胃癌組織環(huán)指蛋白43表達(dá)變化及意義

于藝，趙瀅，劉嚴(yán)峰(大連醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院，遼寧大連60;中國醫(yī)科大學(xué)附屬盛京醫(yī)院)

胃癌組織環(huán)指蛋白43表達(dá)變化及意義

于藝1，趙瀅2，劉嚴(yán)峰1
(1大連醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院，遼寧大連116011;2中國醫(yī)科大學(xué)附屬盛京醫(yī)院)

摘要:目的探討環(huán)指蛋白43(RNF43)在胃癌發(fā)生、發(fā)展中的作用機(jī)制。方法取180例胃癌患者手術(shù)切除腫瘤組織及其癌旁組織標(biāo)本。采用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)RNF43表達(dá)，分析RNF43表達(dá)水平與胃癌臨床病理特征及患者預(yù)后的關(guān)系。結(jié)果胃癌組織RNF43高表達(dá)率為46.1%(83/180)，癌旁組織為28.6%(51/180)，兩者比較P＜0.05。發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及TNM分期高(Ⅲ+Ⅳ)的胃癌患者RNF43高表達(dá)率高(P均＜0.01)。RNF43蛋白高表達(dá)及低表達(dá)者總生存期分別為44.7個(gè)月(95%CI:39.5～49.9個(gè)月)、61.1個(gè)月(95%CI:55.6～66.6個(gè)月)，兩者比較P＜0.01。結(jié)論胃癌組織RNF43高表達(dá)可能是胃癌侵襲、轉(zhuǎn)移及不良預(yù)后的原因之一。

關(guān)鍵詞:胃腫瘤;環(huán)指蛋白43;侵襲;轉(zhuǎn)移;生存分析

Expression changes and significance of RNF43 in gastric cancer tissues

YU Yi，ZHAO Ying，LIU Yan-feng
(The First Affiliated Hospital ofdalianmedical University，Dalian 116011，China)

Abstract:Objective To investigate the effect of ring finger proteins 43(RNF43)in the occurrence anddevelopment of gastric cancer tissues.Methods The expression of RNF43 wasdetected in 180 gastric cancer tissues and corresponding adjacent tissues by immunohistochemistry.The correlations of RNF43 expression with the clinicopathological features and prognosis of patients were analyzed.Results The high expression rate of RNF43 in the gastric cancer tissues was 46.1%(83/180)，and 28.6%(51/180)in the adjacent tissues(P = 0.020).The high expression rate of RNF43 in gastric cancer patients withdistantmetastases，lymph nodemetastasis and TNM stage(Ⅲ+Ⅳ)was higher(all P＜0.01).The overall survival(OS)of RNF43 high protein expression and low expression were respectively 44.7months(95% CI: 39.5-49.9months)and 61.1months(95% CI: 55.6-66.6months)，and significantdifference was found(P =0.004).ConclusionThe high expression of RNF43 in gastric cancer tissuesmay be one of the reasons of invasion，metastasis and poor prognosis in gastric cancer.

Key words:stomach neoplasms; ring finger proteins 43; invasion;metastasis; survival analysis

環(huán)指蛋白(RNF)家族在生物體內(nèi)通過泛素-蛋白酶作用降解特定的蛋白，參與細(xì)胞周期、凋亡、信號(hào)傳導(dǎo)以及DNA修復(fù)等生物過程。環(huán)指蛋白43(RNF43)是RNF家族新成員，其在直腸癌組織中高表達(dá)，促進(jìn)直腸癌細(xì)胞增殖，抑制細(xì)胞凋亡［1～5］。近年來研究證實(shí)，RNF43是結(jié)直腸癌中最常見的突變基因之一，促進(jìn)腫瘤的發(fā)生、發(fā)展［6］。但其與胃癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)系鮮見報(bào)道。為此我們于2009年6月～2013年11月進(jìn)行了如下研究。

1　資料與方法

1.1臨床資料選取2009～2013年大連醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院診治的胃癌患者180例，男101例、女79例，年齡29～72歲。180例患者均行手術(shù)治療，經(jīng)組織病理學(xué)檢查確診。收集到有可用資料記錄的病例分別為:腫瘤大小144例、浸潤深度178例、腹水175例、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移117例、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移172例、TNM分期125例、總生存期(OS)117例。隨訪3～78個(gè)月，OS平均54.5個(gè)月。

1.2胃癌及其癌旁組織RNF43表達(dá)檢測(cè)取患者手術(shù)切除的腫瘤組織及其相應(yīng)的癌旁組織標(biāo)本，－80℃冰箱保存，采用免疫組織化學(xué)染色法檢測(cè)RNF43表達(dá)。具體步驟:取出凍存的組織樣本，室

