針刺夾脊穴對切口痛大鼠的鎮(zhèn)痛效應(yīng)

周 興，屈 強(qiáng)

（1.湖北省荊門市第二人民醫(yī)院麻醉科 448000；2.成都中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院麻醉科，成都610072）

疼痛是一種復(fù)雜的生理和心理活動，機(jī)體伴隨著現(xiàn)有的或潛在的組織損傷，心理上產(chǎn)生一種令人不愉快的感覺和情緒上的感受。術(shù)后疼痛主要是手術(shù)部位組織損傷引起的，急性傷害性疼痛及隨后出現(xiàn)的炎性痛。針刺鎮(zhèn)痛是中醫(yī)學(xué)的治療手段，中國人用針刺來緩解疼痛，治療各種疾病已經(jīng)有漫長的歷史。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為針刺穴位可以通過調(diào)整陰陽，疏通經(jīng)絡(luò)，調(diào)和氣血而達(dá)到解除疼痛和治療疾病的作用。電針廣泛應(yīng)用于臨床治療，是現(xiàn)代科學(xué)與中醫(yī)學(xué)的結(jié)合產(chǎn)物；從神經(jīng)生理學(xué)角度講，電針的鎮(zhèn)痛通過激發(fā)內(nèi)源性阿片肽產(chǎn)生。夾脊穴是針刺鎮(zhèn)痛經(jīng)常采用的經(jīng)外穴位，用此穴位鎮(zhèn)痛療效明顯。本實驗在大鼠后爪切口痛模型上，探討電針和夾脊穴持續(xù)輸注鎮(zhèn)痛藥治療術(shù)后痛的鎮(zhèn)痛效果，為臨床應(yīng)用電針夾脊穴和夾脊穴持續(xù)輸注鎮(zhèn)痛藥治療術(shù)后急性疼痛提供實驗依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 藥品與儀器 戊巴比妥鈉（北京化工廠）；枸櫞酸芬太尼注射液（宜昌人福藥業(yè)有限責(zé)任公司）；電子止痛注液泵（YX-3B100mL型，上海怡新醫(yī)療設(shè)備公司）：BME-410A 型熱痛刺激儀（中科院生物工程研究所）；韓式電針儀（LH-201型，北京力普康醫(yī)藥科技發(fā)展公司）；華佗牌針灸針具（中國蘇州針灸用品廠）。

1.2 實驗動物分組與處理 60只健康雄性SD 大鼠，適應(yīng)性喂養(yǎng)7d后，隨機(jī)分為5組：健康對照組、模型組、皮下輸注組、夾脊穴電針組、夾脊穴輸注組，每組12只。各組大鼠于術(shù)前1 h、術(shù)后6、24、48h測定機(jī)械性痛閾、熱痛閾；（1）健康對照組：大鼠麻醉后不行任何處理；（2）模型組：按照文獻(xiàn)制作動物模型后不做任何處理；（3）皮下輸注組：動物模型制作成功后在大鼠腹部皮下持續(xù)輸注鎮(zhèn)痛藥枸櫞酸芬太尼，劑量100μg·kg-1·d-1；（4）夾脊穴電針組：動物模型制作成功后立即采用電針治療30min，然后在各時間點之前30min電針，每3小時電針1次，電針后進(jìn)行大鼠行為學(xué)觀察；（5）夾脊穴輸注組：動物模型制作成功后第4、5腰椎夾脊穴持續(xù)輸注生理鹽水稀釋的枸櫞酸芬太尼，芬太尼劑量同皮下輸注組。

1.3 動物模型的制作 用1%戊巴比妥鈉40mg／kg腹腔注射，大鼠麻醉后，固定大鼠于手術(shù)臺上，用碘伏消毒左后肢，鋪上無菌孔巾，切割大鼠左后爪進(jìn)行手術(shù)刺激。參照文獻(xiàn)［1-5］按Brennan法從足跟近端0.5cm 處向趾部作一長約1.0cm的縱行切口，切開后足的皮膚和筋膜，用眼科鑷挑起足底肌肉并縱向切割，但保持肌肉的起止及附著完整。壓拍止血后用4-0 絲線縫合皮膚兩針。手術(shù)過程大約5min。大鼠置于安靜環(huán)境中喂養(yǎng)，手術(shù)切口消毒并覆蓋紅霉素軟膏。

