白藜蘆醇對(duì)大鼠腦缺血／再灌注損傷后星形膠質(zhì)細(xì)胞活化的影響

余萍萍，王 莉，唐凡人，周露玲，曾 立，宋曉松，陳吉祥，楊 琴

（重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科，重慶 400016）

白藜蘆醇對(duì)大鼠腦缺血／再灌注損傷后星形膠質(zhì)細(xì)胞活化的影響

余萍萍，王 莉，唐凡人，周露玲，曾 立，宋曉松，陳吉祥，楊 琴

（重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科，重慶 400016）

中國(guó)圖書分類號(hào)：R-332；R284.1；R322.81；R743.310.22；R743.310.531；R977.6

摘要：目的 研究白藜蘆醇對(duì)大鼠腦缺血／再灌注損傷后星形膠質(zhì)細(xì)胞活化的影響。方法 45只SD♂大鼠隨機(jī)分成假手術(shù)組（Sham）、對(duì)照組（Con）和白藜蘆醇組（30 mg· kg－1，Res），每組15只。于缺血／再灌注后3 h使用白藜蘆醇或溶劑治療，連用7 d。腦缺血24 h時(shí)，TTC法檢測(cè)腦梗死體積，HE染色檢測(cè)病理變化，Longa評(píng)分行神經(jīng)功能評(píng)分，免疫組織化學(xué)檢測(cè)缺血半暗帶皮質(zhì)半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）的表達(dá)。腦缺血14 d時(shí)，免疫組織化學(xué)及免疫熒光法檢測(cè)膠質(zhì)纖維酸性蛋白（glial fibrillary acidic pro-tein，GFAP）和神經(jīng)元NeuN蛋白表達(dá)。結(jié)果 白藜蘆醇治療較對(duì)照組能明顯改善神經(jīng)功能、減小梗死體積、減少神經(jīng)元脫失及凋亡，抑制星形膠質(zhì)細(xì)胞的活化與增殖（P＜0.01）。結(jié)論 白藜蘆醇治療可抑制星形膠質(zhì)細(xì)胞的異?；罨Ｗo(hù)缺血半暗帶神經(jīng)元，改善神經(jīng)功能。

關(guān)鍵詞：白藜蘆醇；腦缺血；再灌注損傷；星形膠質(zhì)細(xì)胞；神經(jīng)元；活化

網(wǎng)絡(luò)出版時(shí)間：2015－8－10 14：37 網(wǎng)絡(luò)出版地址：http：／／www．cnki．net／kcms／detail／34．1086．R．20150810．1437．010．html

缺血性腦血管病具有高發(fā)病率、高致殘率、高死亡率的特點(diǎn)，嚴(yán)重威脅患者健康甚至危及患者生命。腦缺血發(fā)生后，病理生理十分復(fù)雜，包括興奮性氨基酸毒性、氧化應(yīng)激損傷、線粒體功能障礙、鈣超載、炎癥因子介導(dǎo)等［1－2］。近年研究顯示，星形膠質(zhì)細(xì)胞異?；罨苍谀X缺血性損傷中扮演重要角色。其可影響神經(jīng)元生存，導(dǎo)致神經(jīng)元死亡，從而介導(dǎo)腦缺血后的繼發(fā)性神經(jīng)損傷［3－4］。因此，采用各種有效手段抑制腦缺血后星形膠質(zhì)細(xì)胞異?；罨瑢?duì)減輕腦缺血損傷后神經(jīng)修復(fù)具有重要意義。

白藜蘆醇（resveratrol，Res）是一種含有芪類結(jié)構(gòu)非黃酮類多酚化合物的植物抗毒素，存在于葡萄皮、花生及中藥虎杖、藜蘆、決明等72種植物中，具有抗腫瘤、抗炎、清除自由基、抗氧化、抗血小板聚集、抗動(dòng)脈粥樣硬化、雌激素樣作用等多方面藥理活性［5－6］。攝入富含白藜蘆醇的飲食能明顯減少心腦血管疾病的發(fā)生。隨后在體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)性腦卒中模型的研究中觀察到白藜蘆醇預(yù)處理具有神經(jīng)保護(hù)作用。我們前期的研究也顯示，白藜蘆醇預(yù)處理能通過抗凋亡、抗氧化等作用改善腦缺血后大鼠神經(jīng)功能、減小腦梗死體積，增強(qiáng)氧糖剝奪模型原代皮質(zhì)神經(jīng)元活力及神經(jīng)干細(xì)胞增殖等［7－11］。在腦缺血之后，給予白藜蘆醇治療，其能否通過影響星形膠質(zhì)細(xì)胞的活化，從而改善神經(jīng)功能，目前尚不清楚。