溫解凍，4%多聚甲醛固定，常規(guī)制作石蠟包埋組織塊，4 μm連續(xù)切片，固定于多聚賴氨酸化防脫載玻片上，依次進(jìn)行脫蠟、脫苯、水化，在pH 6.0檸檬酸鹽緩沖液中進(jìn)行高壓修復(fù)(80 kPa)。修復(fù)后切片經(jīng)過氧化氫、正常山羊血清處理后，滴加多克隆兔抗人RNF43抗體(ab129401，Abcam，UK，1∶200稀釋)于4℃孵育過夜;次日，切片依次滴加生物素標(biāo)化二抗、親和去-辣根過氧化酶復(fù)合物后，進(jìn)行DAB染色;經(jīng)蘇木素復(fù)染后觀察。同步以PBS液代替RNF43抗體作為陰性對(duì)照。由兩位臨床病理醫(yī)生分別對(duì)染色結(jié)果進(jìn)行盲法判讀。染色結(jié)果評(píng)價(jià)采用積分法，即染色強(qiáng)度與細(xì)胞著色百分率相乘得最終總積分。每張切片計(jì)數(shù)200個(gè)細(xì)胞，RNF43表達(dá)于細(xì)胞核。染色強(qiáng)度為無染色0分、弱強(qiáng)度1分、中等強(qiáng)度2分、高強(qiáng)度3分?？偡e分≤155%定義為低表達(dá)，＞155%定義為高表達(dá)。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)軟件。RNF43表達(dá)水平及其與胃癌臨床病理參數(shù)關(guān)系的分析采用Pearson χ2檢驗(yàn)或Fisher確切概率法。P ＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1胃癌及其癌旁組織RNF43表達(dá)胃癌組織RNF43高表達(dá)率為46.1%(83/180)，癌旁組織為28.6%(51/180)，兩者比較P＜0.05。

2.2 RNF43表達(dá)與胃癌臨床病理特征的關(guān)系發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及TNM分期高(Ⅲ+Ⅳ)的胃癌患者RNF43高表達(dá)率高(P均＜0.01)。見表1。

2.3RNF43表達(dá)對(duì)胃癌患者生存期的影響RNF43蛋白高表達(dá)者(62例)OS為44.7個(gè)月(95% CI: 39.5～49.9個(gè)月)，低表達(dá)者(55例)OS為61.1個(gè)月(95% CI: 55.6～66.6個(gè)月)，兩者比較P＜0.01。

3　討論

研究證實(shí)，RNF43參與了細(xì)胞周期、凋亡等生物學(xué)行為，對(duì)結(jié)直腸癌的發(fā)病、侵襲轉(zhuǎn)移有顯著影響。RNF43對(duì)不同腫瘤可能通過不同機(jī)制發(fā)揮不同作用。RNF43可通過與NEDL1基因結(jié)合，進(jìn)而抑制其下游蛋白p53功能，從而引發(fā)促癌作用［5］; RNF43可作為負(fù)反饋調(diào)控因子抑制Wnt/β-catenin信號(hào)通路活性，從而抑制該通路促增殖作用，亦起到抑癌作用［7～9］; RNF43可與PSF/p54nrb與HAP95等結(jié)合形成復(fù)合體發(fā)揮其生物學(xué)作用［10］。本研究結(jié)果顯示，胃癌組織中RNF43表達(dá)水平顯著高于癌旁正常組織，且發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及TNM分期高者RNF43高表達(dá)率更高。由此可見，RNF43可能參與了胃癌的發(fā)病、侵襲及轉(zhuǎn)移。

表1　RNF43高表達(dá)與胃癌臨床病理特征的關(guān)系［例(%)］

本研究中RNF43蛋白高表達(dá)的胃癌患者OS較低表達(dá)患者顯著縮短，說明RNF43高表達(dá)預(yù)示胃癌患者預(yù)后不良，在大腸癌的研究中也得到類似結(jié)果［11］;但是，Xi等［12］對(duì)神經(jīng)膠質(zhì)瘤的研究卻得到相反的結(jié)果，RNF43低表達(dá)與神經(jīng)膠質(zhì)瘤患者不良預(yù)后相關(guān)。這也驗(yàn)證了RNF43對(duì)不同腫瘤可能通過不同機(jī)制發(fā)揮不同作用。

近年的研究認(rèn)為，RNF43有望作為惡性腫瘤的標(biāo)志物之一，可為腫瘤的治療提供新的靶點(diǎn)［4～7］。鑒于本研究的發(fā)現(xiàn)，可以預(yù)見，進(jìn)一步深入研究RNF43蛋白在胃癌發(fā)生、發(fā)展過程中的作用及機(jī)制將能夠?yàn)槲赴┑闹委熖峁┬碌乃悸贰?/p>

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收稿日期:( 2015-07-02)

通信作者:劉嚴(yán)峰，E-mail:dlliuyf@126.com

基金項(xiàng)目:遼寧省科學(xué)計(jì)劃項(xiàng)目(2013225021)。

文章編號(hào):1002-266X(2015)36-0032-03

文獻(xiàn)標(biāo)志碼:B

中圖分類號(hào):R735.2

doi:10.3969/j.issn.1002-266X.2015.36.011