XRCC1 Arg399Gln基因多態(tài)性與進展期胃癌術(shù)后行腹腔熱灌注化療效果的相關(guān)性研究

崔海濱，白希永，葛懷娥，張 維

(河北省滄州市中心醫(yī)院,河北 滄州 061001)

XRCC1 Arg399Gln基因多態(tài)性與進展期胃癌術(shù)后行腹腔熱灌注化療效果的相關(guān)性研究

崔海濱，白希永，葛懷娥，張 維

(河北省滄州市中心醫(yī)院,河北 滄州 061001)

目的 探討DNA修復(fù)基因X線修復(fù)交叉互補基因1(X-ray repair cross-complemtary protein 1, XRCC1)Arg399Gln多態(tài)性與進展期胃癌患者術(shù)后行奧沙利鉑化療為主的腹腔熱灌注化療療效的關(guān)系。方法 選取病理證實的進展期胃癌患者49例，根治性手術(shù)后行以奧沙利鉑為主的腹腔熱灌注聯(lián)合全身化療。化療前采集外周血，采用限制性片段長度多態(tài)性聚合酶鏈反應(yīng)(PCR-RFLP)技術(shù)檢測XRCC1 Arg399Gln的基因多態(tài)性。結(jié)果 49例進展期胃癌患者中，28例(57%)攜帶XRCC1 Arg399Arg(GG)基因型，15例(31%)攜帶XRCC1 Arg399Gln(GA)基因型，6例(12%)攜帶XRCC1 Gln399Gln(AA)基因型。GG、GA和AA基因型不良反應(yīng)發(fā)生率比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P均>0.05)。其中攜帶GG基因型的患者術(shù)后復(fù)發(fā)率低于攜帶GA+AA基因型患者，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；攜帶GG基因型的患者術(shù)后總生存率顯著高于攜帶GA+AA基因型患者(P<0.05)。結(jié)論 XRCC1 Arg399Gln基因多態(tài)性與進展期胃癌患者術(shù)后行以奧沙利鉑化療為主的腹腔熱灌注化療的預(yù)后有關(guān)。

進展期胃癌；X射線損傷交叉互補蛋白1；奧沙利鉑；腹腔熱灌注化療;基因多態(tài)性

胃癌是我國最常見的惡性腫瘤之一，其病死率一直居高不下。由于胃癌發(fā)展的隱匿性，大部分患者在診斷時已經(jīng)屬于進展期(Ⅲ、Ⅳ期)。根治性手術(shù)是目前胃癌的主要治療手段，其5年生存率僅為40%左右，其中腹腔內(nèi)轉(zhuǎn)移是進展期胃癌最常見的轉(zhuǎn)移方式和致死原因[1]。目前研究發(fā)現(xiàn)根治性手術(shù)后早期應(yīng)用奧沙利鉑循環(huán)式腹腔熱灌注化療再聯(lián)合全身化療，可有效防治腹腔內(nèi)腫瘤轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)，提高患者的生存時間[2]。然而相同化療方案下的不同個體會產(chǎn)生不同的臨床療效，基因多態(tài)性是決定藥物反應(yīng)個體化差異的重要因素[3]。DNA修復(fù)酶X射線修復(fù)交叉互補基因1(X-ray repair cross-complementary protein-1, XRCC1) Arg399Gln多態(tài)性與胃癌對鉑類的化療敏感性及預(yù)后密切相關(guān)，但研究結(jié)論不盡相同。黃朝暉等[4]研究發(fā)現(xiàn)，攜帶Arg399Gln(GG)基因型的胃癌患者具有較高的無復(fù)發(fā)生存期和總生存期；但石會勇等[5]研究發(fā)現(xiàn)，攜帶Gln399Gln(AA)基因型的胃癌患者對化療更敏感。本研究運用限制性片段長度多態(tài)性聚合酶鏈反應(yīng)(Polymerase chain reaction-Restriction fragment length polymorphism, PCR-RFLP)技術(shù)分析XRCC1 Arg399Gln基因多態(tài)性與根治性手術(shù)后早期應(yīng)用奧沙利鉑循環(huán)式腹腔熱灌注化療的進展期胃癌患者的毒副反應(yīng)、復(fù)發(fā)以及生存情況之間的關(guān)系，為進展期胃癌患者選擇個性化的化療藥物提供一定的參考依據(jù)。

