乙型肝炎肝硬化血清纖維化指標(biāo)和肝功能相關(guān)性研究

陸明海，張軍艷，楊宏偉

(十堰市中醫(yī)醫(yī)院檢驗(yàn)科，湖北 十堰 442012)

乙型肝炎肝硬化血清纖維化指標(biāo)和肝功能相關(guān)性研究

陸明海※，張軍艷，楊宏偉

(十堰市中醫(yī)醫(yī)院檢驗(yàn)科，湖北 十堰 442012)

摘要：目的探討血清纖維化指標(biāo)透明質(zhì)酸(HA)、層粘連蛋白(LN)、Ⅲ型膠原蛋白(PC-Ⅲ)和肝功能的關(guān)系，評(píng)價(jià)HA、LN和PC-Ⅲ對(duì)診斷肝纖維化的敏感性和特異性。方法選擇2012年3月至2014年6月十堰市中醫(yī)醫(yī)院收治的乙型肝炎患者145例為研究對(duì)象，其中慢性乙型肝炎(A組)63例、乙型肝炎肝硬化(B組)42例、慢性HBV攜帶者(C組)40例，同期選擇20例健康健康體檢者作為健康對(duì)照組(D組)。采用生化法檢測(cè)丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALT)；放射免疫法檢測(cè)血清HA、LN、PC-Ⅲ，熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)檢測(cè)HBV-DNA載量。分析4組纖維化指標(biāo)及其與ALT、HBV-DNA載量的關(guān)系。結(jié)果4組血清HA、LN、PC-Ⅲ水平比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.01)。B組血清HA、LN、PC-Ⅲ水平最高[(475±103) μg/L、(158±43) μg/L、(224±78) μg/L]，與A組[(298±23) μg/L、(124±33) μg/L、(186±44) μg/L]、C組[(82±22) μg/L、(73±18) μg/L、(45±13) μg/L]、D組[(78±14) μg/L、(68±13) μg/L、(38±10) μg/L]分別比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)。A組患者HA、LN、PC-Ⅲ和ALT、HBV-DNA呈正相關(guān)(均P<0.05)；B組患者HA、LN、PC-Ⅲ和ALT、HBV-DNA無(wú)明顯相關(guān)性(均P>0.05)。HA對(duì)肝硬化纖維化診斷的靈敏度最高(93.4%)，PC-Ⅲ特異度最高(88.4%)。結(jié)論乙型肝炎患者血清HA、LN、PC-Ⅲ明顯升高，對(duì)慢性乙型肝炎患者聯(lián)合診斷有助于早期診斷肝纖維化，及早干預(yù)。

關(guān)鍵詞：乙型肝炎；肝纖維化；透明質(zhì)酸；Ⅲ型膠原蛋白；肝功能

各類(lèi)肝炎世界流行趨勢(shì)不減，每年約有100萬(wàn)人死于乙型肝炎病毒(hepatitis B virus，HBV)感染后導(dǎo)致的肝硬化、肝衰竭和肝癌[1]。當(dāng)機(jī)體感染HBV后，病毒持續(xù)在體內(nèi)進(jìn)行復(fù)制，啟動(dòng)自身免疫應(yīng)答清除體內(nèi)的病毒，導(dǎo)致肝臟細(xì)胞持續(xù)損傷，刺激肝臟發(fā)生纖維化[2]。肝星狀細(xì)胞與肝臟纖維化的發(fā)生、發(fā)展及肝臟星狀細(xì)胞密切相關(guān)，當(dāng)其受到刺激時(shí)，可分泌大量的纖維化相關(guān)修復(fù)因子，促進(jìn)肝臟纖維修復(fù)[3]。本研究主要分析肝臟纖維化主要指標(biāo)透明質(zhì)酸(hyaluronic acid,HA)、層粘連蛋白(laminin,LN)、Ⅲ型膠原蛋白(protein collagen Ⅲ,PC-Ⅲ)與肝功能的相關(guān)性?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1資料與方法

