8種血清標(biāo)志物對肝癌的診斷價值

向啟云　謝傳英　董艷娥　時　飛　蔣　俊　王德新

作者單位：443003 湖北省宜昌市第三人民醫(yī)院

8種血清標(biāo)志物對肝癌的診斷價值

向啟云謝傳英董艷娥時飛蔣俊王德新

作者單位：443003 湖北省宜昌市第三人民醫(yī)院

【摘要】目的探討血清高爾基體蛋白73(GP73)、甲胎蛋白異質(zhì)體3(AFP-L3)、異常凝血酶原(DCP)、磷脂?；嫉鞍拙厶?3(GPC-3)、甲胎蛋白(AFP)、CA199、癌胚抗原(CEA)和鐵蛋白(FER)對原發(fā)性肝癌(PHC)的診斷價值。方法收集75例PHC患者的臨床資料，同時收集慢性肝炎、肝硬化、其他消化系統(tǒng)惡性腫瘤患者及健康對照者各15例的臨床資料。采用ELISA酶聯(lián)免疫分析方法定量檢測各組人群血清高爾基體蛋白73(GP73)、甲胎蛋白異質(zhì)體3(AFP-L3)、異常凝血酶原(DCP)、磷脂?；嫉鞍拙厶?3(GPC-3)、甲胎蛋白(AFP)、CA199、癌胚抗原(CEA)和鐵蛋白(FER)的濃度，并計(jì)算AFP-L3占總AFP的百分濃度(%)。結(jié)果肝癌組GP73、AFP-L3(%)、AFP、CA199、DCP和GPC-3濃度明顯高于其他各組(P<0.05)。單項(xiàng)檢測中GPC-3特異性(97.8%)最高，GP73靈敏度(73.2%)、準(zhǔn)確率(87.5%)最高。聯(lián)合實(shí)驗(yàn)中GP73聯(lián)合其他指標(biāo)診斷PHC的特異性均高于95.0%，甚至高達(dá)100.0%，聯(lián)合所有血清標(biāo)志物診斷PHC的靈敏度最高達(dá)到98.4%。結(jié)論血清GP73和AFP-L3可以作為AFP診斷PHC的輔助手段，且血清標(biāo)志物聯(lián)合檢測可顯著提高PHC的診斷準(zhǔn)確度。

【關(guān)鍵詞】肝癌；血清標(biāo)志物；診斷；臨床效果

8 Kinds of Serum Markers in the Diagnosis of Hepatocellular Carcinoma

XIANGQiyun，XIEChuanying，DONGYan’e，etal.TheThirdPeople'sHospitalofYichang，Yichang，443003

【Abstract】ObjectiveTo discuss serum Golgi proteins 73(GP73)，alpha-fetoprotein body 3 (AFP-L3)，the abnormal prothrombin (DCP)，phosphatidyl alcohol proteoglycan-3 (GPC-3)，alpha-fetoprotein (AFP)，CA199，carcinoembryonic antigen(CEA)and ferritin(FER)in the diagnosis of hepatocellular carcinoma(PHC).MethodsClinical data of 75 cases of PHC were selected.Clinical data of 15 cases of chronic hepatitis，cirrhosis，other digestive cancer and healthy controls were selected.ELISA enzyme-linked immunosorbent assay was used to detect the concentration of GP73，AFP-L3，DCP，GPC-3，AFP，CA199，CEA and FER，and the percentage of AFP-L3 in AFP(%)was calculated.ResultsGP73，AFP-L3(%)，AFP，CA199，DCP and GPC-3 concentration in PHC groups were significantly higher than that of the other groups (P<0.05).In individual detection，GPC-3 had the highest specificity(97.8%)，GP73 had the highest sensitivity(73.2%)，and accuracy(87.5%).GP73 combined with other indicators had specificity above 95.0%，even up to 100.0%;combined detection of 8 tumor markers had the highest sensitivity(98.4%).ConclusionSerum GP73 and AFP-L3 can be supplementary method for AFP in the diagnosis of PHC，and combined detection of other serum markers may improve the diagnostic accuracy of PHC.