1 臨床資料

1.1 一般資料 選擇2010年5月—2012年4月在本院腫瘤外科行胃癌根治術(shù)的進展期胃癌患者49例，均經(jīng)病理證實，術(shù)前無肝、肺、骨等遠處轉(zhuǎn)移，無手術(shù)及化療禁忌證。其中男21例，女28例；年齡38～70(57.5±10.4)歲；ⅢA期29例，ⅢB期20例；高、中分化腺癌16例，低、未分化腺癌27例，黏液腺癌6例。

1.2 化療方案 根據(jù)患者術(shù)后恢復(fù)情況，第1～2天開始行循環(huán)式腹腔熱灌注化療，每次90 min，1次/d，連續(xù)4 d，第1天和第4天采用奧沙利鉑和氯化鈉配置的腹腔熱灌注液，第2天和第3天采用氟尿嘧啶和氯化鈉配置的腹腔熱灌注液。具體方法詳見參考文獻[2]。所有患者術(shù)后1個月開始全身化療，化療方案為紫杉醇135 mg/m2+順鉑20 mg/m2+替加氟0.8～1 g。4周為1個化療周期，共化療4～6個周期。

1.3 基因多態(tài)性檢測 所有患者術(shù)前或化療前抽取靜脈血2 mL于EDTA試管內(nèi)，置-50 ℃冰箱保存。采用北京天根生化有限公司的全血基因組DNA抽提試劑盒進行DNA提取。探針和引物均由北京賽百盛公司提供和合成。PCR擴增上游引物為5’-TTGTGCTTTCTCTGTCTCCA-3’,下游引物為5’-TCCTCCAGCCTTTCTGATA-3’。PCR反應(yīng)體系及條件參考文獻[4]。PCR-RFLP檢測XRCC1第399號位點基因多態(tài)性。PCR擴增產(chǎn)物由限制性內(nèi)切酶MspⅠ進行酶切。PCR產(chǎn)物10 μL，Buffer 1 μL，內(nèi)切酶0.5 μL，去離子水4 μL，總酶切體系為15.5 μL。酶切產(chǎn)物經(jīng)過消化后采用凝膠成像系統(tǒng)分析電泳結(jié)果。

1.4 隨訪 所有患者采用電話和復(fù)診方式進行隨訪，每6個月進行隨訪1次，隨訪截止日期為2014年2月。隨訪時間為7～48個月，失訪3例，隨訪率為93.9%。

1.5 療效評價 ①毒副作用:主要記錄患者發(fā)生骨髓抑制和消化道不良反應(yīng)情況。②復(fù)發(fā)及生存率:復(fù)查患者胸腹CT和胃鏡，了解患者術(shù)后復(fù)發(fā)情況及術(shù)后生存情況。

1.6 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS 18.0統(tǒng)計軟件進行分析。XRCC1 Arg399Gln基因分布情況采用Hardy-Weinberg遺傳平衡定律進行檢驗；不同基因型的毒副作用的比較采用卡方檢驗或Fisher精確概率法檢驗；不同基因型的無復(fù)發(fā)生存時間和總生存時間采用Kaplan-Meier法進行計算，差異性檢驗采用Log-rank檢驗法。P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 XRCC1 Arg399Gln基因分布情況 49例患者共檢測出野生型(GG)28例(57%)，雜合型(GA)15例(31%)，突變型(AA)6例(12%)?；蛐头植挤螲ardy-Weinberg遺傳平衡(2=2.66，P=0.26),提示該樣本來自同一群體，達到了遺傳平衡。

2.2 XRCC1 Arg399Gln基因多態(tài)性與胃癌毒副作用的關(guān)系 GG、GA和AA基因型發(fā)生骨髓抑制、惡心嘔吐情況比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P均>0.05)。見表1。

表1 XRCC1 Arg399Gln不同基因型毒副作用發(fā)生情況比較 例(%)

