血小板microRNAs在先天性心臟病患兒中輸血導(dǎo)致的血小板激活作用研究

苗曉蕾，劉晉萍，崔勇麗，趙明霞，馮正義，趙 舉，龍 村，李守軍，晏馥霞，王 旭

·臨床研究·

血小板microRNAs在先天性心臟病患兒中輸血導(dǎo)致的血小板激活作用研究

苗曉蕾，劉晉萍，崔勇麗，趙明霞，馮正義，趙 舉，龍 村，李守軍，晏馥霞，王 旭

目的本研究擬通過(guò)檢測(cè)血漿中的幾種血小板microRNAs來(lái)觀察輸血對(duì)先天性心臟病患兒血小板活性的影響，以進(jìn)一步明確輸血導(dǎo)致缺血性并發(fā)癥的相關(guān)機(jī)制，為臨床合理用血提供參考。方法2013年10月至2014年6月，選擇本院100例擬行先天性心臟病矯治術(shù)的患兒作為研究對(duì)象，輸血組和未輸血組各50名。輸血組將患兒靜脈血1．8 ml與0．5 ml同型貯存紅細(xì)胞懸液混合，30 min后檢測(cè)各項(xiàng)指標(biāo)。采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)血小板表面P－選擇素的表達(dá)水平以及血小板微粒（PMP）的含量。光密度比濁法檢測(cè)兩組患兒ADP誘導(dǎo)下血小板的聚集功能。運(yùn)用Taqman探針實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（RT－PCR）檢測(cè)血漿血小板來(lái)源的miR－223、miR－24、miR－126、miR－191的水平。進(jìn)一步比較未輸血組患兒中，非紫紺型亞組與紫紺型亞組間血小板活性、聚集功能及上述幾種microRNAs的表達(dá)有無(wú)差異。結(jié)果兩組患兒輸血前血紅蛋白（Hb）水平無(wú)組間差異（P＞0．05），輸血組加入0．5 ml貯存紅細(xì)胞懸液后，Hb較之前升高（23±6）g／L。輸血組較未輸血組，血小板表面P－選擇素的表達(dá)水平、PMP的含量以及血小板聚集功能均明顯增高（P＜0．05）。輸血組血漿血小板來(lái)源的幾種microRNAs含量較未輸血組明顯升高（P＜0．05），以miR－223的差異性最為顯著。未輸血組中，紫紺型亞組血小板激活程度較非紫紺型亞組明顯增高，血小板聚集功能明顯降低，幾種microRNAs的表達(dá)均較高（P＜0．05）。結(jié)論輸血可引起血漿中血小板來(lái)源的microRNAs表達(dá)增高，尤其是miR－223，可作為研究不同疾病狀態(tài)下血小板活性的指標(biāo)。為減少輸血相關(guān)不良反應(yīng)，臨床輸血應(yīng)嚴(yán)格掌握用血指征。

輸血；血小板激活；microRNAs；先天性心臟病

大量研究表明，輸血會(huì)引起多種不良反應(yīng)，如導(dǎo)致缺血性并發(fā)癥（心肌梗死、腦卒中等）復(fù)發(fā)及死亡率增加等。目前相關(guān)并發(fā)癥的具體機(jī)制尚未完全闡明［1］。2010年，有研究者采用體外將貯存紅細(xì)胞懸液（red blood cell，RBC）與健康志愿者新鮮全血混合模擬體內(nèi)輸血的研究發(fā)現(xiàn)，輸血可促進(jìn)血小板激活和聚集，推測(cè)可能是輸血引起缺血性并發(fā)癥的潛在機(jī)制［2－3］。最近研究表明，輸血可導(dǎo)致成年缺血性心臟病患者血小板聚集率以及血管舒張劑刺激的磷蛋白 （vasodilator－stimulated phosphoprotein，VASP）血小板活性指數(shù)（platelet reactivity index，PRI）增加，進(jìn)一步在在體水平上表明輸血可增加血小板的反應(yīng)性［4］。然而，目前尚無(wú)研究表明，本身存在血小板功能紊亂或凝血功能異常的先天性心臟病患兒輸血后是否也發(fā)生類(lèi)似改變。先天性心臟病患兒是目前臨床用血的一大群體，不合理用血的現(xiàn)象在此類(lèi)群體中更為常見(jiàn)。闡明輸血對(duì)此類(lèi)群體的影響，有利于更好的權(quán)衡輸血的利弊。

