溫陽通痹丸質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

謝強(qiáng) 王志梅 鄔偉魁

（梅州市食品藥品監(jiān)督檢驗(yàn)所，廣東 梅州 514071）

溫陽通痹丸質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

謝強(qiáng) 王志梅 鄔偉魁

（梅州市食品藥品監(jiān)督檢驗(yàn)所，廣東 梅州 514071）

目的：建立溫陽通痹丸的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法：采用薄層色譜法（TLC）鑒別溫陽通痹丸中的赤芍和麻黃，采用高效液相色譜法（HPLC）測(cè)定赤芍中芍藥苷的含量。色譜條件：色譜柱為島津SHIADZU VP-ODS（250 mm ×4.6 mm，5μm），流動(dòng)相為乙腈-水（18∶82），流速1.0 m L/m in，柱溫30℃，檢測(cè)波長(zhǎng)為230 nm。結(jié)果：TLC的斑點(diǎn)清晰，陰性對(duì)照無干擾；芍藥苷在10.22～ 204.40μg/m L（r=0.999 9）范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，平均回收率為98.45%，RSD為0.7%（n=6）。結(jié)論：所建標(biāo)準(zhǔn)可用于溫陽通痹丸的質(zhì)量控制。

溫陽通痹丸；芍藥苷；鹽酸麻黃堿；薄層色譜法；高效液相色譜法

溫陽通痹丸為梅州市人民醫(yī)院的制劑，臨床療效良好，需求較大。該制劑主要由赤芍、麻黃、黃芪、紅參、乳香等藥味組成；具有益氣養(yǎng)陰，活血祛瘀，溫陽通痹的作用。用于糖尿病四肢麻木、涼、痛、爛及全身疼痛等癥。赤芍為方中君藥，可清熱涼血，散瘀止痛，用于熱入營(yíng)血，溫毒發(fā)斑，吐血衄血，目赤腫痛，肝郁脅痛，經(jīng)閉痛經(jīng)，癥瘕腹痛，跌撲損傷，癰腫瘡瘍[1]。藥理研究表明，赤芍具有抗炎、抗凝血、免疫調(diào)節(jié)等作用[2]。麻黃性溫，可溫經(jīng)通陽，為方中臣藥。赤芍和麻黃的主要化學(xué)成分分別為芍藥苷和鹽酸麻黃堿。原標(biāo)準(zhǔn)已不能有效控制制劑質(zhì)量，本文參考現(xiàn)行藥典收載方法及文獻(xiàn)報(bào)道[3-5]，研究建立了赤芍、麻黃的薄層色譜法（TCL）鑒別和高效液相色譜法（HPLC）測(cè)定芍藥苷含量的方法。該方法簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確、重復(fù)性好，可更好地控制溫陽通痹丸的質(zhì)量。

1 儀器與試藥

高效液相色譜儀：Agilent 1100；色譜柱：SHIADZU VP-ODS（250 mm ×4.6 mm，5μm），SN：8022538；電子分析天平：AB204-N，NO：1202410309；超聲儀：KQ250DE；硅膠G（青島海洋化工集團(tuán)公司，批號(hào)：0120213，自制薄層板規(guī)格為10 ×20 cm，厚0.5 mm）；乙腈為色譜純；水為超純水（自制）；其他試劑均為分析純。芍藥苷對(duì)照品（批號(hào)：110736-201136），鹽酸麻黃堿對(duì)照品（批號(hào)：171241-200506）均由中國藥品生物制品檢定所提供；溫陽通痹丸（梅州市人民醫(yī)院提供，批號(hào)：20130502，20130715，20131007）。

2 方法與結(jié)果

2.1 TLC鑒別

2.1.1 赤芍取本品粉末5 g，加乙醇20 m L，超聲處理30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)铀?5 m L使溶解，濾過，濾液用乙醚振搖提取2次，每次15 m L，棄乙醚液，水溶液用水飽和的正丁醇振搖提取3次，每次15 m L，合并正丁醇提取液，蒸干，殘?jiān)右掖? m L使溶解，作為供試品溶液。另取芍藥苷對(duì)照品，加乙醇制成每1 m L含1 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。另按處方配比及制法制備缺赤芍的陰性樣品，同上述供試品溶液制備法制備陰性對(duì)照溶液。照TLC（附錄ⅥB）試驗(yàn)，吸取上述3種溶液各5μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以二氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸（40∶5∶10∶0.2）為展開劑，展開，取出晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，陰性無干擾。見圖1。

2.1.2 麻黃取本品粉末5 g，加乙醚20 m L與濃氨試液1 m L，密塞，放置2小時(shí)，時(shí)時(shí)振搖，濾過。藥渣用乙醚15 m L分3次洗滌，濾過，合并濾液，加鹽酸乙醇溶液（1→20）1 m L，搖勻，蒸干，殘?jiān)蛹状? m L使溶解，濾過，濾液作為供試品溶液。另取鹽酸麻黃堿對(duì)照品，加甲醇制成每1 m L含1 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。另按處方配比及制法制備缺麻黃的陰性樣品，同上述供試品溶液制備法制備陰性對(duì)照溶液。照TLC（附錄ⅥB）試驗(yàn)，吸取上述3種溶液各5μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以二氯甲烷-甲醇-濃氨試液（40∶7∶1）為展開劑，展開，取出晾干，噴以茚三酮試液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性無干擾。見圖2。

圖1 赤芍TLC圖

圖2 麻黃TLC圖

2.2 含量測(cè)定

2.2.1 色譜條件色譜柱：島津 SHIADZU VP-ODS（250 mm ×4.6 mm，5μm）；流動(dòng)相：乙腈-水（18∶82）；流速：1.0 m L/m in；柱溫：30℃；檢測(cè)波長(zhǎng)為230 nm；進(jìn)樣量為10μL。