注：①采用Fisher精確概率法進行檢驗。

2.3 XRCC1 Arg399Gln基因多態(tài)性與胃癌術(shù)后復(fù)發(fā)的關(guān)系 截止2014年2月，胃癌根治術(shù)后行腹腔熱灌注化療的患者復(fù)發(fā)18例，其中攜帶GG基因型患者9例，無復(fù)發(fā)生存率為68%(19/28)；攜帶GA+AA基因型患者共9例，無復(fù)發(fā)生存率為57%(12/21)。GG基因型無復(fù)發(fā)生存率略高于GA+AA基因型，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(2=1.34，P=0.25)。這兩種基因型患者的無復(fù)發(fā)生存率的Kaplan-Meier曲線見圖1。

圖1 XRCC1 Arg399Gln基因多態(tài)性與胃癌患者術(shù)后無復(fù)發(fā)生存時間的關(guān)系

2.4 XRCC1 Arg399Gln基因多態(tài)性與胃癌術(shù)后死亡的關(guān)系 截止2014年2月，胃癌根治術(shù)后行腹腔熱灌注化療的患者死亡22例，其中攜帶GG基因型患者7例，總生存率為75%(21/28)；攜帶GA+AA基因型患者15例，總生存率為29%(6/21)。GG基因型術(shù)后總生存率顯著高于GA+AA基因型(2=5.75，P=0.02)。這兩種基因型患者的總生存率的Kaplan-Meier曲線見圖2。

圖2 XRCC1Arg399Gln基因多態(tài)性與胃癌患者術(shù)后生存的關(guān)系

3 討 論

胃癌的發(fā)生常常由于癌基因的激活、抑癌基因失活以及DNA修復(fù)基因功能的失調(diào)所導(dǎo)致。進展期胃癌根治術(shù)后常發(fā)生腹腔轉(zhuǎn)移，而術(shù)后進行腹腔熱灌注化療可以清除腹腔游離的癌細胞，有助于控制胃癌腹腔轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)[6]。黃一唯等[7]研究也證實術(shù)中及術(shù)后行腹腔熱灌注化療，可提高胃癌患者術(shù)后的無復(fù)發(fā)生存率及總生存率。奧沙利鉑是一類細胞周期非特異性藥物，通過產(chǎn)生烷化結(jié)合物從而損傷DNA，阻斷腫瘤細胞的復(fù)制和轉(zhuǎn)錄，誘導(dǎo)腫瘤細胞凋亡，抑制腫瘤細胞增殖[8]，損傷后的DNA若能及時修復(fù)，就會產(chǎn)生耐藥，從而影響臨床療效。

XRCC1是一種重要的堿基切除修復(fù)基因，位于19號染色體的長臂(ql3.2—13.3)，全長33 kb。研究發(fā)現(xiàn)，XRCC1基因第10號外顯子上399位密碼子編碼的氨基酸Arg(G)→Gln(A)的改變，改變了對DNA損傷修復(fù)的效能，同時由于XRCC1基因的變異，會影響基因編碼的mRNA和蛋白水平，導(dǎo)致與其他功能性SNPs的連鎖不平衡，從而影響奧沙利鉑化療的效果[9]。研究已證實XRCC1 Arg399Gln基因多態(tài)性與肺癌[10]、卵巢癌[11]、大腸癌[12]等對鉑類為基礎(chǔ)的化療敏感性及預(yù)后密切相關(guān)，但在胃癌患者中，XRCC1 Arg399Gln基因多態(tài)性與鉑類化療及預(yù)后的敏感性尚存在爭議。石會勇等[5]對36例中晚期胃癌患者行新輔助化療，發(fā)現(xiàn)攜帶AA基因型的患者腫瘤細胞壞死率明顯高于AG和GG基因型，提示中晚期胃癌新輔助化療組XRCC1基因399位點AA多態(tài)性與腫瘤細胞壞死率存在相關(guān)性。但Liu等[13]對62例晚期胃癌患者觀察發(fā)現(xiàn)，采用奧沙利鉑為基礎(chǔ)的化療，攜帶AA基因型的患者存活時間長于攜帶GG型患者。高長明等[14]對91例晚期胃癌患者研究發(fā)現(xiàn)，XRCC1基因多態(tài)性與胃癌化療敏感性沒有相關(guān)性。