因此，本實(shí)驗(yàn)擬采用大鼠大腦中動(dòng)脈栓塞缺血／再灌注模型（middle cerebral artery ischemia／reperfu-sion，MCA I／R），在缺血后3 h給予白藜蘆醇治療，觀察白藜蘆醇對(duì)神經(jīng)功能、梗死體積、細(xì)胞凋亡及星形膠質(zhì)細(xì)胞（glial fibrillary acidic protein，GFAP）和神經(jīng)元核抗原NeuN蛋白表達(dá)的影響，為白藜蘆醇的臨床前應(yīng)用提供依據(jù)。

1　材料與方法

1．1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 SPF級(jí)♂3個(gè)月200～250 g SD大鼠，由重慶醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供。動(dòng)物合格證號(hào)：SCXK（渝）2012－0001。

1．2藥物與主要試劑 白藜蘆醇（純度度≥98%）購(gòu)于陜西慈緣生物技術(shù)有限公司，2，3，5-氯化三苯基四氮唑（TTC）購(gòu)于索萊寶公司，多克隆兔抗Caspase-3、多克隆兔抗GFAP購(gòu)于Abcam公司，單克隆鼠抗NeuN購(gòu)于Millipore公司。免疫組化試劑盒PV-9001、熒光二抗（山羊抗鼠RFITC）和山羊血清封閉液購(gòu)于北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司，DAPI和抗熒光淬滅封片液購(gòu)于碧云天生物技術(shù)公司，水合氯醛購(gòu)自成都市科龍化工試劑公司。其他試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純。

1．3大鼠大腦中動(dòng)脈缺血／再灌注模型的建立 大鼠MCA I／R模型制備采用Longa等［12］的改良線栓法。選用進(jìn)口魚線，直徑0.23～0.26 mm，長(zhǎng)4.0

cm，頭端去棱角使其光滑，在距離頭端2.0 cm處做黑色標(biāo)記，乙醇消毒后備用。大鼠術(shù)前禁食12 h，自由飲水，經(jīng)腹腔注射10%水合氯醛0.3 ml／100 g麻醉后，仰臥位固定，消毒后頸部正中切口，分離右側(cè)頸總動(dòng)脈，頸內(nèi)外動(dòng)脈，結(jié)扎頸總動(dòng)脈近心端及頸外動(dòng)脈遠(yuǎn)心端，在頸內(nèi)動(dòng)脈近端備線，遠(yuǎn)端放置動(dòng)脈夾，頸總動(dòng)脈分叉膨大處切口，松開動(dòng)脈夾，向頸內(nèi)動(dòng)脈插入魚線18～20 mm（據(jù)體重而定），結(jié)扎頸總動(dòng)脈并固定魚線，外留10 mm線頭，縫合皮膚。缺血60 min后，將線栓拉出至頸總動(dòng)脈結(jié)扎端進(jìn)行再灌注，術(shù)后用白熾燈加熱維持大鼠體溫，蘇醒后放回鼠籠，自由飲食。

1．4動(dòng)物分組及給藥 將45只SD大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組（Sham）、對(duì)照組（Con）、白藜蘆醇組（Res），每組15只。白藜蘆醇組于MCA I／R后3 h經(jīng)腹腔注射白藜蘆醇（30 mg·kg－1，無水乙醇稀釋），每天1次，連續(xù)7 d。假手術(shù)組，只分離右側(cè)頸總動(dòng)脈及頸內(nèi)外動(dòng)脈，但不插線。對(duì)照組給予MCA I／R。假手術(shù)組與對(duì)照組每日經(jīng)腹腔注射等容量的無水乙醇，每天1次，連續(xù)7 d。