近幾年，有關(guān)循環(huán)中的microRNAs作為一種非侵襲性的重要生物標(biāo)記物用于多種疾?。ㄓ绕涫切难芗膊『桶┌Y）早期診斷和評(píng)價(jià)預(yù)后的研究引起了廣泛關(guān)注［5］。血小板作為循環(huán)血液中的重要組分，其來(lái)源的microRNAs是循環(huán)中microRNAs的重要來(lái)源。研究表明，循環(huán)中的血小板microRNAs可作為血小板激活的指標(biāo)［6］。因此，檢測(cè)循環(huán)中血小板來(lái)源的microRNAs，可研究多種疾病中血小板的激活狀態(tài)。

本研究擬在離體狀態(tài)下，將先天性心臟病患兒的新鮮全血與貯存的RBC混合模擬體內(nèi)輸血過(guò)程，通過(guò)檢測(cè)血漿中血小板來(lái)源的幾種microRNAs，觀察輸血對(duì)疾病狀態(tài)下已發(fā)生不同程度凝血功能改變的血小板激活和聚集反應(yīng)的影響，一方面進(jìn)一步闡明輸血導(dǎo)致相關(guān)缺血性并發(fā)癥的機(jī)制，方便更好的權(quán)衡輸血的利弊，為臨床合理用血提供參考。另一方面為臨床上檢測(cè)各種疾病狀態(tài)下血小板的活性提供新的指標(biāo)。

1 資料與方法

1．1 一般資料 本研究經(jīng)阜外心血管病醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，均簽署知情同意書(shū)。2013年10月至2014年6月，選擇本院100例擬行先天性心臟病矯治術(shù)的患兒作為研究對(duì)象，隨機(jī)分為輸血組和未輸血組，每組各50例。年齡均大于6個(gè)月，體重大于5 kg。術(shù)前血流動(dòng)力學(xué)穩(wěn)定，美國(guó)麻醉醫(yī)師協(xié)會(huì)（ASA）分級(jí)Ⅰ～Ⅱ級(jí)。非紫紺型患兒診斷包括房間隔缺損、室間隔缺損。紫紺型患兒診斷包括法洛四聯(lián)癥、肺動(dòng)脈閉鎖、右室雙出口、完全型肺靜脈異位引流。紫紺型患兒血紅蛋白（Hb）＞140 g／L。所有患兒均無(wú)肝腎功能損害，在過(guò)去兩周內(nèi)未輸注血液制品以及未服用抗血小板或影響凝血功能的藥物。排除急診及危重患兒。

1．2 研究方法 患兒入室麻醉后，經(jīng)頸內(nèi)靜脈置管抽取靜脈血3．6 ml分別注入兩只含3．8%枸櫞酸鈉抗凝的抗凝管內(nèi)，每管各含1．8 ml。輸血組兩管血標(biāo)本中各加入0．5 ml同型的貯存紅細(xì)胞懸液，輕輕混勻，30 min后進(jìn)行相關(guān)指標(biāo)檢測(cè)。每組各從一管血標(biāo)本中取500 μl用于檢測(cè)血小板表面P－選擇素的表達(dá)。剩余血標(biāo)本采用二次離心法（3 000 g×10 min，取上清液，然后經(jīng)13 000 g×30 min進(jìn)行二次超速離心以去除細(xì)胞碎片），取上層血漿500 μl置于－80℃冰箱內(nèi)保存，用于檢測(cè)血漿中幾種microRNAs的表達(dá)水平。另一管血標(biāo)本用于檢測(cè)血小板的聚集功能。抽取血標(biāo)本前先用空注射器回抽2 ml再取血標(biāo)本，待取樣結(jié)束后回輸給患兒以減少誤差。

