不同澄清劑對復(fù)方安神片水提液精制效果的影響

★　金楊巧　顏曉玲　戴娟　彭亮　季巧遇　(.江西中醫(yī)藥大學(xué)　南昌 330004；.江中藥業(yè)股份有限公司　南昌 330096)

不同澄清劑對復(fù)方安神片水提液精制效果的影響

★金楊巧1顏曉玲1戴娟1彭亮1季巧遇2(1.江西中醫(yī)藥大學(xué)南昌 330004；2.江中藥業(yè)股份有限公司南昌 330096)

摘要：目的：考察甲殼素和ZTC1+1-II型澄清劑法對復(fù)方安神片水提液的精制效果。方法：以固形物去除率、總皂苷保留率為考察指標(biāo)，采用單因素考察法，優(yōu)選最佳精制方法并作對比研究。結(jié)果：甲殼素澄清劑處理后的溶液固形物去除率54.57%，總皂苷保留率為81.21%，ZTC1+1-II型澄清劑處理后的溶液固形物去除率42.75%，總皂苷保留率為83.73%，兩組總皂苷保留率無明顯差異，但前者固形物去除率明顯高于后者。結(jié)論：本實(shí)驗(yàn)選擇甲殼素澄清法精制復(fù)方安神片水提液。

關(guān)鍵詞：復(fù)方安神片；甲殼素；ZTC1+1-II型；精制

復(fù)方安神片由酸棗仁等多味中藥組成，具有補(bǔ)益心脾、益氣養(yǎng)血、寧心安神的功效，其主要藥效成分是皂苷類成分。本制劑以水提取有效成分，因其提取液含有蛋白質(zhì)、淀粉、藥渣、纖維、樹脂、油脂等雜質(zhì)，且本品日服用生藥量大，會導(dǎo)致制劑日服用劑量較大，并可能造成制劑成型困難，因此需要對其提取液進(jìn)行精制。目前常采用醇沉法，但存在耗醇量大、成本高、易燃易爆等缺點(diǎn)[1]，在實(shí)際生產(chǎn)中受到限制。吸附澄清法利用吸附、凝聚和絮凝等作用除去藥物中的雜質(zhì)，具有操作簡單、成本低、安全無毒、可生物降解[2]等優(yōu)點(diǎn)，近年來已廣泛應(yīng)用于精制中藥水提液中。本文對甲殼素和ZTC1+1-II型澄清劑法進(jìn)行了對比研究，為確定復(fù)方安神片水提液中除雜工藝提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1儀器與試藥

1.1儀器TD5M型高速離心機(jī)(長沙湘智離心機(jī)儀器有限公司)；METTLER AE240電子天平(梅特勒托利多儀器有限公司)；AB204-N精密分析天平(METTLER TOLEDO上海衡器有限公司)；HH-4數(shù)顯恒溫水浴鍋(常州國華電器有限公司)；UV-1206紫外分光光度計(日本SHIMADZU)。

1.2試劑復(fù)方安神片水提液(本室自制)；酸棗仁皂苷A對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號：110734-200509)；甲殼素(青島海維康生物制品有限公司)；正丁醇、甲醇、香草醛、冰醋酸、高氯酸(均為分析純)。

2方法和結(jié)果

2.1總皂苷含量測定

2.1.1對照品溶液配制精密稱取酸棗仁皂苷A 9.38mg于5mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻即得(酸棗仁皂苷A對照品溶液濃度為1.8760mg/mL)。

2.1.2供試品溶液的制備精密吸取濃縮液10mL，置分液漏斗中，用水飽和正丁醇溶液提取4次，每次10 mL，合并正丁醇提取液，蒸干，殘渣加適量甲醇溶解，移至10mL量瓶，用甲醇稀釋并定容至刻度，作為供試品溶液。