1．5神經(jīng)功能缺損評(píng)分 按照Longa等［12］評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)：0分為正常，無神經(jīng)學(xué)征象；1分為動(dòng)物不能完全伸展左前肢；2分為動(dòng)物左側(cè)肢體癱瘓，行走時(shí)向左側(cè)轉(zhuǎn)圈，出現(xiàn)追尾現(xiàn)象；3分為動(dòng)物行走向左側(cè)跌倒，或動(dòng)物不能站立或動(dòng)物打滾；4分為無自發(fā)活動(dòng)，有意識(shí)障礙。神經(jīng)功能缺損評(píng)分在1～3分為模型成功，0分和4分均剔除，各組分別于術(shù)后24 h進(jìn)行行為學(xué)評(píng)分。

1．6TTC法測(cè)定腦梗死體積 各實(shí)驗(yàn)組隨機(jī)取4只大鼠，在術(shù)后24 h斷頭取腦，在－20℃冰箱速凍15 min，剔除嗅腦、低位腦干及小腦，冠狀位將其切成6等份切片，置于2%TTC溶液中，37℃避光孵育30 min，白色為梗死灶，紅色為正常腦組織，4%多聚甲醛液固定，數(shù)碼相機(jī)拍照。按顏色小心分離梗死組織及正常組織，分別固定、拍照、分離、稱重。腦梗死體積／%＝蒼白區(qū)重量／（蒼白區(qū)重量＋非蒼白區(qū)重量）×100%。

1．7HE染色檢測(cè)腦梗死區(qū)域病理形態(tài)的改變?nèi)毖?4 h，每組選取1只大鼠，麻醉、灌注取腦后，放入4%多聚甲醛固定1 d，石蠟包埋切片，常規(guī)蘇木精－伊紅染色，光學(xué)顯微鏡下觀察缺血側(cè)皮質(zhì)病理形態(tài)學(xué)改變。

1．8免疫組化技術(shù)檢測(cè) 缺血14 d，每組隨機(jī)取4只大鼠，經(jīng)麻醉、開胸，主動(dòng)脈插管，依次灌注生理鹽水250 mL和4%多聚甲醛200 mL，斷頭取腦，放入4%多聚甲醛固定1 d，常規(guī)石蠟包埋切片。按照免疫組織化學(xué)試劑盒說明書，采用石蠟切片微波修復(fù)抗原免疫組化PV二步法染色程序。4 μm厚石蠟切片于60℃烤箱烤片30 min；二甲苯Ⅰ、Ⅱ各10 min、乙醇梯度脫水各5 min；將切片浸入0.01 mol· L－1枸櫞酸鹽緩沖液，微波爐進(jìn)行熱修復(fù)15 min，室溫冷卻后用0.1 mol·L－1PBS洗滌2 min×3次；3%H2O2去離子水孵育10 min，以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶；PBS洗滌，滴加稀釋的一抗Caspase-3（1∶100）、GFAP（1∶100），置于濕盒中，4℃冰箱過夜；PBS洗滌2 min×3次；滴加試劑1（polymer Help-er），37℃孵育20 min，PBS洗滌2 min×3次；滴加試劑2（poly-HRP anti-rabbit IgG），37℃孵育20 min，PBS洗滌2 min×3；應(yīng)用DAB溶液顯色，自來水充分沖洗、復(fù)染、脫水、透明、中性樹膠封片。顯微鏡下觀察Caspase-3和GFAP的陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)，每組選取8張（每只大鼠選取2張）進(jìn)行計(jì)數(shù)統(tǒng)計(jì)。

1．9免疫熒光技術(shù)檢測(cè) 缺血14 d，每組隨機(jī)取4只大鼠，經(jīng)麻醉、開胸，主動(dòng)脈插管，灌流取腦，4%多聚甲醛固定24 h，蔗糖梯度脫水沉底后，制成10 μm厚的腦組織冰凍切片，將切片晾干后，用丙酮室溫固定30 min，PBS洗3次；用0.2%Triton100破膜20 min，37℃孵育，PBS洗3次；山羊血清封閉2 h，去除多余血清，不洗；加一抗（NeuN 1∶100），4℃過夜；PBS洗3次，加熒光二抗（抗體工作濃度1∶100），37℃避光孵育1.5 h；PBS漂洗3次DAPI染核5 min；用PBS漂洗3次，用熒光淬滅劑封片，共聚焦下觀察照相。激光共聚焦下觀察NeuN的陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)，每組選取8張（每只大鼠選取2張）進(jìn)行計(jì)數(shù)統(tǒng)計(jì)。