1.1一般資料選擇2012年3月至2014年6月十堰市中醫(yī)醫(yī)院收治的145例乙型肝炎患者為研究對(duì)象，其中慢性乙型肝炎(A組)63例、乙型肝炎肝硬化(B組)42例、慢性HBV攜帶者(C組)40例。其中A組男33例、女30例，年齡23～67歲，平均(36±5)歲；B組男27例、女15例，25～57歲，平均(39±3)歲；C組男23例、女17例，23～67歲，平均(37±3)歲。同期選擇20例健康健康體檢者作為健康對(duì)照組(D組)，男12例、女8例，年齡22～46歲，平均(34±4)歲。慢性乙型肝炎、乙型肝炎肝硬化、慢性HBV攜帶者診斷均符合2010年乙型肝炎防治指南[1]，排除藥物性肝炎、酒精性肝炎、腎疾病、腎功能障礙、惡性腫瘤、急性感染、服用激素類(lèi)藥物等，自愿參與該項(xiàng)目的研究，并愿意承擔(dān)各項(xiàng)檢測(cè)項(xiàng)目的費(fèi)用。各組受試者的性別、年齡等一般資料比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2研究方法

1.2.1血清HA、LN、PC-Ⅲ檢測(cè)血清HA、LN、PC-Ⅲ檢測(cè)采用放射免疫法。主要儀器：γ放射免疫技術(shù)器(GC-1200H，科大創(chuàng)新股份有限公司)。HA放射免疫分析試劑盒(北京申宗生物技術(shù)研究所提供，批號(hào)：20121120H)；Ⅲ膠原放射免疫試劑盒(上?？泼郎镌噭┯邢薰荆?hào)：MA20132203)；層粘連蛋白放射免疫試劑盒(上海科美生物試劑有限公司，批號(hào)：MA20130431)。

1.2.2HBV核酸的檢測(cè)方法熒光定量PCR檢測(cè)(廈門(mén)新創(chuàng)科技有限公司)。檢測(cè)步驟規(guī)范對(duì)待來(lái)自患者血漿樣本和對(duì)照品(陰、陽(yáng))進(jìn)行處理，其中步驟方法嚴(yán)格按試劑盒中說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。樣品在進(jìn)行熒光定量PCR擴(kuò)增前要進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄。對(duì)數(shù)據(jù)相關(guān)性進(jìn)行分析，采用對(duì)數(shù)計(jì)算的方法同時(shí)定量計(jì)算HBV-DNA的平均拷貝數(shù)。所用試劑檢測(cè)下限為<80 copies/mL。僅A、B、C組完成HBV-DNA檢測(cè)。

1.2.3丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(alanine aminotransferase,ALT)檢測(cè)主要試劑：ALT測(cè)定試劑盒，北京利德曼公司生產(chǎn)[國(guó)食藥監(jiān)械(進(jìn))字2004第3400295號(hào)]。采用生化方法，用貝克曼DX800全自動(dòng)生化分析儀結(jié)合ALT測(cè)定試劑盒進(jìn)行檢測(cè)。僅A、B、C組進(jìn)行ALT檢測(cè)。

2結(jié)果

2.1各組HA、LN、PC-Ⅲ水平比較4組血清HA、LN、PC-Ⅲ水平比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.01)。B組血清HA、LN、PC-Ⅲ水平最高，與A、C、D組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)；C、D組高于B組(P<0.05)。而C組血清HA、LN、PC-Ⅲ水平與D組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表1。

HA：透明質(zhì)酸；LN：層粘連蛋白；PC-Ⅲ：Ⅲ型膠原蛋白；a與A組比較，P<0.05；b與B組比較，P<0.05；A組：慢性乙型肝炎；B組：乙型肝炎肝硬化；C組：慢性HBV攜帶者；D組：健康對(duì)照組