1.4 針刺選穴與鎮(zhèn)痛方法 夾脊穴的選取參照《實驗動物穴位圖譜》。將大鼠置于特制的固定器內(nèi)，夾脊穴電針組于造模后電針刺激兩側(cè)“夾脊穴”。待大鼠安靜15min后，在脊椎L4和L6的棘突兩側(cè)各旁0.3cm 處定位取穴，插入針灸針，針尖觸及椎板，0.3mm×25.0mm 毫針垂直刺入2.0mm。分別二組導(dǎo)線上下連接，接通LH-201型電針儀，采用疏密波，頻率2 Hz與100Hz各2s交替，強(qiáng)度1mA，持續(xù)30min，夾脊穴電針組在術(shù)畢即刻進(jìn)行電針，每3小時電針1次。皮下輸注組和夾脊穴輸注組行蝶形套管針皮下埋植絲線縫合固定，連接一次性電子鎮(zhèn)痛泵，均在連接鎮(zhèn)痛泵前給予負(fù)荷劑量1μg，然后鎮(zhèn)痛泵開始持續(xù)輸注鎮(zhèn)痛液。

1.5 大鼠行為學(xué)觀察 在術(shù)前1h和術(shù)后6h、24h、48h，所有大鼠均測量機(jī)械性痛閾用機(jī)械縮足反射閾（mechanical withdrawal threshold，MWT）值表示；熱痛閾使用Hargreaves法輻射熱測量熱退縮潛伏期（thermal withdrawal latency，TWL）。大鼠行為學(xué)檢測時間在8：00～17：00。

1.5.1 大鼠機(jī)械性痛閾測定 切口痛模型建立后在術(shù)前1h，術(shù)后6，24，48h時刻，采用動態(tài)足底觸覺設(shè)備檢測大鼠左后足MWT 值。在安靜環(huán)境下，將大鼠放置在動態(tài)足底觸覺計的金屬網(wǎng)架上，使大鼠安靜以備檢測。檢測前，設(shè)置好測量設(shè)備不銹鋼針刺激的上升速度和最大力度（30g）。檢測時，在距離手術(shù)切口6.0mm 處，不銹鋼針在大鼠左后足底的某一位點從金屬網(wǎng)下方刺激，不銹鋼針接觸大鼠足底皮膚后，逐漸增加刺激力量。當(dāng)刺激達(dá)到一定程度，大鼠剛開始疼痛時，左后肢抬起，不銹鋼針離開足底皮膚。此時，動態(tài)足底觸覺計的顯示屏上的數(shù)值為大鼠的MWT。測量術(shù)前1h的MWT 時，實驗用30g力量刺激左后足底，若持續(xù)刺激3s以上，大鼠沒有抬腿反射，則認(rèn)為大鼠對刺激無反應(yīng)，該實驗大鼠被剔除試驗，選擇新的大鼠重新進(jìn)行試驗。實驗選取左后足3個不同位點檢測機(jī)械痛閾，每只大鼠取各次測量MWT 的均數(shù)，每次間隔5 分鐘。

1.5.2 大鼠熱痛閾的測定 將有機(jī)玻璃箱置于3.0mm 厚的玻璃板上，大鼠在有機(jī)玻璃箱中適應(yīng)15 min 后，按照Hargreaves法用熱輻射刺激儀（10V，50 W，光斑直徑為0.5cm）照射大鼠足底，當(dāng)大鼠出現(xiàn)抬腿躲避反射的時間為TWL。切斷時間為25s，以防止組織損傷，每只大鼠左后足底取3個不同的位點，測定3次，每次間隔時間3min，取其平均值為熱痛閾值。

1.6 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS17.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，計量資料采用±s表示。組內(nèi)不同時間點痛覺閾值采用重復(fù)測量數(shù)據(jù)的方差分析，組間比較采用單因素方差分析，兩兩比較用LSD法進(jìn)行，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 機(jī)械痛閾結(jié)果 5組大鼠實驗前MWT 值的基礎(chǔ)值之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；健康對照組各時間點的MWT值比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；模型組、皮下輸注組、夾脊穴電針組、夾脊穴輸注組和健康對照組比較，在術(shù)后6、24、48h MWT 值明顯減少（P＜0.05）；皮下輸注組、夾脊穴電針組、夾脊穴輸注組和模型組比較，在術(shù)后6、24、48h MWT 值明顯增加（P＜0.05）；夾脊穴輸注組和皮下輸注組、夾脊穴電針組比較，在術(shù)后6、24、48h MWT 值明顯增加（P＜0.05）。見表1。