1．10統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 應(yīng)用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以±s表示。多組數(shù)據(jù)的比較采用單因素方差分析，兩組間數(shù)據(jù)的比較采用LSD檢驗(yàn)。

2　結(jié)果

2．1動(dòng)物的存活情況 在45只實(shí)驗(yàn)大鼠中，對(duì)照組和白藜蘆醇組各有1只神經(jīng)功能評(píng)分為4，被剔除。模型組有1只在MCA I／R 24 h時(shí)死亡，解剖可見顱底大量血凝塊，考慮血管破裂導(dǎo)致蛛網(wǎng)膜下腔出血。成活42只。

2．2白藜蘆醇對(duì)MCA I／R后24 h大鼠神經(jīng)功能的影響 神經(jīng)功能評(píng)分顯示，假手術(shù)組無神經(jīng)功能缺損，對(duì)照組和白藜蘆醇組均出現(xiàn)了明顯的神經(jīng)行為障礙，但白藜蘆醇組較對(duì)照組癥狀得到明顯改善，神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分明顯降低（P＜0.01，F(xiàn)ig 1）。

2．3白藜蘆醇對(duì)MCA I／R后24 h大鼠腦梗死體積的影響 TTC染色顯示假手術(shù)組無梗死灶，對(duì)照組和白藜蘆醇組缺血側(cè)腦組織有明顯的梗死灶，但白藜蘆醇組梗死灶體積較對(duì)照組明顯縮?。≒＜0.01）（Fig 2）。

Fig 1 Effects of resveratrol on neurological function after 24h for MCAI／R in rats

Fig 2 Effects of resveratrol on the cerebral infarction volume after 24h for MCA I／R in rats

2．4白藜蘆醇對(duì)MCA I／R后24 h腦缺血大鼠皮質(zhì)病理學(xué)和Caspase-3蛋白表達(dá)的影響 HE染色顯示，假手術(shù)組（Fig 3A）大鼠皮質(zhì)神經(jīng)元密集，細(xì)胞質(zhì)豐富，細(xì)胞核居中染色清楚，形態(tài)正常，組織結(jié)構(gòu)完整。在大鼠腦缺血24 h，對(duì)照組（Fig 3B）大鼠皮質(zhì)神經(jīng)元排列散亂，細(xì)胞間質(zhì)疏松，細(xì)胞膜皺縮，細(xì)胞核固縮或碎裂；白藜蘆醇組（Fig 3C）神經(jīng)細(xì)胞核固縮減輕，多數(shù)細(xì)胞核仁清晰，結(jié)構(gòu)較完整。

在大鼠腦缺血24 h，免疫組化顯示對(duì)照組（Fig 3E）和白藜蘆醇組（Fig 3F）皮質(zhì)Caspase-3陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)均明顯多于假手術(shù)組（Fig 3D，P＜0.01），但白藜蘆醇組較對(duì)照組Caspase-3陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)明顯減少（P ＜0.01，F(xiàn)ig 3E和F）。

2．5白藜蘆醇對(duì)MCA I／R后14 d腦缺血大鼠皮質(zhì)GFAP和NeuN蛋白表達(dá)的影響 在大鼠腦缺血14 d，免疫組化顯示對(duì)照組（Fig 4 B）和白藜蘆醇組（Fig 4C）皮質(zhì)GFAP陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)均明顯多于假手術(shù)組（Fig 4A），且細(xì)胞體積增大，突起增大、增多，GFAP陽(yáng)性強(qiáng)度更強(qiáng)（P＜0.01），但白藜蘆醇組較對(duì)照組明顯減少（P＜0.01，F(xiàn)ig 4）。

免疫熒光顯示對(duì)照組（Fig 4E）和白藜蘆醇組（Fig 4F）皮質(zhì)NeuN陽(yáng)性細(xì)胞明顯少于假手術(shù)組（Fig 4 D，P＜0.01），但白藜蘆醇組NeuN表達(dá)較對(duì)照組明顯增加（P＜0.01，F(xiàn)ig 4）。