2.2乙型肝炎患者HA、LN、PC-Ⅲ和ALT、HBV-DNA的關(guān)系A(chǔ)組患者HA、LN、PC-Ⅲ與ALT呈正相關(guān)(r=0.34，0.35，0.41，均P<0.05)。B組和C組HA、LN、PC-Ⅲ和ALT無(wú)明顯相關(guān)性(P>0.05)。A組患者HA、LN、PC-Ⅲ與HBV-DNA呈正相關(guān)(r=0.35，0.45，0.53，均P<0.05)。B組和C組HA、LN、PC-Ⅲ與HBV-DNA無(wú)明顯相關(guān)性(r=0.04，P>0.05)。

2.3ROC曲線(xiàn)評(píng)價(jià)血清HA、LN、PC-Ⅲ對(duì)肝硬化診斷的敏感性和特異性HA曲線(xiàn)下面積最大，為0.93，而LN和PC-Ⅲ分別為0.86、0.89，HA、LN、PC-ⅢROC曲線(xiàn)均位于機(jī)會(huì)線(xiàn)上，HA和LN、PC-Ⅲ曲線(xiàn)下面積比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Z=3.05，P<0.05)，LN、PC-Ⅲ曲線(xiàn)下面積比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。在最佳臨床診斷分界點(diǎn)時(shí)，HA對(duì)肝硬化纖維化診斷的靈敏度最高，PC-Ⅲ對(duì)肝硬化纖維化的特異度較高。見(jiàn)表2，圖1。

HA：透明質(zhì)酸；LN：層粘連蛋白；PC-Ⅲ：Ⅲ型膠原蛋白；每個(gè)指標(biāo)檢測(cè)的靈敏度和特異度為該指標(biāo)最佳臨床診斷分界點(diǎn)下的靈敏度和特異度

HA：透明質(zhì)酸；LN：層粘連蛋白；PC-Ⅲ：Ⅲ型膠原蛋白

圖1乙型肝炎肝硬化患者血清HA、LN、PC-Ⅲ水平ROC曲線(xiàn)結(jié)果

3討論

肝纖維化是各類(lèi)肝臟疾病共同的病理進(jìn)程，最終發(fā)展到肝硬化、肝癌階段，導(dǎo)致最終疾病發(fā)展不可逆，但早期肝纖維化是可逆的病理改變，所以臨床對(duì)早期肝纖維化診斷尤為重要[4]。肝纖維化診斷的金標(biāo)準(zhǔn)是肝臟組織活檢，但因其創(chuàng)傷性不為臨床廣泛應(yīng)用[5]。雖然超聲對(duì)肝纖維化的診斷臨床應(yīng)用廣泛，尤其是彈性超聲技術(shù)的發(fā)展，對(duì)肝纖維化的診斷更為準(zhǔn)確，但肝纖維化一旦發(fā)生超聲學(xué)改變，多數(shù)情況下肝纖維病程已經(jīng)進(jìn)展到不可逆階段[6]。

目前臨床對(duì)早期肝纖維化血清學(xué)診斷還處于不成熟階段，血清學(xué)研究最多的指標(biāo)有轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1、PC-Ⅲ、血小板衍生生長(zhǎng)因子、HA等，這些因子主要由肝臟庫(kù)普弗細(xì)胞、星狀細(xì)胞分泌[7-8]。TGF-β1主要是抑制細(xì)胞外基質(zhì)降解和肝細(xì)胞再生能力，使肝纖維化逐漸加重，與肝纖維化程度呈正相關(guān)[9]。HA由間質(zhì)細(xì)胞合成，是結(jié)締組織主要的非細(xì)胞成分，當(dāng)肝纖維化庫(kù)普弗細(xì)胞清除能力明顯下降，使得HA代謝速率明顯下降，血清中HA水平明顯增高[10]。血清PC-Ⅲ主要是由肝臟星狀細(xì)胞合成，其血清水平增高表明PC-Ⅲ合成活躍，表明肝臟庫(kù)普弗細(xì)胞功能活躍，血清含量與肝纖維程度相一致[11]。LN主要是內(nèi)皮細(xì)胞合成，介導(dǎo)細(xì)胞間粘連作用，正常血清LN水平極低，若血清中LN水平升高，提示間質(zhì)細(xì)胞增生[12]。