1．3 檢測(cè)方法 ①流式細(xì)胞儀檢測(cè)血小板P－選擇素及血小板微粒（platelet microparticle，PMP）的表達(dá)。往450 μl全血中加入50 μl 2×10－4M的ADP混勻，室溫孵育5 min作為激活全血。加入異硫氰酸熒光素（fluorescein isothiocyanate，F(xiàn)ITC）標(biāo)記的CD－61抗體（FITC－CD61）、PE－CD62p以及同型對(duì)照單克隆抗體各20 μl于相應(yīng)測(cè)試管內(nèi)，并加入5 μl激活或未激活全血，室溫暗處孵育15～20 min進(jìn)行染色。觀察血小板表面PE－CD62p陽(yáng)性表達(dá)的百分率，即血小板P－選擇素的表達(dá)水平。ADP激活后P－選擇素表達(dá)的百分比減去靜息狀態(tài)下P－選擇素表達(dá)的百分比，即可比較兩組ΔP－選擇素的表達(dá)。②光密度比濁法檢測(cè)血小板聚集功能。按照血小板聚集儀（LBY－NJ，普利生，中國(guó)）使用說(shuō)明檢測(cè)10 μl 300 μM ADP誘導(dǎo)后60 s、180 s、300 s時(shí)聚集率以及最大聚集率。③Taqman探針RT－PCR法檢測(cè)血漿幾種microRNAs的表達(dá)。以線(xiàn)蟲(chóng)miR－39為外參。按照mirVanaTMPARISTM試劑盒操作說(shuō)明提取血漿總RNA。Taqman microRNA逆轉(zhuǎn)錄試劑盒進(jìn)行相關(guān)目的基因的轉(zhuǎn)錄。然后進(jìn)行Taqman熒光定量 PCR反應(yīng)擴(kuò)增。反應(yīng)條件為：95℃10 min；95℃ 15 s，60℃ 60 s，40個(gè)循環(huán)。基因表達(dá)變化倍數(shù)采用2－ΔCt法進(jìn)行比較，ΔCt＝Ct目的基因－Ctcel－miR－39。

1．4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 所有資料均采用SPSS 19．0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。符合正態(tài)分布的計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差±s）表示，組間比較采用兩獨(dú)立樣本的t檢驗(yàn)。不符合正態(tài)分布的計(jì)量資料用中位數(shù)和四分位間距表示，組間比較采用Mann－Whitney U檢驗(yàn)。計(jì)數(shù)資料以例數(shù)或百分比表示，比較采用χ2檢驗(yàn)。P＜0．05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2．1 一般情況 兩組患兒的性別組成、年齡、體重及診斷等一般資料均無(wú)明顯差異（P＞0．05），見(jiàn)表1。兩組患兒輸血前基礎(chǔ)Hb水平無(wú)組間差異（P＞0．05），輸血組加入0．5 ml貯存紅細(xì)胞懸液后，Hb較之前升高（23±6）g／L。

2．2 輸血對(duì)血小板激活作用的影響 表2示流式細(xì)胞儀檢測(cè)的輸血對(duì)血小板激活作用的影響。兩組患兒靜息狀態(tài)下血小板表面P－選擇素的表達(dá)以及PMP的水平無(wú)明顯差異。但經(jīng)20 μM ADP作用后，與未輸血組相比，輸血組血小板表面ΔP－選擇素的表達(dá)水平以及ΔPMP的含量明顯增高（P＜0．05）。

2．3 輸血對(duì)血小板聚集作用的影響 與未輸血組相比，輸血組患兒血小板180 s、300 s聚集率及最大聚集率均明顯增高（P＜0．05，表3）

2．4 輸血對(duì)血漿血小板來(lái)源的幾種microRNAs表達(dá)水平的影響 輸血組血漿血小板來(lái)源的幾種microRNAs含量較未輸血組明顯增高（P＜0．05，圖1），以miR－223的差異最顯著（P＝0．017）。

2．5 紫紺型與非紫紺型患兒血小板活性、功能及幾種血漿microRNAs表達(dá)的比較 將未輸血組中的非紫紺型患兒與紫紺型患兒進(jìn)一步比較，以觀察不同疾病類(lèi)型中血小板活性及功能的差異。結(jié)果顯示，紫紺型亞組血小板激活程度較非紫紺型亞組明顯增高，血小板聚集功能明顯降低，幾種microRNAs的表達(dá)水平均較高（P＜0．05）。

表1 兩組患兒一般情況比較（n＝50，±s）

表1 兩組患兒一般情況比較（n＝50，±s）

項(xiàng)目 未輸血組 輸血組 P值男／女（n） 27／23 24／26 NS年齡（mo） 16．5±8．3 17．3±8．8 NS體重（kg） 11．2±4．1 11．5±4．9 NS紫紺型（n） 27 25 NS輸血前Hb（g／L） 144±21 145±23 NS診斷名稱(chēng)室間隔缺損（n） 10 12房間隔缺損（n） 13 13法洛四聯(lián)癥（n） 10 6右室雙出口（n） 7 9完全型肺靜脈異位引流（n） 7 5肺動(dòng)脈閉鎖（n） 3 5

