菌體表面粘附有GTF，能利用口腔內(nèi)的碳水化合物，特別是蔗糖，合成水不溶性胞外多糖，并介導(dǎo)該菌的蔗糖依賴性粘附。水不溶性胞外多糖具有很強(qiáng)的粘附性和抗水解性，是構(gòu)成菌斑的基本骨架結(jié)構(gòu)[12]。在菌斑中生存的變異鏈球菌能迅速發(fā)酵多種碳水化合物產(chǎn)生大量的酸，使局部pH下降至5.5以下，避開唾液的緩沖作用，從而造成局部硬組織脫礦，齲病病變過程開始。

本研究通過白芍粗提物及其主要活性成分芍藥苷對(duì)變異鏈球菌的粘附、產(chǎn)酸、合成水不溶性胞外多糖以及抑制GTF等方面的影響來研究白芍粗提物及其主要活性成分對(duì)變異鏈球菌是否有抑制作用，從而探討白芍及其主要活性成分芍藥苷作為防齲藥物的可能性。研究發(fā)現(xiàn)，白芍粗提物可抑制變異鏈球菌的粘附、產(chǎn)酸、合成水不溶性胞外多糖和GTF活性，其主要活性成分芍藥苷可抑制變異鏈球菌的粘附、合成水不溶性胞外多糖和GTF活性，但不影響變異鏈球菌的產(chǎn)酸活動(dòng)。因此，筆者認(rèn)為，白芍粗提物及其主要活性成分芍藥苷可以通過對(duì)變異鏈球菌的致齲因子粘附、產(chǎn)酸、合成水不溶性胞外多糖以及GTF等的抑制作用，達(dá)到防齲的目的。

芍藥苷抑制變異鏈球菌粘附能力的可能機(jī)制：(1)與變異鏈球菌細(xì)胞表面蛋白發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，引起表面蛋白化學(xué)結(jié)構(gòu)的變化和數(shù)量的減少，從而降低變異鏈球菌細(xì)胞表面的疏水性，并導(dǎo)致粘附減少[13]；(2)水不溶性胞外多糖具有黏性，在細(xì)菌粘附、菌斑形成中起著重要的作用，而芍藥苷可抑制GTF的活性和水不溶性胞外多糖的合成，從而影響變異鏈球菌的粘附作用。白芍化學(xué)成分復(fù)雜，除主要成分芍藥苷外，還含有沒食子鞣酸等，可抑制變異鏈球菌的粘附、產(chǎn)酸、合成水不溶性胞外多糖和GTF活性[5,14]。

綜上所述，白芍粗提物可抑制變異鏈球菌的粘附、產(chǎn)酸、合成水不溶性胞外多糖和GTF活性。芍藥苷可抑制變異鏈球菌的粘附、合成水不溶性胞外多糖和GTF活性，但不影響變異鏈球菌的產(chǎn)酸活動(dòng)。白芍及其主要活性成分芍藥苷有望開發(fā)為一種有效的防齲藥物。

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(編輯：何佳鳳)

Effect of Radix Paeoniae Alba Crude Extracts and its Main Ingredients on Streptococcus Mutaus(invitroExperimental Study)

CHEN Chang1, LU Youguang2, PAN Zaixing1, SHAO Xuyuan1, SU Bohua2, FENG Yan2

1.Department of Stomatology，F(xiàn)ujian Provincial Government Hospital，F(xiàn)uzhou 350001, China;2.Department of Preventive Dentistry, The Affiliated Stomatology Hospital of Fujian Medical University, Fuzhou 350002, China

Objective To inverstigate the effect of radix paeoniae alba crude extracts and its main ingredients on streptococcus mutaus. Methods Radix paeoniae alba crude extracts was made by alcohol extraction process. The main active ingredients of radix paeoniae alba crude extracts was determined by high performance liquid chromatography (HPLC). The effect of radix paeoniae alba crude extracts and paeoniflorin，which is the main components of radix paeoniae alba，at the various concentration on adhesion ability, acid generation, insoluble exopolysaccharide production and glucan transferase activity were measured on streptococcus mutaus. Results The minimum inhibition concentration (MIC)of radix paeoniae alba crude extracts and paeoniflorin on streptococcus mutausinvitrowas 3.13 mg/mL and 1.770 mg/mL respectively. The adhesion ability , insoluble exopolysaccharide production and glucan transferase activity of streptococcus mutaus could be inhibited by radix paeoniae alba crude extracts and paeoniflorin at the concentration of greater than and equal to 1.565 mg/mL and 0.885 mg/mL (P<0.05). Acid generation of streptococcus mutaus could be inhibited by radix paeoniae alba crude extracts at the concentration of 3.13 mg/mL (P<0.05). But paeoniflorin at the various concentration had no effect on acid generation of streptococcus mutaus (P>0.05). Insoluble exopolysaccharide production and glucan transferase activity of radix paeoniae alba crude extracts and paeoniflorin at the various concentration were positively correlated. Conclusion Radix paeoniae alba crude extracts can inhibit the adhesion ability, acid generation, insoluble exopolysaccharide production and glucan transferase activity of streptococcus mutaus. Paeoniflorin can inhibit the adhesion ability, insoluble exopolysaccharide production and glucan transferase activity of streptococcus mutaus. Howere, Paeoniflorin has no effect on acid generation of streptococcus mutaus.

radix paeoniae alba; paeoniflorin; streptococcus; streptococcus mutans; polysaccharides; transferases

2015-07-07

福建省自然科學(xué)基金(2013J01270)

1.福建省級(jí)機(jī)關(guān)醫(yī)院 口腔科，福州 350001； 2.福建醫(yī)科大學(xué) 附屬口腔醫(yī)院口腔預(yù)防科，福州 350002

陳 昶(1971-)，男，副主任醫(yī)師

盧友光.Email: fjlyg63@163.com

R284.1； R318； R378； R378.12

A < class="emphasis_bold">文章編號(hào):1672-4194(2015)06-0349-06

1672-4194(2015)06-0349-06