本研究結(jié)果顯示，HBV攜帶者和正常健康對(duì)照組人群血清纖維化指標(biāo)比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說(shuō)明HBV攜帶者體內(nèi)病毒對(duì)肝臟細(xì)胞無(wú)侵犯，未對(duì)其造成損失。而慢性乙型肝炎患者體內(nèi)病毒對(duì)肝臟細(xì)胞慢性損失，其體內(nèi)的HA、LN、PC-Ⅲ稍有升高。HA對(duì)肝硬化纖維化診斷的靈敏度為93.4%，特異度為75.2%；PC-Ⅲ對(duì)肝硬化纖維化的特異性最高，為88.4%。Lu等[13]研究認(rèn)為，HA對(duì)肝纖維診斷的靈敏度和特異性分別為85%和78%，是檢測(cè)肝纖維化較理想的血清指標(biāo)。本研究結(jié)果與其基本吻合。Bai等[14]研究認(rèn)為，HBV-DNA是評(píng)估肝纖維化的獨(dú)立指標(biāo)，HBV-DNA載量與肝纖維化程度呈正相關(guān)。本研究結(jié)果顯示，慢性乙型肝炎患者體內(nèi)的HA、LN、PC-Ⅲ水平與HBV-DNA、ALT呈正相關(guān)。本研究結(jié)果與Bai等[14]結(jié)果相似，但是在B組患者HA、LN、PC-Ⅲ和HBV-DNA無(wú)明顯相關(guān)性，呈“分離現(xiàn)象”，血清纖維化指標(biāo)處于較高水平，而HBV-DNA 和ALT處于相對(duì)較低水平。

總之，肝功能及HBV-DNA對(duì)已纖維化病變的肝臟無(wú)明顯相關(guān)性，血清肝纖維化指標(biāo)的對(duì)慢性乙型肝炎患者長(zhǎng)期監(jiān)測(cè)，有利于臨床早期發(fā)現(xiàn)肝纖維化，及早干預(yù)具有積極的臨床意義。

參考文獻(xiàn)

[1]王全楚,段芳齡.乙肝治療二十年的回顧與總結(jié)[J].胃腸病學(xué)和肝病學(xué)雜志,2012,21(10):883-886.

[2]陸倫根,胡俊杰.2012年肝纖維化領(lǐng)域的研究進(jìn)展[J].中華肝臟病雜志,2013,21(2):84-86.

[3]Ming JH,Yih SH,Tzy YC,etal.Hepatitis C virus E2protein induce reactive oxygen species (ROS)-related fibrogenesis in the HSC-T6 hepatic stellate cell line[J].J Cell Biochem,2011,112(1):233-243.

[4]朱倩,喬國(guó)梁,晏建軍,等.乙肝肝硬化相關(guān)早期肝癌切除術(shù)預(yù)后[J].中華肝膽外科雜志,2014,20(4):258-264.

[5]廖瑞真,劉倚河,林宗躍,等.慢性肝病肝剪切波速與血清肝纖維化標(biāo)志物在肝纖維化診斷中的對(duì)比研究[J].生物醫(yī)學(xué)工程與臨床,2012,16(5):458-461.

[6]馮卉,張新力,李猛,等.聲觸診組織量化和瞬時(shí)彈性成像技術(shù)診斷肝纖維化的初步研究[J].中華超聲影像學(xué)雜志,2010,19(3):227-230.

[7]Kim MY,Baik SK,Jang YO,etal.Serum hyaluronic acid level:correlation with quantitative measurement of hepatic fibrosis in a cirrhotic rat model[J].Korean J Hepatol,2008,14(2):159-167.

[8]Li CH,Piao DM,Xu WX,etal.Morphological and serum hyaluronic acid,laminin and type Ⅳ collagen changes in dimethylnitrosamine-induced hepatic fibrosis of rats[J].World J Gastroenterol,2005,11(48):7620-7624.

[9]張超賢,郭李柯,郭曉鳳,等.電針聯(lián)合貞芪扶正顆粒對(duì)肝纖維化大鼠自由基反應(yīng)、NF-κB活化、TGF-β1和CTGF mRNA表達(dá)的影響[J].中國(guó)老年學(xué)雜志,2014,34(9):2512-2516.