表2 兩組患兒血小板P－選擇素表達(dá)及PMP含量比較（n＝50，±s）

表2 兩組患兒血小板P－選擇素表達(dá)及PMP含量比較（n＝50，±s）

注：與未輸血組相比*P＜0．05。

項(xiàng)目 未輸血組 輸血組 P值P－選擇素（%） 7．5±2．3 8．3±3．5 0．211 ΔP－選擇素（%） 18．8±5．6 33．7±7．7 0．025*PMP（%） 10．7±3．6 11．9±4．4 0．107 ΔPMP（%） 19．5±6．4 29．3±7．0 0．033*

表3 兩組患兒血小板聚集功能比較（n＝50，s）

表3 兩組患兒血小板聚集功能比較（n＝50，s）

注：與未輸血組相比*P＜0．05。

項(xiàng)目 未輸血組 輸血組 P值60 s（%） 42．1±10．6 46．6±9．3 0．059 180 s（%） 49．1±12．8 55．3±10．1 0．027*300 s（%） 48．8±13．2 55．0±12．1 0．043*最大聚集率（%） 52．9±12．2 58．9±10．5 0．032*最大聚集時(shí)間（s） 211．4±49．5 203．3±62．7 0．378

表4 比較兩種類(lèi)型患兒血小板活性、功能及幾種血漿microRNAs的表達(dá)（n＝50，s）

表4 比較兩種類(lèi)型患兒血小板活性、功能及幾種血漿microRNAs的表達(dá)（n＝50，s）

項(xiàng)目 非紫紺型（n＝23） 紫紺型（n＝27） P值P－選擇素（%） 4．8±1．8 9．9±2．6 0．033*PMP（%） 8．6±3．1 12．7±3．3 0．037*血小板聚集度（%） 56．6±8．7 48．8±10．3 0．021*miR－223（Ct） 27．4126±0．3420 25．6739±0．2415 0．031*miR－24（Ct） 29．9287±0．3122 28．8432±0．2552 0．035*miR－126（Ct） 28．7586±0．4327 27．8095±0．3775 0．044*miR－191（Ct） 30．6641±0．3732 29．5978±0．2978 0．045*

圖1 兩組患兒血漿幾種特定microRNAs表達(dá)水平比較

3 討 論

以往大量研究表明，輸血可引起多種不良反應(yīng)，如溶血性輸血反應(yīng)、輸血相關(guān)急性肺損傷、輸血相關(guān)移植物抗宿主病、過(guò)敏反應(yīng)及傳播感染性疾病等。另外，輸血是導(dǎo)致缺血性事件（如急性心梗、腦卒中）復(fù)發(fā)及死亡率增加的一項(xiàng)獨(dú)立危險(xiǎn)因素。目前已闡明的輸血導(dǎo)致相關(guān)并發(fā)癥的機(jī)制主要包括以下方面：貯存紅細(xì)胞懸液中含有較低水平的一氧化氮（NO）、2，3－二磷酸甘油酸酯（2，3－diphosphoglycericacid，2，3－DPG）和較高水平的凝血酶原激活物抑制劑（PAI－1），通過(guò)促進(jìn)血管收縮或激活炎癥，導(dǎo)致組織缺氧或血栓形成等，進(jìn)而引起一系列不良反應(yīng)，但具體機(jī)制仍未完全闡明［1］。

