DC-CIK共培細(xì)胞聯(lián)合其他方法治療肝癌的研究進(jìn)展

羅 濤，許仲平，吳傳有，龔建平

(1.重慶市渝北區(qū)中醫(yī)院普外科，重慶 401120；2.重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院肝膽外科，重慶 400010)

DC-CIK共培細(xì)胞聯(lián)合其他方法治療肝癌的研究進(jìn)展

羅 濤1，許仲平2，吳傳有2，龔建平2

(1.重慶市渝北區(qū)中醫(yī)院普外科，重慶 401120；2.重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院肝膽外科，重慶 400010)

肝癌是人類健康的主要威脅之一，特別是在我國(guó)慢性乙肝發(fā)病率非常高，因慢性乙肝最終發(fā)展成為原發(fā)性肝癌的患者數(shù)量也居全球之首。細(xì)胞免疫療法近年來成為腫瘤治療研究的熱點(diǎn)，其中尤以DC-CIK細(xì)胞最為突出，將DC和CIK細(xì)胞共培養(yǎng)用于各種惡性腫瘤的臨床治療中均取得了不俗的成績(jī)。目前國(guó)內(nèi)臨床醫(yī)生也將DC-CIK細(xì)胞治療與目前存在的各種治療方法相結(jié)合，用于治療原發(fā)性肝癌，取得了較好的療效。本文就DC-CIK聯(lián)合其他方法治療原發(fā)性肝癌做一綜述。

肝腫瘤；細(xì)胞免疫療法；DC-CIK細(xì)胞

肝癌是人類健康的主要威脅之一，特別是在我國(guó)慢性乙肝發(fā)病率非常高，因慢性乙肝最終發(fā)展成為原發(fā)性肝癌的患者數(shù)量也居全球之首。2008年全球約748 300例新發(fā)肝癌病例和695 900例肝癌死亡病例[1]，其中半數(shù)死亡病例發(fā)生在中國(guó)?；谥袊?guó)肝癌大國(guó)的國(guó)情，國(guó)內(nèi)學(xué)者投入了大量的精力研究肝癌的發(fā)病機(jī)理及治療方法的革新。到目前為止，肝癌切除術(shù)仍然是治療原發(fā)性肝癌的最佳治療方式，但其他如射頻消融、肝動(dòng)脈栓塞化療、碘粒子放射治療、細(xì)胞免疫治療等治療方法也得到了長(zhǎng)足的發(fā)展。為取得更好的療效，臨床上探索將各種治療方式相結(jié)合的方式治療肝癌，形成了一些新的治療模式。隨著細(xì)胞免疫療法在各種惡性腫瘤的治療中顯示出了突出的優(yōu)勢(shì)和巨大的發(fā)展?jié)摿?，近年來成為了腫瘤治療研究的熱點(diǎn)，其中尤以DC-CIK細(xì)胞最為突出。DC細(xì)胞是最強(qiáng)的抗原遞呈細(xì)胞，而CIK細(xì)胞是對(duì)腫瘤細(xì)胞有非特異性高度殺傷能力的一種異質(zhì)細(xì)胞。將DC和CIK細(xì)胞共培養(yǎng)用于各種惡性腫瘤的臨床治療中均取得了不俗的成績(jī)。目前國(guó)內(nèi)臨床醫(yī)生也將DC-CIK細(xì)胞治療與目前存在的各種治療方法相結(jié)合，用于治療原發(fā)性肝癌，取得了較好的療效。本文就DC-CIK聯(lián)合其他方法治療原發(fā)性肝癌做一綜述。