【Key words】Liver tumors；Serum markers;Diagnosis；Clinical effect

(ThePracticalJournalofCancer,2015,30:0348～0351)

原發(fā)性肝癌(primary hepatic cancer，PHC)是目前世界上致死率最高的惡性腫瘤之一。盡早準(zhǔn)確診斷PHC是醫(yī)務(wù)人員的工作重點(diǎn)之一[1]。傳統(tǒng)的腫瘤檢測標(biāo)志物主要是血清甲胎蛋白(alpha-fetoprorein，AFP)，但靈敏度和特異性都較低。血清高爾基體蛋白73(serum Golgi glycoprotein 73，GP73)、磷脂?；嫉鞍拙厶?3(glypican-3，GPC-3)、異常凝血酶原(des-γcarboxyprothrombin，DCP)、甲胎蛋白異質(zhì)體3(Lectin-reactiveaipha-fetoprotein，AFP-L3)有望成為比AFP更精確的PHC診斷標(biāo)志物。根據(jù)現(xiàn)有的研究成果[2]，我們對本院腫瘤科75例 PHC患者血清中的GP73、AFP-L3、GPC-3、DCP、AFP、CA199、鐵蛋白(ferritin，F(xiàn)ER)水平和癌胚抗原(carcinoembryonic antigen，CEA)進(jìn)行了分析，并研究了多種標(biāo)志物的聯(lián)合檢測效果，希望能夠提高診斷早期PHC的臨床準(zhǔn)確性。現(xiàn)報(bào)告如下。

1材料與方法

1.1　臨床資料

收集我院自2010年1月至2013年1月腫瘤科接收的75例PHC患者的臨床資料，同時收集慢性肝炎、肝硬化、其他消化系統(tǒng)惡性腫瘤患者及健康對照者各15例的臨床資料。早期PHC患者75例，男性58例，女性17例，年齡25～79歲，平均53歲；肝硬化患者15例，男性10例，女性5例，年齡35～83歲，平均65歲；慢性肝炎患者15例，男性10例，女性5例，年齡30～66歲，平均51歲；其他消化系統(tǒng)惡性腫瘤非肝轉(zhuǎn)移患者15例，男性9例，女性6例，年齡27～79歲，平均64歲；健康者15例，男性10例，女性5例，年齡20～46歲，平均35歲。各組患者的年齡、性別、凝血酶原活動度、血常規(guī)及肝臟功能水平之間均無顯著性差異。肝炎組和健康對照組的血小板計(jì)數(shù)高于其他各組(P<0.05)，凝血酶原、血常規(guī)和肝臟功能在健康組與其他組之間有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(表 1)。

表1　患者臨床資料特征±s)

1.2　方法

研究對象均采用空腹抽取靜脈血5 ml處理，采血后以3 000 r/min離心，分離的血清儲存于-70 ℃冰箱待測。檢測GP73、DCP、GPC-3(酶聯(lián)免疫定量方法)。采用微量離心柱法分離AFP-L3。測定血清CA199、CEA、總AFP(采用羅氏電化學(xué)發(fā)光法)和分離洗脫液中AFP-L3濃度，并計(jì)算AFP-L3/AFP，用百分比表示。

1.3　統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。描述性統(tǒng)計(jì)，AFP和GP73通過箱線圖進(jìn)行比較，包括異常值。所有的值以平均±SD表示。AFP和GP73的組中的中位數(shù)非參數(shù)分布使用曼-惠特尼進(jìn)行檢驗(yàn)。對于二元變量，卡方檢驗(yàn)。McNemar檢驗(yàn)確定PHC患者的比例差異。多組間比較采用Kruskal-Wallis檢驗(yàn)，各標(biāo)志物的PHC診斷特異性、敏感度、準(zhǔn)確度用ROC曲線評價，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1　血清標(biāo)志物濃度檢測結(jié)果比較

GP73、AFP-L3(%)、AFP和CA199濃度，肝癌組明顯高于其他組(P<0.05)。DCP和GPC-3濃度，肝癌組明顯高于其他組(P<0.05)。肝癌組和健康對照組的CEA和FER濃度具有顯著差異(P<0.05)，見表2。

表2　血清標(biāo)志物濃度檢測結(jié)果比較

2.2　血清標(biāo)志物單項(xiàng)及其聯(lián)合檢測PHC的診斷效果

單項(xiàng)檢測中GPC-3特異性最高(97.8%)，GP73靈敏度(73.2%)、準(zhǔn)確率(87.5%)最高。聯(lián)合實(shí)驗(yàn)中GP73與其他指標(biāo)聯(lián)合的特異性均可達(dá)100.0%，聯(lián)合所有腫瘤標(biāo)志物診斷PHC的靈敏度最高可達(dá)98.4%，見表3。