近幾年研究發(fā)現(xiàn)，輸血可以提高血小板反應(yīng)性，促進(jìn)血小板激活和聚集，可能是輸血導(dǎo)致相關(guān)缺血性并發(fā)癥的重要機(jī)制，為臨床輸血提出了新的挑戰(zhàn)。研究采用健康志愿者新鮮全血9 ml與貯存紅細(xì)胞懸液3 ml混合模擬體內(nèi)輸血過(guò)程，30 min后分別采用ADP、膠原、花生四烯酸和腎上腺素四種激動(dòng)劑處理，發(fā)現(xiàn) ADP和膠原處理后血小板最大集聚率（Maximal platelet aggregation，MPA）和殘余聚集率（Residual platelet aggregation，RPA）均較未輸血前明顯升高。研究同時(shí)采用20 μM ADP誘導(dǎo)，發(fā)現(xiàn)輸血組與未輸血組相比，P－選擇素的表達(dá)和VASP PRI均明顯升高，鑒于后者對(duì)P2Y12受體的特異性，研究推測(cè)，輸血可能通過(guò)ADP作用于P2Y12受體途徑引起血小板激活和聚集，為輸血導(dǎo)致相關(guān)缺血性并發(fā)癥提出了新的機(jī)制［2－3］。該研究者進(jìn)一步針對(duì)成年心臟病患者進(jìn)行了在體研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，輸血組較未輸血組血小板聚集率明顯增高，但20 μM ADP處理后，兩組間P－選擇素的表達(dá)水平并無(wú)差異，表明輸血可提高血小板的反應(yīng)性［4］。目前已有的研究主要針對(duì)健康志愿者以及成年缺血性心臟病患者，對(duì)于本身可能存在凝血系統(tǒng)功能紊亂的先天性心臟病患兒，輸血能否同樣引起血小板反應(yīng)性增強(qiáng)尚未闡明。本研究結(jié)果顯示，輸血組血小板反應(yīng)性較未輸血組增高約兩倍，與上述研究一致。

MicroRNAs是一類(lèi)21～24個(gè)核苷酸組成的小分子非編碼RNA，可通過(guò)與靶基因mRNA分子的3’－非翻譯區(qū)（3’－untranslation region，UTR）互補(bǔ)匹配導(dǎo)致靶mRNA的降解或翻譯抑制，從而在多種生理病理過(guò)程中發(fā)揮重要作用。最新研究發(fā)現(xiàn)，microRNAs不僅在細(xì)胞內(nèi)發(fā)揮重要的基因調(diào)控作用，還可被多種細(xì)胞釋放到循環(huán)血液中去，并且以穩(wěn)定的形式存在。這種存在于細(xì)胞外體液（如血漿、唾液等）中的microRNAs，根據(jù)其不同種類(lèi)細(xì)胞來(lái)源的特異性，可作為多種疾病早期診斷及評(píng)價(jià)預(yù)后的重要生物標(biāo)記物。例如，在急性心肌梗死的動(dòng)物模型和患者的血漿中，由α－肌球蛋白重鏈基因內(nèi)含子編碼的miR－208a水平明顯較對(duì)照組增高［7］。心肌特異性來(lái)源的miR－208a可作為心肌梗死早期診斷的指標(biāo)，甚至和傳統(tǒng)的金標(biāo)準(zhǔn)肌鈣蛋白具有同等效用。Takotsubo心肌病的患者，在血漿肌酸磷酸激酶和肌鈣蛋白升高之前，miR－1和miR－133a的水平即出現(xiàn)明顯的升高，表明早期心肌細(xì)胞的激活或低水平的心肌損傷即可促使microRNAs的釋放［8］。另外，對(duì)腫瘤患者的研究也發(fā)現(xiàn)，循環(huán)中的microRNAs可作為腫瘤早期診斷的標(biāo)志物。例如，肝細(xì)胞癌患者的血漿中，miR－122a的水平明顯升高［9］。miR－218在子宮頸癌患者的血漿中可見(jiàn)高水平的表達(dá)［9］。血小板作為循環(huán)血液中的重要組分，其來(lái)源的microRNAs是循環(huán)中microRNAs的重要來(lái)源。血小板microRNAs最早發(fā)現(xiàn)于2008年，目前已發(fā)現(xiàn)至少兩百多種。研究發(fā)現(xiàn)，循環(huán)中的血小板microRNAs可作為血小板激活的指標(biāo)［6］。血小板激活后可釋放PMP，后者含有大量的血小板microRNAs，可能是循環(huán)中血小板microRNAs來(lái)源的重要途徑，PMP可作為microRNAs的載體使其免受核糖核酸酶（ribonuclease，RNase）的降解［6，10］。本研究選擇了幾種血小板中含量豐富的microRNAs—miR－223、miR－24、miR－126及 miR－191，觀察輸血對(duì)血漿這幾種microRNAs表達(dá)水平的影響，結(jié)果顯示，輸血可明顯提高其在血漿中的含量，且輸血組P－選擇素及PMP的含量明顯升高，表明輸血可激活血小板使其釋放PMP，進(jìn)而使血小板來(lái)源的microRNAs含量增高，與以往研究一致。提示血小板來(lái)源的microRNAs可作為血小板激活的指標(biāo)，用于研究不同疾病狀態(tài)下血小板的活性。