1 DC-CIK細(xì)胞抗腫瘤的機(jī)理

CIK細(xì)胞是由多種細(xì)胞因子誘導(dǎo)產(chǎn)生的異質(zhì)細(xì)胞群，在肝臟中分布最多，約占肝內(nèi)T細(xì)胞的(23.6±4.1)%，而在外周血T細(xì)胞中所占比例<5%。在體外用多種細(xì)胞因子如干擾素γ、IL-1、IL-2、CD3單抗共培養(yǎng)14～21 d后CIK細(xì)胞比例可由0.10%～0.13%升高到19.0%～20.5%。CIK經(jīng)體外誘導(dǎo)后高表達(dá)CD3、CD28、CD54、CD11a、CD56、HLA-DR等，其中CD3+、CD56+亞群是殺瘤活性最高的細(xì)胞群。目前研究[2]認(rèn)為CIK的殺瘤機(jī)理主要包括：(1)大部分CIK的非MHC限制性細(xì)胞毒性作用是由NKG2D介導(dǎo)的，最終通過穿孔素與顆粒酶的作用造成細(xì)胞溶解；(2)通過不同的渠道識(shí)別腫瘤細(xì)胞，釋放顆粒酶或穿孔素，導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞裂解；(3)分泌釋放IL-2、IL-6、TNF-α和粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)細(xì)胞因子直接抑制腫瘤細(xì)胞，并通過對(duì)機(jī)體的免疫反應(yīng)進(jìn)行調(diào)節(jié)而間接殺死癌細(xì)胞；(4)CIK在培養(yǎng)過程中表達(dá)FasL(Ⅱ型跨膜糖蛋白)通過與腫瘤細(xì)胞膜表達(dá)的Fas(Ⅰ型跨膜糖蛋白)結(jié)合，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡。雖然CIK細(xì)胞具有廣譜的腫瘤殺傷作用，但不具有特異性識(shí)別功能[3]，故其殺瘤效果差強(qiáng)人意。Marten等[4]發(fā)現(xiàn)將DC細(xì)胞與CIK共培養(yǎng)可以相互促進(jìn)彼此的成熟，主要機(jī)理是DC細(xì)胞分泌的IL-2、IL-12、IFN-7等可以促進(jìn)CIK細(xì)胞成熟，使CIK細(xì)胞中的CD3+、CD8+、CD56+亞群不同程度增高。另外，DC、CIK共培養(yǎng)還可以使CIK細(xì)胞中的免疫抑制T細(xì)胞明顯降低，從而增強(qiáng)CIK的殺瘤效果。而CIK細(xì)胞也能增強(qiáng)DC細(xì)胞和共刺激分子遞呈抗原的特異性。

2 DC-CIK聯(lián)合手術(shù)治療

對(duì)于有手術(shù)指征的肝癌患者來說，肝切除術(shù)仍然是肝癌的最佳治療手段。中山大學(xué)腫瘤醫(yī)院902例肝癌肝切除術(shù)后5年生存率37.2%，<5 cm的肝癌術(shù)后5年生存率達(dá)到了53.5%。但隨著人們物質(zhì)生活水平的提高以及對(duì)惡性腫瘤的認(rèn)識(shí)不斷加深，現(xiàn)代的人們對(duì)肝癌的治療效果要求越來越高。影響肝癌患者生存時(shí)間及質(zhì)量的主要因素為肝癌細(xì)胞的復(fù)發(fā)與轉(zhuǎn)移，而肝癌的復(fù)發(fā)與轉(zhuǎn)移可能與肝內(nèi)存在微小轉(zhuǎn)移灶或多中心的原發(fā)微小病灶有關(guān)，也與術(shù)后機(jī)體免疫力受損有所聯(lián)系。王鄭[5]對(duì)原發(fā)性肝癌患者行肝癌切除術(shù)聯(lián)合自體DC-CIK細(xì)胞回輸治療(實(shí)驗(yàn)組)，與同期單獨(dú)行肝癌切除術(shù)的原發(fā)性肝癌患者(對(duì)照組)作對(duì)比，隨訪3年，結(jié)果提示實(shí)驗(yàn)組總體有效率為85.5%，明顯高于對(duì)照組的40.8%(P<0.01)；實(shí)驗(yàn)組1年、2年、3年生存率也明顯高于對(duì)照組(P<0.01)。而馬洪波等[6]的研究提示肝癌切除術(shù)聯(lián)合DC-CIK治療僅能改善患者術(shù)后生活質(zhì)量，提高機(jī)體免疫功能，但在延緩患者術(shù)后復(fù)發(fā)時(shí)間及提高生存率方面并無優(yōu)勢(shì)，但這可能與作者隨訪時(shí)間不夠長(zhǎng)有關(guān)(此組患者僅隨訪1年)。目前仍缺乏這方面的大樣本隨機(jī)試驗(yàn)及長(zhǎng)期隨訪，故暫不能得出一致的結(jié)論，需進(jìn)一步完善臨床研究。