[10]賀樂(lè)奇,申春梅,張群峰,等.慢性乙型肝炎病毒復(fù)制與肝纖維化血清學(xué)指標(biāo)相關(guān)性分析[J].實(shí)用預(yù)防醫(yī)學(xué),2014,21(6):740-742.

[11]Xiu L,Chang N,Yang L,etal.Intracellular sphingosine 1-phosphate contributes to collagen expression of hepatic myofibroblasts in human liver fibrosis independent of its receptors[J].Am J Pathol,2014,23(2):2445-2451.

[12]潘愛(ài)萍,林英輝,潘元平,等.肝纖維化血清學(xué)標(biāo)志物與肝臟病理相關(guān)性研究[J].南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2007,27(12):1935-1936,1938.

[13]Lu LG,Zeng MD,Mao YM,etal.Relationship between clinical and pathologic findings in patients with chronic liver diseases[J].Word J Gastroenterol,2013,9(12):2796-2800.

[14]Bai H,Liu H,Chen X,etal.Influence of age and HBeAg status on the correlation between HBV DNA and hepatic inflammation and fibrosis in chronic hepatitis B patients[J].Dig Dis Sci,2013,58(5):1355-1362.

Research on the Relationship between Serum Fibrosis Indexes and Liver Function in Patients with Cirrhosis Hepatitis BLUMing-hai，ZHANGJun-yan，YANGHong-wei.(DepartmentofClinicalLaboratory,ShiyanCityTraditionalChineseMedicineHospital,Shiyan442012,China)

Abstract:ObjectiveTo explore the correlation between the serum fibrosis indexes,including hyaluronic acid(HA),laminin(LN),protein collagen-Ⅲ(PC-Ⅲ) and liver function,and assess the sensitivity and specificity of HA,LN and PC-Ⅲ in diagnosing liver fibrosis.MethodsDuring Mar.2012 and Jun.2014,145 patients with hepatitis B in Shiyan City Traditional Chinese Medicine Hospital were selected,including chronic hepatitis B(group A) 63 cases,hepatitis B cirrhosis(group B) 42 cases,chronic hepatitis B virus (HBV) carriers(group C) 40 cases,and 20 cases of for health checkup during the same period were included as control group(group D).ALT was detected by biochemical method;HA,LN,PC-Ⅲ were detected by radioimmunoassay;HBV- DNA load was detected by FQ-PCR.Analysis of fibrosis indexes and its relationship with ALT,HBV-DNA loads of the four groups was conducted.ResultsThe difference of the level of serum HA,LN,PC-Ⅲ in the four groups was statistically significant(P<0.01).The level of serum HA,LN and PC-Ⅲ were the highest in group B compared with group [(475±103) μg/L,(158±43) μg/L,(224±78) μg/L]，compared with A group[(298±23) μg/L,(124±33) μg/L,(186±44) μg/L],C group[(82±22) μg/L,(73±18) μg/L,(145±13) μg/L]and D group[(78±14) μg/L,(68±13) μg/L,(38±10) μg/L]and the difference was statistically significant(P<0.05).HA,LN,PC-Ⅲ and ALT,HBV DNA were positively correlated in group A(P<0.05);HA,LN,PC-Ⅲ and ALT,HBV DNA had no obvious correlation in group B(P>0.05).ConclusionThe serum level of HA,LN,PC-Ⅲ are significantly increases in patients with liver fibrosis,and combined detection in patients with chronic hepatitis B is helpful to early diagnose liver fibrosis and clinical intervention.

Key words:Hepatitis B; Hepatic fibrosis; Hyaluronic acid; Protein collagen-Ⅲ; Hepatic function

收稿日期：2015-01-19修回日期：2015-05-21編輯：伊姍

doi：10.3969/j.issn.1006-2084.2015.24.045

中圖分類(lèi)號(hào)：R446.1

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1006-2084(2015)24-4544-03