不同種類(lèi)的先天性心臟病患兒本身可能存在不同程度的凝血功能紊亂。紫紺型患兒可能由于血小板數(shù)量減少、壽命縮短、聚集功能受抑以及血管增生等原因存在出血傾向，也可能由于血小板激活和血管內(nèi)皮細(xì)胞功能紊亂等容易導(dǎo)致血栓形成［11－12］。而非紫紺型的患兒凝血功能紊亂程度一般較紫紺型患兒低。不同類(lèi)型的先天性心臟病患兒由于血小板激活程度不同，循環(huán)中血小板來(lái)源的microRNAs表達(dá)水平也可能不同。本結(jié)果顯示，紫紺型亞組血小板來(lái)源的microRNAs表達(dá)水平較非紫紺型亞組明顯升高，與紫紺型組血小板激活較非紫紺型組增高一致。

4 結(jié) 論

輸血可直接引起先天性心臟病患兒血小板激活，可能是臨床上輸血引起缺血性并發(fā)癥的重要機(jī)制。為減少輸血相關(guān)不良反應(yīng)，臨床輸血應(yīng)嚴(yán)格掌握用血指征。循環(huán)中的血小板microRNAs表達(dá)水平，尤其是miR－223，可作為血小板激活的指標(biāo)，用以研究多種疾病狀態(tài)下血小板的活性狀態(tài)。

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Impact of packed red blood cell transfusion on platelet activation and aggregation in pediatric patients with cardiac disease

Miao Xiao－lei，Liu Jin－ping，Cui Yong－li，Zhao Ming－xia，F(xiàn)eng Zheng－yi，Zhao Ju，Long Cun，Li Shou－jun，Yan Fu－xia，Wang Xu
Department of Cardiopulmonary bypass，F(xiàn)uwai Hospital，Chinese Academy of Medical Sciences＆Peking Union Medical College，National Center for Cardiovascular Diseases，Beiiing 100037，China

Liu Jin－ping，Email：jinpingfw＠hotmail．com

ObjectiveThe aim of this study is to observe the impact of packed RBC transfusion on platelet activation and aggregation in vitro in pediatric patients with cardiac disease and to clarity whether circulating platelet microRNAs could be serve as a new indicator of platelet activation．MethodsOne hundred infant patients were randomly divided into 2 groups，transfusion group and non－transfusion group．Each group has 50 patients．In vitro transfusions were performed by the addition of RBC obtained from transfusion packs into fresh whole blood with a ratio about 1：4（0．5 ml of RBC mixed with 1．8 ml of whole blood）．After 30 min，the expression of P－selectin and the content of platelet microparticle（PMP）were tested by flow cytometry．Light transmission aggregometry was performed to determine the platelet aggregation．The expression levels of four kinds of circulation platelet microRNAs were detected by Taqman quantitative real－time PCR．ResultsThere were no significant difference in the baseline hemoglobin level between the two groups（P＞0．05）．After RBC transfusion，the Hb level was elevated by 23±6 g／L．Compared with non－transfusion group，plateletaggregation in transfusion group was significantly increased（P＜0．05）．Platelet activation was also increased by transfusion as confirmed by the elevation of P－selectin and PMP expressions induced by 20 μM ADP．Similar results were found with the four kinds of circulating platelet microRNAs（P＜0．05）．In the non－transfusion group，the levels of four kinds of microRNAs in the cyanotic subgroup were significantly elevated than the acyanotic subgroup（P＜0．05）．ConclusionRBC transfusion increases in vitro platelet activation in pediatric patients with cardiac disease，providing a possible explanation for the increase in recurrent ischemic event and mortality reported after RBC transfusion in clinical practice．Circulation platelet microRNAs may serve as a new marker of platelet activation．

Transfusion；Platelet activation；MicroRNAs；Congenital heart disease

2015-01-07）

2015-01-15）

10．13498／j．cnki．chin．j．ecc．2015．01．01

首都臨床特色應(yīng)用研究（Z131107002213172）

100037北京，中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院，北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院，國(guó)家心血管病中心，阜外心血管病醫(yī)院體外循環(huán)科（苗曉蕾、劉晉萍、崔勇麗、趙明霞、馮正義、趙 舉、龍 村），心臟外科（李守軍、王 旭），麻醉科（晏馥霞）

劉晉萍，Email：jinpingfw＠hotmail．com