3　討論

白藜蘆醇是一天然的植物抗毒素。流行病學(xué)資料顯示，地中海地區(qū)飲食習(xí)慣能明顯減少心腦血管疾病的發(fā)生率，其原因是食物中含豐富的白藜蘆醇。隨后的研究也顯示白藜蘆醇預(yù)處理能減輕缺血性腦損害，這表明白藜蘆醇可用于腦血管疾病的預(yù)防。在腦缺血發(fā)生之后，白藜蘆醇有治療作用嗎？研究證實(shí)，在腦缺血后24 h內(nèi)給予白藜蘆醇也能通過抗氧化、抗炎、抗凋亡等途徑保護(hù)腦組織，減小腦梗死體積，改善神經(jīng)功能［13－14］。在本研究中，我們于大鼠腦缺血后3 h給予白藜蘆醇治療，結(jié)果顯示白藜蘆醇能明顯改善神經(jīng)功能、減小腦梗死體積、減少神經(jīng)元脫失。我們的研究結(jié)果結(jié)合以往的文獻(xiàn)均表明，白藜蘆醇對(duì)缺血性腦損害有治療作用。

缺血性腦損傷可導(dǎo)致神經(jīng)組織和神經(jīng)細(xì)胞嚴(yán)重受損，其病理變化包括神經(jīng)元和膠質(zhì)細(xì)胞的變化。以往關(guān)注的焦點(diǎn)是采取各種措施減輕腦缺血對(duì)神經(jīng)元的損傷。近年來，星形膠質(zhì)細(xì)胞對(duì)腦缺血后神經(jīng)功能恢復(fù)積極或消極的影響，逐漸被神經(jīng)科學(xué)研究者關(guān)注。星形膠質(zhì)細(xì)胞占神經(jīng)細(xì)胞的50%～60%，具有維持神經(jīng)元的正常功能、神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)外離子濃度、pH值平衡，調(diào)控腦血流量，調(diào)節(jié)體液平衡，參與新陳代謝及突觸可塑性，構(gòu)成血腦屏障等多種生物學(xué)功能［15］。大量研究表明，星形膠質(zhì)細(xì)胞不再局限于對(duì)腦保護(hù)及營(yíng)養(yǎng)支持作用。其對(duì)缺血缺氧及酸中毒較敏感［16］。在腦缺血缺氧損傷早期，星形膠質(zhì)細(xì)胞引起炎癥反應(yīng)，促進(jìn)谷氨酸、S-100β釋放，激活水通道蛋白4，上調(diào)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子、基質(zhì)金屬蛋白

酶的表達(dá)，釋放一氧化氮，從而導(dǎo)致腦水腫，損害神經(jīng)元，對(duì)損傷后恢復(fù)造成不利影響；在腦缺血損傷晚期，星形膠質(zhì)細(xì)胞可異常活化及形成膠質(zhì)疤痕、以及釋放炎癥因子和神經(jīng)毒性分子，從而加重神經(jīng)元對(duì)損傷因素的易損性、敏感性和軸突再生障礙，阻止神經(jīng)功能的恢復(fù)，最終引起神經(jīng)細(xì)胞發(fā)生繼發(fā)性損傷［17］。因此，尋找有效的手段抑制星形膠質(zhì)細(xì)胞過度活化及膠質(zhì)疤痕形成，有利于改善腦缺血后的神經(jīng)功能，具有重大的臨床意義。

Fig 3 Effects of resveratrol on pathological change（HE staining）and protein expression of caspase-3（immunohistochemistry）of cortex after 24h for MCA I／R in rats（×400）

Fig 4 Effects of resveratrol on protein expression of GFAP（immunohistochemistry）and NeuN（immunofluorescence，RFITC，DAPI）after 14d for MCA I／R in rats（×400）