本研究結(jié)果顯示，進展期胃癌患者術(shù)后采用腹腔熱灌注聯(lián)合全身化療能提高患者的無復(fù)發(fā)生存時間和總生存期。主要毒副作用為骨髓抑制、胃腸道反應(yīng)，患者均能耐受，且不同基因分型間毒副作用發(fā)生情況比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義。研究還發(fā)現(xiàn)攜帶GG基因型的患者無復(fù)發(fā)生存時間長于攜帶GA+AA基因型患者，但生存曲線比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義；攜帶GG基因型的患者總生存時間顯著高于攜帶GA+AA基因型患者。這與大部分研究結(jié)果是一致的。黃朝暉等[4]研究發(fā)現(xiàn)攜帶GG基因型的胃癌患者復(fù)發(fā)率和病死率均顯著低于攜帶GA或AA基因型患者。Huang等[15]研究發(fā)現(xiàn)攜帶GG基因型的胃癌患者無復(fù)發(fā)生存期和總生存期均顯著優(yōu)于攜帶GA和AA基因型患者。邱東明等[16]研究提示，晚期胃癌Arg/Arg基因型患者對鉑類化療藥物有效率顯著高于Arg/Gln+Gln/Gln基因型患者，且疾病進展時間為10個月，顯著長于Arg/Gln+Gln/Gln基因型患者的7.5個月。最新發(fā)表的一項Meta分析[17]結(jié)果也提示，攜帶Gln/Gln基因型的患者對鉑類藥物化療更敏感。

總之，XRCC1 Arg399Gln的基因多態(tài)性與進展期胃癌患者術(shù)后行奧沙利鉑腹腔內(nèi)熱灌注化療的預(yù)后有關(guān)，可用于指導(dǎo)該類藥物的個體化使用，有助于提高臨床治療的針對性和可預(yù)見性。

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Study on the correlation between the gene polymorphism of XRCC1 Arg399Gln and the effect of postoperative intraperitoneal hyperthermic perfusion chemotherapy on advanced gastric cancer

CUI Haibin, BAI Xiyong, GE Huaie, ZHANG Wei

(The Centre Hospital of Cangzhou City, Cangzhou 061001, Hebei, China)

Objective It is to approach the correlation between the gene polymorphism of X-ray repair cross-complemtary protein-1(XRCC1) Arg399Gln and the effect of intraperitoneal hyperthermic perfusion chemotherapy of oxaliplatin-based on postoperative patients of advanced gastric cancer. Methods A total of 49 patients with advanced gastric cancer confirmed by pathological examination were selected, and received early cyclic intraperitoneal hyperthermic perfusion of oxaliplatin combined with intravenous chemotherapy after surgery. The gene polymorphisms of XRCC1 Arg399Gln were observed by polymerase chain reaction-Restriction fragment length polymorphism (PCR-RFLP). Results Of the 49 patients with advanced gastric cancer, the frequencies of XRCC1 genotype of Arg399Arg (GG), Arg399Gln (GA), Gln399Gln (AA) were 57% (28/49), 31% (15/49) and 12% (6/49) respectively. There were no significant differences in incidence of side effect between genotype of GG, GA and AA (allP>0.05). The recurrence rate of patients with GG genotype after operation was lower than that of the patients with the GA and AA genotypes, but there was no significant difference (P>0.05). The postoperative survival rate of patients with GG genotype was significantly higher than that of patients with GA and AA genotype (allP<0.05). Conclusion The gene polymorphism of XRCC1 Arg399Gln is correlated with the prognosis of advanced gastric cancer patients treated with early cyclic intraperitoneal hyperthermic perfusion chemotherapy of oxaliplatin-based.

advanced gastric cancer; X-ray repair cross-complemtary protein-1; oxaliplatin; intraperitoneal hyperthermic perfusion chemotherapy; gene polymorphism

崔海濱，男，主治醫(yī)師，主要從事胃腸腫瘤及乳腺腫瘤的研究及治療工作。

白希永，E-mail：chess_bxy@126.com

10.3969/j.issn.1008-8849.2015.12.004

R735.2

A

1008-8849(2015)12-1264-04

2014-06-15