2.1.3最大吸收波長的確定精密吸取上述供試品溶液0.4mL、酸棗仁皂苷A對照品溶液50μL于10 mL具塞試管中，于60℃恒溫水浴蒸干溶劑，依次加5%香草醛冰醋酸溶液0.2mL，高氯酸0.8mL，搖勻，密塞，置60℃水浴加熱15min，流水冷卻至室溫，搖勻，以相應(yīng)試劑為空白對照，按照《中國藥典》2010版一部紫外可見分光光度法(附錄VA)，于200～700nm處進(jìn)行光譜掃描，結(jié)果供試品溶液在450nm處有最大吸收峰，而對照品溶液則在607nm，同時在470nm有一個較大吸收峰，綜合考慮，本實(shí)驗(yàn)選擇檢測波長為470nm。

2.1.4標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制分別精密吸取上述酸棗仁皂苷A對照品溶液20，30，50，75，100，125μL，于10mL具塞試管中，水浴蒸干溶劑，依次加5%香草醛冰醋酸溶液0.2 mL，高氯酸0.8mL，搖勻，密塞，置60℃水浴加熱15min，冷卻至室溫，各加冰醋酸5.0mL，搖勻，以相應(yīng)試劑為空白對照，按照分光光度法(中華人民共和國藥典[3]2010版I部，附錄VA)，于470nm測吸光度。以酸棗仁皂苷A為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)，得標(biāo)準(zhǔn)曲線Y=1.9146X(R2=0.9995)，表明酸棗仁皂苷A在0.0375～0.2345mg與吸光度呈良好線性關(guān)系。

2.1.5樣品溶液的測定精密吸取上述供試品溶液100μL于10mL具塞試管中，按2.1.4項(xiàng)下自“水浴揮干溶劑”起操作，依法測定吸光度，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算總皂苷含量，再按下式進(jìn)一步計算總皂苷保留率。(總皂苷保留率%=精制后總皂苷含量/精前總皂苷含量×100%)

2.2固形物去除率的測定精密量取精制前后藥液10mL，至已干燥恒重的蒸發(fā)皿中，置水浴鍋揮干水分，于105℃烘箱中干燥3h，取出，置干燥器中冷卻，30min后精密稱重，計算固形物去除率。計算公式：固形物去除率=(精制前固形物質(zhì)量-精制后固形物質(zhì)量)/精制前固形物質(zhì)量×100%。

2.3澄清劑的配制

2.3.1甲殼素醋酸溶液稱取甲殼素1.00g，溶于1%的冰醋酸溶液中，磁力攪拌后靜置24h，制備成濃度為1%的甲殼素冰醋酸溶液，備用。

2.3.2ZTC1+1-II型澄清劑稱取A組分1.00g加適量蒸餾水?dāng)嚢璩珊隣?，然后加蒸餾水至100mL，磁力攪拌并溶脹24h，配成1%的粘膠液，備用。稱取B組分1.00g加少量1%醋酸溶液攪拌成糊狀，然后加足夠量1%醋酸液至100mL，磁力攪拌并溶脹24h，配成1%的粘膠液，備用。

2.4甲殼素精制工藝考察

2.4.1甲殼素加入量考察取濃度(生藥量與藥液體積之比)1∶10(g/mL)復(fù)方安神片水提液5份，加熱至50℃，按2%,4%,6%,8%,10%的體積量分別加入甲殼素醋酸液，攪拌5min，于50℃水浴保溫3h，取出常溫靜置12h，離心15min(3500r/min)，取上清液測定各項(xiàng)指標(biāo)，結(jié)果結(jié)果表明5組用量對總皂苷保留率均較好，4%用量組固形物除雜率最高，故甲殼素醋酸液以4%用量為佳，見下圖1。