表1 各組大鼠MWT 值的比較（±s，g）

表1 各組大鼠MWT 值的比較（±s，g）

a：P＜0.05，與健康對照組比較；b：P＜0.05，與模型組比較；c：P＜0.05，與夾脊穴輸注組比較。

組別 術(shù)前 術(shù)后6h 術(shù)后24h 術(shù)后48h健康對照組26.0±1.0 25.8±0.8 25.7±0.8 26.0±0.6模 型組 25.7±0.8 3.2±0.4a 5.5±0.5a 8.8±0.8a皮下輸注組 25.5±0.5 11.7±0.8ab 14.7±0.5ab 18.7±0.5ab夾脊穴電針組 25.3±0.5 8.7±0.5ab 11.7±0.5ab 15.8±0.8ab夾脊穴輸注組 25.6±0.7 13.7±0.5abc 18.7±0.5abc 21.0±0.6 a

表2 各組大鼠TWL值的比較（±s，s）

表2 各組大鼠TWL值的比較（±s，s）

a：P＜0.05，與健康對照組比較；b：P＜0.05，與模型組比較；c：P＜0.05，與夾脊穴輸注組比較。

組別 術(shù)前 術(shù)后6h 術(shù)后24h 術(shù)后48h健康對照組23.3±0.5 23.3±0.8 23.0±0.9 23.2±0.8模 型組 23.3±0.5 6.0±0.6a 9.5±0.8a 13.0±0.6a皮下輸注組 23.7±0.5 12.3±0.5ab 14.2±0.4ab 17.7±1.0ab夾脊穴電針組 23.4±0.2 10.0±0.6abc 11.7±0.5abc 15.8±0夾脊穴輸注組 23.5±0.5 15.0±0.6ab 18.7±0.5ab 22.3±0.5 ab

2.2 熱痛閾結(jié)果 5組大鼠實驗前TWL 基礎(chǔ)值間比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；健康對照組各監(jiān)測時間點的TWL比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；模型組、皮下輸注組、夾脊穴電針組、夾脊穴輸注組與健康對照組比較，TWL 在術(shù)后6、24、48h明顯縮短（P＜0.05）；皮下輸注組、夾脊穴電針組、夾脊穴輸注組和模型組比較，TWL 在術(shù)后6、24、48h明顯性延長（P＜0.05）；夾脊穴輸注組和皮下輸注組、夾脊穴電針組比較，TWL在術(shù)后6、24、48h 明顯性延長（P＜0.05）。見表2。

3 討 論

為了模擬臨床術(shù)后痛，揭示術(shù)后痛的機(jī)制和進(jìn)行有效的臨床治療，Brennan等首次建立了一種足底急性切口痛動物模型，該模型大鼠在術(shù)后1d出現(xiàn)機(jī)械性痛覺超敏，大約1周恢復(fù)到術(shù)前水平，正好和術(shù)后患者出現(xiàn)疼痛的時間相似；大鼠足底切口痛模型很好地模擬了患者術(shù)后疼痛的刺激，具有可重復(fù)性，可以對機(jī)械性的痛敏（偶發(fā)痛）和非誘發(fā)痛（休息痛）進(jìn)行評估，所以該模型被廣泛應(yīng)用于術(shù)后疼痛機(jī)制的研究。切口痛的高峰在術(shù)后3～4h，3～4d后疼痛緩解，Xu等［6］研究認(rèn)為足底切口痛表現(xiàn)在術(shù)后2h，對機(jī)械刺激和熱刺激表現(xiàn)痛覺過敏，主要的機(jī)械性痛覺過敏在術(shù)后5～6d緩解，而主要的熱痛覺過敏甚至要超過7～10d緩解。Brennan等的急性疼痛動物模型表現(xiàn)自發(fā)性疼痛行為、觸誘發(fā)痛、機(jī)械性痛覺過敏和熱痛覺過敏，和臨床外科手術(shù)后疼痛十分相似。因此，Brennan等創(chuàng)建的大鼠切口疼痛模型是研究手術(shù)后疼痛治療的理想模型之一。