3 DC-CIK聯(lián)合索拉菲尼

索拉菲尼是第一個(gè)用于肝癌治療的分子靶向藥物，已廣泛用于肝癌的臨床治療并獲得了良好的療效。李卿、張丹等[7-8]的研究發(fā)現(xiàn)DC-CIK共培養(yǎng)細(xì)胞聯(lián)合索拉菲尼對(duì)人肝癌BEL-7402細(xì)胞的抑制作用遠(yuǎn)大于兩單獨(dú)用藥組，且存在時(shí)間-劑量依賴效應(yīng)。用factorial analysisi分析顯示兩種藥物聯(lián)用具有交互效應(yīng)(P<0.05)，且為協(xié)同作用。DC-CIK共培養(yǎng)細(xì)胞與索拉菲尼聯(lián)用時(shí)的質(zhì)量分?jǐn)?shù)及效靶比將會(huì)影響抑癌效應(yīng)，當(dāng)索拉菲尼20.8 μmol/L聯(lián)合DC-CIK效靶比40∶1時(shí)對(duì)肝癌細(xì)胞殺傷效率最高，是索拉菲尼組的2.1倍和DC-CIK細(xì)胞組的1.8倍(P<0.01)[7]。該結(jié)果為分子靶向治療聯(lián)合生物免疫治療原發(fā)性肝癌提供了理論依據(jù)。但目前對(duì)兩者聯(lián)合應(yīng)用治療肝癌的作用機(jī)理還不明確，仍需大量的基礎(chǔ)研究進(jìn)行探索。分子靶向藥物因其良好的機(jī)體耐受性而被廣大患者接受[9]，但也面臨著耐藥性的問題[10]。而過繼性細(xì)胞免疫治療在不同個(gè)體中療效相差甚大，NCI統(tǒng)計(jì)顯示其有效率為7%～40%[11]。聯(lián)合應(yīng)用能夠優(yōu)勢(shì)互補(bǔ)，為肝癌的無創(chuàng)治療拉開了序幕，具有巨大的應(yīng)用前景。