圖1　甲殼素加入量考察結(jié)果

2.4.2絮凝時間考察取濃度1∶10(g/mL)水提液6份，加熱至50℃，加入4%體積量的甲殼素醋酸液，攪拌5min，于50℃下分別水浴保溫1,2,3,4,5,6h，其余操作同“2.4.1”項(xiàng)，結(jié)果表明第5組固形物除雜率、總皂苷保留率均最高，故選擇5h為絮凝時間，見下圖2。

2.4.3絮凝溫度考察取濃度1∶10(g/mL)水提液5份，加熱至40,50,60,70,80℃，加入4%體積量的甲殼素醋酸液，其余操作同“2.4.1”項(xiàng)，結(jié)果表明，絮凝溫度為50℃組固形物去除率、總皂苷保留率均最高，故選擇50℃為絮凝溫度，見下圖3。

2.4.4藥液濃度考察分別取濃度1∶4,1∶6,1∶8,1∶10,1∶12(g/mL)水提液5份，加熱至50℃，加入4%體積量的甲殼素醋酸液,其余操作同“2.4.1”項(xiàng)，結(jié)果表明，藥液濃度1∶12(g/mL)組固形物除雜率最高，但總皂苷保留率較低，綜合考慮，選擇藥液濃度1∶10(g/mL)，見下圖4。

圖2　絮凝時間考察結(jié)果

圖3　絮凝溫度考察結(jié)果

圖4　藥液濃度考察結(jié)果

2.5ZTC1+1-II型澄清劑工藝考察

2.5.1澄清劑加入量考察取濃度1∶10(g/mL)水提液5份，50℃保溫，攪拌分散加入4%,6%,8%,10%,12%體積量的B組分，每30min間隔攪拌1次，2h后，同法加入A組分(用量B：A=2∶1)，保溫30min，取出常溫靜置12h，離心15min(3500r/min)，取上清液測定各項(xiàng)指標(biāo)，結(jié)果表明B組分為6%用量組固形物去除最高，總皂苷保留率較好，本實(shí)驗(yàn)澄清劑加入量選擇6%B+3%A，見下圖5。

圖5　澄清劑加入量考察結(jié)果

2.5.2絮凝溫度考察取濃度1∶10(g/mL)水提液5份，加熱至40,50,60,70,80℃，加入6%B+3%A體積量的澄清劑，其余操作同“2.5.1”項(xiàng)，結(jié)果表明絮凝溫度自50℃起，隨著溫度的升高，固形物去除率無明顯變化，且50℃時總皂苷保留率也較好，綜合考慮，選擇50℃為絮凝溫度，見下圖6。

圖6　絮凝溫度考察結(jié)果

2.5.3藥液濃度考察分別取濃度1∶4,1∶6,1∶8,1∶10,1∶12(g/mL)水提液5份，加熱至50℃，加入6%B+3%A體積量的澄清劑，其余操作同“2.5.1”項(xiàng)，結(jié)果表明，濃度1∶10(g/mL)組固形物除雜率最高，且總皂苷保留率較好，故本實(shí)驗(yàn)選擇藥液濃度1∶10(g/mL)，見下圖7。

2.6兩種澄清法對比研究根據(jù)以上考察結(jié)果可知，甲殼素澄清法最佳精制工藝：藥液濃度1∶10(g/mL)，加入4%藥液體積量的甲殼素，絮凝溫度50℃，絮凝時間5h；ZTC1+1-II型澄清法最佳精制工藝：藥液濃度1∶10(g/mL)，加入藥液體積6%B+3%A體積量的澄清劑，絮凝溫度50℃。分別采用上述兩種最佳精制工藝對復(fù)方安神片水進(jìn)行處理，結(jié)果見表1。

圖7　藥液濃度考察結(jié)果

澄清劑固形物去除率(%)總皂苷保留率(%)甲殼素54.5781.21ZTC1+1-II型42.7583.73

由表1可知，兩種方法總皂苷保留率均好且無明顯差異，但甲殼素組固形物去除率明顯高于ZTC1+1-II型吸附澄清法，故本實(shí)驗(yàn)可采用甲殼素澄清劑對復(fù)方安神片水提液進(jìn)行精制處理。