針刺穴位鎮(zhèn)痛過程是一個涉及從外周到中樞神經(jīng)系統(tǒng)各級水平，最為重要的是針刺鎮(zhèn)痛過程產(chǎn)生大量的內(nèi)源性阿片肽。Zhang等［7］認(rèn)為電針鎮(zhèn)痛通過激活由外周神經(jīng)、脊髓和脊髓上機(jī)制產(chǎn)生的多種生物活性物質(zhì)，包括內(nèi)源性阿片類物質(zhì)，降低外周傷害感受器，減少外周、脊髓和血清產(chǎn)生的促炎細(xì)胞因子，降低5羥色銨和去甲腎上腺素對脊髓NMDA 受體亞單位的磷酸化。Silva等［8］在甩尾大鼠實驗電針足三里和三陰交，用2Hz和100Hz電針鎮(zhèn)痛的機(jī)制不同，2Hz的效應(yīng)取決于產(chǎn)生去甲腎上腺素的降低，涉及脊髓的阿片類和毒蕈堿機(jī)制，100Hz的效應(yīng)涉及脊髓阿片類、毒蕈堿和GABA 機(jī)制。Zeng等［9］研究電針足底切口痛大鼠，取穴足三里電針鎮(zhèn)痛和嗎啡給藥鎮(zhèn)痛，電針通過激活阿片受體的參與，可顯著減輕機(jī)械刺激和熱刺激疼痛。Teixeira等［10］觀察比較高頻電針和卡布洛芬的治療效果，在大鼠足底切口痛模型上研究發(fā)現(xiàn)，使用100Hz的高頻電針足三里穴位能減輕機(jī)械性痛覺過敏和熱痛覺過敏；認(rèn)為電針對術(shù)后切口疼痛的治療可能代表一種額外補(bǔ)充的干預(yù)形式。夾脊穴的鎮(zhèn)痛與現(xiàn)代解剖結(jié)構(gòu)密切相關(guān)。夾脊穴處有豐富的脊神經(jīng)和椎旁交感神經(jīng)干；當(dāng)針刺夾脊穴時，通過針感效應(yīng)，釋放內(nèi)阿片肽達(dá)到鎮(zhèn)痛效果。運用現(xiàn)代解剖學(xué)研究夾脊穴，發(fā)現(xiàn)夾脊穴下有相應(yīng)椎骨下方發(fā)出的脊神經(jīng)后支和伴行的動靜脈分支［11］。所以，電針夾脊穴鎮(zhèn)痛的臨床根據(jù)是由神經(jīng)和脊髓的分布特點而定。在皮下和低或高于夾脊穴水平，在穴位處有大量神經(jīng)纖維覆蓋。從現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的角度來看，針刺夾脊穴，針感傳導(dǎo)反應(yīng)通過神經(jīng)體液調(diào)節(jié)機(jī)制，使交感神經(jīng)末稍釋放神經(jīng)遞質(zhì)，從而治療疾病，達(dá)到調(diào)整臟腑功能的目的［12］。

本實驗從大鼠行為學(xué)觀察發(fā)現(xiàn)大鼠術(shù)后6、24、48h痛覺過敏明顯增強(qiáng)，機(jī)械痛閾和熱痛覺閾值都明顯性降低；應(yīng)用電針治療和夾脊穴輸注鎮(zhèn)痛藥治療后，大鼠對疼痛反應(yīng)都有所減輕，說明針刺對術(shù)后疼痛治療有一定的治療效果；夾脊穴輸注組大鼠的行為學(xué)表現(xiàn)與皮下輸注組比較有明顯性差異。夾脊穴輸注組與皮下輸注組兩組大鼠的行為學(xué)表現(xiàn)有差異是因為穴位可能對鎮(zhèn)痛藥的藥效具有放大效應(yīng)，放大效應(yīng)可能與穴位的特點緊密相關(guān)。穴位的特別之處，就在于它較非穴位組織內(nèi)存在更為密集的血管神經(jīng)及神經(jīng)感受裝置。如有研究對動物及人體穴位和非穴位皮膚組織中神經(jīng)纖維數(shù)量進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)兩者神經(jīng)纖維密度的比例為7.22∶5.26。夾脊穴持續(xù)輸注鎮(zhèn)痛藥實際是穴位注射的一種改良，持續(xù)的刺激穴位產(chǎn)生了這種放大效應(yīng)。石春輝等［13］研究穴位注射聯(lián)合電針治療急性期周圍性面神經(jīng)麻痹認(rèn)為兩者聯(lián)合應(yīng)用可提高臨床效果，療效好于單純的電針治療。梁粵等［14］研究針刺配合復(fù)方青藤堿注射液穴位注射治療膝關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎，發(fā)現(xiàn)針刺配合穴位注射的患者遠(yuǎn)期效果明顯好于針刺西藥組的患者。研究認(rèn)為穴位注射是利用經(jīng)絡(luò)俞穴整合了藥物的藥理作用而產(chǎn)生放大效應(yīng)，其總體效應(yīng)是一種穴藥效應(yīng)，但是穴藥效應(yīng)的機(jī)制仍不清楚［15-17］。

綜上所述，本實驗宏觀上對大鼠行為學(xué)進(jìn)行了觀察，經(jīng)電針夾脊穴和夾脊穴持續(xù)輸注芬太尼能明顯性減輕大鼠痛覺過敏反應(yīng)，說明了持續(xù)性夾脊穴注射的鎮(zhèn)痛效果比電針和普通皮下注射的鎮(zhèn)痛效果更好，電針夾脊穴對術(shù)后痛有一定的鎮(zhèn)痛效果。

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