GFAP是星形膠質(zhì)細(xì)胞的特異性標(biāo)志蛋白。NeuN是一種表達(dá)在成熟神經(jīng)元的特異性蛋白，廣泛用于研究和鑒別成熟神經(jīng)元。Catrinel等在大鼠全腦缺血10 min的腦缺血模型中，于7 d時(shí)觀察到海馬CA1區(qū)GFAP陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)明顯增多，細(xì)胞形態(tài)增大腫脹，突起增多增粗，而神經(jīng)元數(shù)量減少約50%。給予白藜蘆醇預(yù)處理21 d再全腦缺血10 min，于7 d時(shí)海馬CA1區(qū)GFAP陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)明顯低于對(duì)照組，而神經(jīng)元數(shù)量明顯多于對(duì)照組，表明腦缺血引起了星形膠質(zhì)細(xì)胞的活化，損害了神經(jīng)元，而白藜蘆醇預(yù)處理能抑制星形膠質(zhì)細(xì)胞的活化，減少神經(jīng)元的脫失［18］。我們?cè)诖笫驧CA I／R后14 d也觀察到模型組缺血半暗帶皮質(zhì)區(qū)GFAP的表達(dá)明顯增強(qiáng)，GFAP陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)明顯增加，且細(xì)胞體積增大，突起多而粗；而NeuN陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)明顯減少。在MCA I／R后3 h給予白藜蘆醇治療，24 h時(shí)缺血半暗帶皮質(zhì)區(qū)caspase-3陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)明顯低于對(duì)照組，14 d時(shí)缺血半暗帶皮質(zhì)區(qū)GFAP的表達(dá)及GFAP陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)明顯低于對(duì)照組，且細(xì)胞體積較對(duì)照組小，突起沒有對(duì)照組多而粗；而NeuN陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)明顯較對(duì)照組多。也表明腦缺血損傷導(dǎo)致了細(xì)胞凋亡，星形膠質(zhì)細(xì)胞的異?；罨驮鲋?，破壞了神經(jīng)元，而白藜蘆醇治療能減少細(xì)胞凋亡，抑制星形膠質(zhì)細(xì)胞的活化

和增殖，減少神經(jīng)元的脫失。文獻(xiàn)及我們的研究表明腦缺血前預(yù)防性或腦缺血后治療性使用白藜蘆醇均能減少細(xì)胞凋亡，抑制星形膠質(zhì)細(xì)胞的活化和增殖，減少神經(jīng)元的脫失。

我們的前期研究表明白藜蘆醇預(yù)處理有神經(jīng)保護(hù)作用。目前我們?cè)谀X缺血后3 h給予白藜蘆醇治療也顯示能減少梗死體積，減少細(xì)胞凋亡，抑制星形膠質(zhì)細(xì)胞的活化和增殖，減少神經(jīng)元的脫失，從而促進(jìn)神經(jīng)功能恢復(fù)。這是對(duì)前期工作的延伸。白藜蘆醇抑制星形膠質(zhì)細(xì)胞的活化和增殖的機(jī)制如何，則有待我們進(jìn)一步闡明。

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Effects of resveratrol on astrocyte activation after cerebral ischemia／reperfusion injury in rats

YU Ping-ping，WANG Li，TANG Fan-ren，ZHOU Lu-ling，ZENG Li，
SONG Xiao-song，CHEN Ji-xiang，YANG Qin （Dept of Neurology，the First Affiliated Hospital of Chongqing Medical University，Chongqing 400016，China）

Abstract：Aim To investigate the effect of resveratrol on astrocyte activation after cerebral ischemia／reperfusion injury in rats．Methods 45 male Sprague-Dawley rats were divided into sham，control and resveratrol groups，15 rats in each group．Resveratrol or solvent was intra- peritoneally perfused into the rats for 7 consecutive days after 3h for MCA I／R．Cerebral infarction volume with TTC，neurological function score with Longa score，and pathological change with HE staining，the protein expressions of Caspase-3 with immunohistochemistry

at 24h after MCA I／R were examined．The protein ex-pressions of GFAP and NeuN in penumbra were detec-ted with immunohistochemistry and immunofluores-cence at 14d after MCA I／R．Results Resveratrol treatment significantly improved the neurological func-tion score，decreased the infarct volume，reduced neu-ron loss，and inhibited the activation and proliferation of astrocytes，compared with the control group．Con-clusion Resveratrol can inhibit the excessive activa-tion of astrocytes，protect neurons in penumbra and im-prove neurological function．

Key words：resveratrol；cerebral ischemia；reperfusion injury；astrocyte；neuron；activation

作者簡(jiǎn)介：余萍萍（1988－），女，碩士生，E-mail：465430809＠qq．com；楊 琴（1970－），女，博士，教授，研究方向：腦血管疾病與干細(xì)胞移殖，E-mail：xyqh200＠126．com

基金項(xiàng)目：國(guó)家自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目（No 81071119）；衛(wèi)計(jì)委國(guó)家臨床重點(diǎn)專科建設(shè)項(xiàng)目資金資助（衛(wèi)辦醫(yī)政函［2012］649號(hào)）

收稿日期：2015－05－12，修回日期：2015－06－21

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

文章編號(hào)：1001－1978（2015）09－1228－06

doi：10．3969／j．issn．1001－1978．2015．09．010