3討論

甲殼素及ZTC1+1天然澄清劑是近年來出現(xiàn)的新型絮凝劑，因其成本低、應(yīng)用方便，越來越受到人們的親睞。ZTC1+1天然澄清劑目前有I、II、III、IV四種型號，其中II型適用于固體制劑和顆粒劑型?，F(xiàn)代研究表明[4-5]，甲殼素澄清劑和ZTC1+1-II型澄清劑均能在除雜的同時高效保留皂苷類、多糖類成分，對此，本實(shí)驗(yàn)優(yōu)選采用上述兩種澄清法

精制復(fù)方安神片水提液。

以上2種澄清劑均利用吸附等原理起作用，但它們各有特點(diǎn)：從組成看，甲殼素是單組分澄清劑，ZTC1+1澄清劑是復(fù)合成分，由A、B兩組分組成；從澄清劑加入量看，甲殼素較少，價格便宜，ZTC1+1澄清劑用量相對較大，相比之下，顯得價格較貴；從除雜效果看，ZTC1+1-II型在總皂苷保留率略優(yōu)于甲殼素，但甲殼素除雜效果略好于ZTC1+1-II型，但均未見顯著性差異。

本實(shí)驗(yàn)甲殼素的加入量較少，幾乎全用于起絮凝作用，故采用高速離心法將絮凝沉淀物去除即可，而ZTC1+1-II型澄清劑則采用A與B組分用量比為1∶2，使B組分的再“架橋”作用可以保證游離或結(jié)合的A組分從溶液中分離而除去，均可達(dá)到提取液中無澄清劑殘留的目的。

根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，本品選擇采用甲殼素澄清劑對復(fù)方安神片水提液進(jìn)行精制處理，在最大化保留有效成分的同時，降低了固形物，為本品制劑成型和降低日服用量奠定了基礎(chǔ)。

參考文獻(xiàn)

[1]王海寧,謝印芝,樊飛躍. 殼聚糖及ZTC1+1-II澄清劑對大青葉提取液的澄清工藝研究[J].中國藥房, 2008, 19 (21): 1625-1628.

[2]任杰. 可降解與吸收材料[M].北京: 化學(xué)工業(yè)出版社, 2003: 10.

[3]國家藥典委員會. 中華人民共和國藥典[M].一部. 北京:化學(xué)工業(yè)出版社, 2010: 附錄30.

[4]張洪,羅毅,彭燕.殼聚糖用作澄清劑制備黃芪口服液[J].華西藥學(xué)雜志, 2002,17(16):478.

Study on Refining Effect of Different Clarifying Agents on Water Extract of Compound Sedative Tablets

JIN Yang-qiao1,YAN Xiao-ling1,DAI Juan1,PENG Liang1,JI Qiao-Yu2

1.JiangxiUniversityofTraditionalChineseMedicine,Nanchang330004,China.

2.JiangZhongPharmaceuticalCo. ,LTD,Nanchang330096,China.

Abstract:Objective: To investigate chitin and ZTC1 + 1-II-type clarifier sedative tablets of compound purification effect of water extracts. Methods: solids removal, retention rate of total saponins investigation index, using single factor method, the preferred method for purifying the best and make a comparative study. Results: After the solid solution treated chitin clarify removal 54.57%, 81.21% retention rate of total saponins, solid solution ZTC1 + 1-II-type clarifying agent treatment removal 42.75%, total saponins retention rate 83.73 % respectively of total saponins retention rate was no significant difference, but the former solids removal was significantly higher than the latter. Conclusion: This experiment selected chitin method refining water extract of sedative tablets.

Key words:Compound sedative tablets; chitin; ZTC1+1-II-type; refining

收稿日期：(2015-01-29)編輯：曾文雪

中圖分類號：R286

文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A