表3　血清標(biāo)志物檢測PHC的診斷效果

3討論

雖然肝癌經(jīng)常出現(xiàn)在10%～20%的肝硬化患者中，但肝癌也發(fā)生在非肝硬化患者中。只有少數(shù)的研究報(bào)道非肝硬化肝癌患者手術(shù)后的預(yù)后特點(diǎn)。在我們的研究中，肝癌患者平均年齡為53歲，與以前的報(bào)道一致。其他一些研究的平均年齡偏低，大概是因?yàn)閷⒗w維板層腫瘤患者(不包括在我們的系列)或乙肝病毒感染患者列入其中所造成的。如在其他研究中，診斷時腫瘤的平均大小>7 cm。這些數(shù)據(jù)可能是由于缺乏針對性的肝臟疾病篩查系統(tǒng)所造成的。事實(shí)上，在大多數(shù)情況下，當(dāng)出現(xiàn)腫瘤相關(guān)的臨床癥狀時(疼痛，出血，不適，和可觸知的腫瘤塊)才能確診為肝癌。

醫(yī)學(xué)知識的發(fā)展，突顯了一個重要問題就是肝癌的發(fā)病率逐年增加，且患者年齡呈現(xiàn)年輕化態(tài)勢。及早盡快地確診肝癌，能夠救助很多患者，改善生活質(zhì)量。診斷肝癌的技術(shù)手段主要集中在影像學(xué)技術(shù)[3]。超聲檢查是最早應(yīng)用于肝癌診斷的技術(shù)，但是由于其優(yōu)勢主要是在肝癌中晚期，而在早期診斷中的可靠性較差。為了能夠找到高效、特異、靈敏的血清學(xué)標(biāo)志物用于早期PHC的診斷，各國投入了大量的科研資源[4]。自從 Abelev 發(fā)現(xiàn) AFP 以及 Ruoshlati 和 Seppala 率先研發(fā)了針對 AFP 的定量分析以來，AFP 作為 PHC 的診斷標(biāo)志物已經(jīng)廣泛用于臨床。然而，大量的研究已經(jīng)證實(shí)，血清 AFP 診斷 PHC 的敏感性較差。新近發(fā)現(xiàn)的PHC血清標(biāo)志物GP73、AFP-L3、DCP和GPC-3、AFP、CA199、FER和CEA得到了眾多試驗(yàn)結(jié)果的證實(shí)[5-6]。本文結(jié)果顯示GP73、AFP-L3(%)、AFP和CA199濃度，肝癌組明顯高于其他組(P<0.05)。DCP和GPC-3濃度，肝癌組明顯高于其他組(P<0.05)。肝癌組和健康對照組的CEA和FER濃度具有顯著差異(P<0.05)。肝癌組CEA和FER濃度僅明顯高于健康對照組(P<0.05)。曾有文獻(xiàn)報(bào)道，肝硬化和肝癌患者GP73水平明顯高于肝炎患者和健康人，說明隨著肝臟疾病的進(jìn)展，GP73逐漸升高[7]。因此，本研究結(jié)果支持血清GP73濃度與PHC診斷效果之間的關(guān)系。本文數(shù)據(jù)顯示肝癌組血清中AFP-L3和AFP明顯高于其他組。文獻(xiàn)曾報(bào)道肝癌、肺癌、胃癌、結(jié)腸癌、前列腺癌等患者血清中的AFP高于健康人群[8]。AFP普遍存在于多種疾病中，導(dǎo)致診斷PHC的特異性偏低。相比之下，AFP-L3靈敏度為59.1，優(yōu)于AFP(51.9)，可進(jìn)一步提高AFP診斷PHC的準(zhǔn)確度[9]。此外，本研究結(jié)果表明肝癌組DCP和GPC-3濃度明顯高于其他組(P<0.05)。肝癌組和健康對照組的CEA和FER濃度具有顯著差異(P<0.05)，說明CEA和FER在診斷早期肝癌方面也具有一定的臨床意義，且其靈敏度分別為65.9和55.9，與AFP相比，具有優(yōu)勢。CEA和FER單獨(dú)測定僅可作為一種廣譜腫瘤標(biāo)志物[10]。相應(yīng)地，其與GP73等其他指標(biāo)聯(lián)合檢測可提高肝癌檢出靈敏度。