4 DC-CIK聯(lián)合肝動(dòng)脈栓塞化療(TACE)

單純的TACE治療可能因?yàn)槟[瘤動(dòng)脈栓塞不完全或者側(cè)支循環(huán)的建立和潛在的交通支影響栓塞治療效果。而且研究表明肝癌患者經(jīng)過TACE治療術(shù)后免疫功能下降，可能引起殘余腫瘤細(xì)胞的迅速擴(kuò)散，導(dǎo)致腫瘤的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移。DC-CIK細(xì)胞免疫治療可以提高肝癌患者的免疫功能，改善機(jī)體免疫狀態(tài)，并能殺滅微小肝癌病灶，從而彌補(bǔ)TACE的不足。Huang等[12]研究了85例TACE+RFA聯(lián)合CIK治療原發(fā)性肝癌的臨床療效，對(duì)照組89例肝癌患者僅接受TACE+RFA治療，結(jié)果顯示實(shí)驗(yàn)組疾病控制率為95.3%，而對(duì)照組為88.8%，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.113)。但Kaplan-Meier生存分析顯示實(shí)驗(yàn)組中位生存時(shí)間明顯長(zhǎng)于對(duì)照組，分別為56個(gè)月和31個(gè)月，差異有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.001)；實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組無進(jìn)展生存期分別為17個(gè)月和10個(gè)月，差異有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.001)。郝明志等[13]對(duì)146例無手術(shù)切除指征的原發(fā)性肝癌分別予以單純TACE或TACE聯(lián)合DC-CIK治療，發(fā)現(xiàn)聯(lián)合組和單純TACE組半年、1年、2年無進(jìn)展生存率分別為72.2%、40.4%、25.3%和34.8%、7.7%、2.6%；聯(lián)合組和單純TACE組半年、1年、2年總生存率分別為90.3%、71.9%、62.4%和74.6%、42.8%、18.8%。故作者得出結(jié)論：聯(lián)合DC-CIK細(xì)胞免疫治療能明顯提高TACE的治療效果，能延長(zhǎng)肝癌患者的無進(jìn)展生存期和總生存期。尤振宇等[14]的研究卻顯示DC-CIK細(xì)胞免疫治療聯(lián)合TACE對(duì)比單純TACE治療并不能提高肝癌患者的疾病控制率和有效率，但實(shí)驗(yàn)組體質(zhì)量增加率、卡勞夫斯基評(píng)分、AFP下降及疼痛緩解較對(duì)照組均有明顯改善。提示DC-CIK細(xì)胞免疫治療并不能提高TACE治療術(shù)后患者的短期療效，但可以提高患者的生存質(zhì)量。郭偉偉等[15]認(rèn)為DC-CIK細(xì)胞免疫治療聯(lián)合TACE術(shù)相比單純TACE術(shù)，有助于延長(zhǎng)患者的無進(jìn)展生存期，但在總生存期方面2組無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

5 DC-CIK聯(lián)合消融手術(shù)

射頻或微波消融是目前臨床上治療肝癌的最常用的兩種消融方式，原理為通過不同的方式使局部組織產(chǎn)熱，使細(xì)胞中的蛋白質(zhì)在高熱下凝固壞死，從而達(dá)到殺滅腫瘤的目的。消融手術(shù)治療后大大降低了腫瘤負(fù)荷，但因?yàn)橄诜秶邢耷覠o法精確控制消融范圍，術(shù)后可能殘留衛(wèi)星病灶或消融不徹底，導(dǎo)致復(fù)發(fā)。Chen等[16]的研究發(fā)現(xiàn)微波消融治療可以使消融區(qū)域免疫反應(yīng)在短時(shí)間內(nèi)增強(qiáng)，但還不足以徹底殺死殘余的微小殘余病灶，而聯(lián)合DC-CIK細(xì)胞免疫治療可進(jìn)一步加強(qiáng)并延長(zhǎng)全身免疫反應(yīng)的強(qiáng)度和時(shí)間，使腫瘤細(xì)胞殺滅更為徹底，提高療效。Cui等[17]研究發(fā)現(xiàn)射頻消融術(shù)后聯(lián)合細(xì)胞免疫治療可以提高患者的無進(jìn)展生存期，且與細(xì)胞免疫治療療程完成次數(shù)相關(guān)聯(lián)。所以作者認(rèn)為聯(lián)合細(xì)胞免疫治療對(duì)延緩肝癌患者射頻治療后復(fù)發(fā)時(shí)間有一定的幫助。Wang等[18]把76例原發(fā)性肝癌患者分為TACE+RFA組和CIK細(xì)胞聯(lián)合TACE+RFA組，隨訪10～88個(gè)月(平均44個(gè)月)。發(fā)現(xiàn)聯(lián)合組和對(duì)照組1年、3年、5年無瘤生存率分別為79%、26%、16%和71%、21%、8%，差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.001)；聯(lián)合組和對(duì)照組1年、3年、5年總生存率分別為92%、53%、26%和89%、42%、24%，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。提示CIK細(xì)胞免疫治療可能對(duì)提高無瘤生存時(shí)間有幫助，但對(duì)長(zhǎng)期生存率的影響不明顯。

6 DC-CIK聯(lián)合HIFU

目前HIFU主要用于肝癌的輔助治療，因其無創(chuàng)性和可重復(fù)性而受到臨床醫(yī)生的歡迎。研究發(fā)現(xiàn)[19-21]HIFU治療后腫瘤組織凝固性壞死可致肝內(nèi)組織抗原表位增多，免疫原性增強(qiáng)，還能打破體內(nèi)腫瘤抑制環(huán)境，增加免疫殺傷的效靶比，為細(xì)胞免疫治療提供一個(gè)良好的內(nèi)環(huán)境?？梢?，HIFU和DC-CIK細(xì)胞免疫治療存在良好的協(xié)同治療作用，為兩者的聯(lián)合應(yīng)用提供了理論依據(jù)。陳健等[22]對(duì)比研究HIFU加DC-CIK和單純HIFU治療晚期原發(fā)性肝癌的臨床療效，結(jié)果提示2組患者1年生存率、2年生存率和中位生存時(shí)間分別為68%、40%、20.72±6.35個(gè)月和48%、16%、12.65±5.17個(gè)月，聯(lián)合組優(yōu)于單純組(P<0.05)。細(xì)胞免疫治療和HIFU治療均為肝癌的無創(chuàng)治療方法，比起無創(chuàng)的放化療療效更加確切，且對(duì)患者機(jī)體打擊更小，有更大的應(yīng)用前景。目前相同的研究國(guó)內(nèi)較少，還需大量的臨床研究提供更多的證據(jù)。

7 結(jié)語(yǔ)與展望

肝癌的生物治療是繼手術(shù)、放療、化療后的第四種治療模式，包括免疫治療和基因治療。免疫治療具有低傷害、相對(duì)高效，且對(duì)殺滅微小病灶具有獨(dú)到的作用而被研究者廣泛關(guān)注。在肝癌治療中DC-CIK細(xì)胞治療是應(yīng)用最為廣泛、研究最為深入的免疫治療方法，在十多年的臨床應(yīng)用中優(yōu)勢(shì)逐漸顯現(xiàn)，受到越來越多的重視。手術(shù)切除、消融治療、TACE能夠處理大部分肉眼可見的肝癌組織，在肝癌治療中有不可替代的作用。但肉眼無法分辨的微小病灶的殘余、復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移仍然是目前肝癌治療的瓶頸，DC-CIK細(xì)胞免疫治療的出現(xiàn)恰好彌補(bǔ)了這一缺陷，為肝癌的根治提供了一種可能性。目前的研究顯示DC-CIK聯(lián)合各種傳統(tǒng)的方法治療肝癌取得了良好的臨床療效，進(jìn)一步提高了肝癌患者的生存時(shí)間和生存質(zhì)量。

隨著細(xì)胞免疫學(xué)和分子靶向藥物研究的進(jìn)一步深入及突破，分子靶向藥物與過繼性細(xì)胞免疫治療單獨(dú)或聯(lián)合應(yīng)用必將在肝癌的治療領(lǐng)域中掀起一股新的浪潮。甚至在未來DC-CIK細(xì)胞免疫治療聯(lián)合分子靶向藥物可能成為原發(fā)性肝癌的最主要治療方式之一。

肝癌的治療經(jīng)過了一次從開腹手術(shù)到微創(chuàng)治療的技術(shù)飛躍，為廣大肝癌患者減輕了很多痛苦，但在生存時(shí)間上并沒有取得突破。而細(xì)胞免疫治療因其不同于傳統(tǒng)治療方法的理論基礎(chǔ)可能會(huì)在療效上取得重大突破，而免疫治療的發(fā)展必將引起下一場(chǎng)技術(shù)革命，為廣大肝癌患者帶來曙光。

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龔建平，gongjianping11@126.com

R735.7

A

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http://www.cnki.net/kcms/detail/51.1688.R.20150507.1716.004.html

2014-06-24)