本文結(jié)果表明，多種血清標(biāo)志物聯(lián)合診斷PHC的靈敏度和特異性都顯著提高。單項(xiàng)檢測中，GPC-3特異性最高(97.8%)，GP73靈敏度(73.2%)、準(zhǔn)確率(87.5%)。聯(lián)合實(shí)驗(yàn)中GP73聯(lián)合其他指標(biāo)診斷PHC的特異性均高于95.0%，甚至高達(dá)100.0%，聯(lián)合所有血清標(biāo)志物診斷PHC的靈敏度最高達(dá)到98.4%。診斷效果最好。我們的研究表明，GP73可在所有患者及健康人群的血清中檢測到，但肝硬化和HCC患者的GP73水平顯著高于無肝臟疾病人群。血清中的GP73檢測結(jié)果有些令人驚訝，是根據(jù)它的初始特性即高爾基體膜蛋白殘基為依據(jù)。然而，最近研究證明GP73循環(huán)到細(xì)胞膜，并通過一個唯一的內(nèi)體途徑被攝取。這些體外研究表明，GP73可以瞬時達(dá)到質(zhì)膜，并通過潛在通道釋放到循環(huán)系統(tǒng)中。但是GP73在PHC患者中的濃度上調(diào)機(jī)制尚不明確，正在進(jìn)行進(jìn)一步的研究以確定血清GP73是否在其他實(shí)體腫瘤患者體內(nèi)有所改變。

盡管我們表明，與AFP相比，GP73是更好的診斷肝癌的標(biāo)志物，但還有一些需要認(rèn)識到的缺陷。首先，作為生物標(biāo)志物第一階段的研究，仍需要經(jīng)過多個階段的驗(yàn)證才可以應(yīng)用于臨床。其二，研究樣本數(shù)量偏少，無法研究GP73與肝臟疾病潛在病因之間的關(guān)系。

總之，血清GP73和AFP-L3可以作為AFP診斷PHC的輔助手段，且血清標(biāo)志物聯(lián)合檢測可顯著提高PHC的診斷準(zhǔn)確度。

參考文獻(xiàn)

[1]趙運(yùn)勝，王猛，崔辰瑩，等.評價 8 種血清標(biāo)志物在原發(fā)性肝癌診斷中的臨床價值〔J〕.重慶醫(yī)學(xué)，2014，43(2)：214-216.

[2]方宗信，李秀義，黃瑞茹，等.腫瘤標(biāo)記物聯(lián)合檢測對原發(fā)性肝癌的臨床診斷價值探討〔J〕.檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床，2013，10(8)：942-943.

[3]唐翠燕，畢明君，于紅梅，等.腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合檢測對惡性腫瘤診斷價值探討〔J〕.中國醫(yī)藥科學(xué)，2013，2(8)：86.

[4]訾全生.血清腫瘤標(biāo)志物檢測對消化系統(tǒng)腫瘤的應(yīng)用價值〔J〕.中國現(xiàn)代藥物應(yīng)用，2013，7(12)：60-61.

[5]劉成蘭.幾種血清腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合檢測對肝癌診斷和治療的臨床價值〔J〕.國際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2013，34(3)：373-374.

[6]張衛(wèi)云，張志英，李薇，等.CA125，CA199，CEA 聯(lián)合檢測在婦科腫瘤臨床診斷中的應(yīng)用價值〔J〕.生物技術(shù)通訊，2013，23(6)：854-856.

[7]宋紅偉，王雅杰.三種血清腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合檢測對惡性腫瘤的診斷價值〔J〕.實(shí)用癌癥雜志，2009，24(5)：483-485.

[8]韓娜娜，孫長崗，武君.血清腫瘤標(biāo)志物檢測在肺癌中的臨床價值〔J〕.實(shí)用癌癥雜志，2012，27(2)：141-143.

[9]張華，李永興，毛順露，等.血清 VEGF，p53 抗體和 AFP 對原發(fā)性肝細(xì)胞癌的診斷價值〔J〕.標(biāo)記免疫分析與臨床，2013，20(2)：71-73.

[10]向大開，謝家印，羅維，等.多腫瘤標(biāo)志物蛋白芯片中 CA19-9 表達(dá)水平升高對惡性腫瘤的診斷價值〔J〕.實(shí)用癌癥雜志，2012，27(2)：147-152.

(編輯：甘艷)

(收稿日期2014-08-08修回日期 2015-01-29)

中圖分類號：R735.7

文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A

文章編號：1001-5930(2015)03-0348-04

DOI：10.3969/j.issn.1001-5930.2015.03.010