2.2.2 溶液的制備①對(duì)照品溶液：取芍藥苷對(duì)照品適量，加甲醇制成每1 m L含40μg的溶液。②供試品溶液：取本品粉末約 1 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50 m L，密塞，稱定質(zhì)量，超聲處理（功率250 W，頻率40 kHz）30 m in，取出，放冷，稱定質(zhì)量，用甲醇補(bǔ)足減失質(zhì)量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。③陰性對(duì)照溶液：按處方比例及工藝，制成不含赤芍的陰性樣品，并按上述供試品溶液的制備方法制備陰性對(duì)照溶液。

2.2.3 專屬性考察吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液、陰性對(duì)照溶液各10μL，分別按上述色譜條件進(jìn)行分析，記錄色譜圖。結(jié)果陰性對(duì)照色譜在與對(duì)照品色譜相應(yīng)位置上無干擾峰出現(xiàn)，說明處方中其他成分對(duì)測(cè)定結(jié)果無影響。芍藥苷的保留時(shí)間約為6 m in，分離度大于1.5，理論板數(shù)按芍藥苷峰計(jì)算不低于5 000。見圖3。

圖3 芍藥苷HPLC圖

2.2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制定分別精密吸取芍藥苷對(duì)照溶液 0.5，1.0，2.0，4.0，8.0，10.0 m L置 10 m L量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，分別取 10μL注入液相色譜儀中，測(cè)定芍藥苷的含量，以進(jìn)樣濃度（X）為橫坐標(biāo)，以峰面積（Y）為縱坐標(biāo)，得回歸方程為

Y=13.757 3X－0.593 7。

r=0.999 9，結(jié)果表明，芍藥苷在 10.22～204.40μg/m L范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

2.2.5 精密度試驗(yàn)精密吸取對(duì)照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)得芍藥苷峰面積的RSD為0.71%，表明儀器精密度良好。

2.2.6 重復(fù)性試驗(yàn)取同一批樣品（批號(hào)：20130502）6份，依法制備供試品溶液并測(cè)定含量，結(jié)果樣品中含芍藥苷平均值為 1.66 mg/g，RSD為 1.09%（n＝6）。

2.2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)取同一份供試品溶液（批號(hào)：20130502），分別于0，1，2，4，8，12，24 h進(jìn)樣10μL，測(cè)定其峰面積，結(jié)果芍藥苷在0～ 24 h測(cè)定的峰面積的RSD為 0.35%，表明供試品溶液在24小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。

2.2.8 加樣回收率試驗(yàn)取已知含量的同一批樣品（批號(hào)：20130502）適量，精密加入一定量的芍藥苷對(duì)照品，按供試品溶液的制備方法制備加樣供試品溶液，測(cè)定，計(jì)算加樣回收率。結(jié)果見表1。

2.2.9 樣品含量測(cè)定分別取3批樣品按2.2.2項(xiàng)下方法制得供試品溶液，進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算含量。結(jié)果 3批樣品中芍藥苷含量分別為 1.66，1.65，1.61 mg/g。

根據(jù)以上3批樣品的含量測(cè)定，確定本品的含量限度為：本品每1 g含赤芍以芍藥苷（C23H28O11）計(jì)，不得少于1.3 mg。

表1 加樣回收試驗(yàn)

3 討論

原標(biāo)準(zhǔn)為廣東省食品藥品監(jiān)督管理局醫(yī)療機(jī)構(gòu)制劑注冊(cè)標(biāo)準(zhǔn)——粵ZB20110015（Z）。原標(biāo)準(zhǔn)僅對(duì)麻黃（鹽酸麻黃堿）進(jìn)行了TLC鑒別，無含量測(cè)定方法。原標(biāo)準(zhǔn)中供試品的提取溶劑為三氯甲烷，本研究更換了試劑，優(yōu)化了供試品的制備方法；原展開系統(tǒng)為三氯甲烷-甲醇-濃氨試液（20∶5∶0.5），使用了毒性較大的三氯甲烷，本研究通過實(shí)驗(yàn)更換成毒性較小的試劑并調(diào)整了展開劑的比例，調(diào)整后的展開系統(tǒng)為二氯甲烷-甲醇-濃氨試液（40∶7∶1），實(shí)驗(yàn)所得色譜斑點(diǎn)清晰，供試品色譜在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上斑點(diǎn)對(duì)應(yīng)良好，且陰性對(duì)照無干擾。

芍藥苷含量測(cè)定流動(dòng)相選擇時(shí)，曾參照現(xiàn)行藥典，流動(dòng)相為乙腈-0.05 mol/L磷酸二氫鉀溶液（12∶88），但保留時(shí)間較長(zhǎng)，最后選用乙腈-水（18∶82）[6]，縮短了保留時(shí)間。

值得注意的是，目前對(duì)赤芍的質(zhì)量控制主要是根據(jù)芍藥苷的含量高低來進(jìn)行評(píng)價(jià)，近年來，有研究者[7]采用HPLC建立了評(píng)價(jià)赤芍質(zhì)量的特征指紋圖譜分析方法，指紋圖譜在制劑[8]質(zhì)量評(píng)價(jià)中的應(yīng)用也日漸增多。此外，一測(cè)多評(píng)[9-10]也是近年來興起的符合中藥特點(diǎn)的中藥產(chǎn)品質(zhì)量控制[11]模式。很多醫(yī)療機(jī)構(gòu)中藥制劑的臨床需求量都較大，但其質(zhì)量控制總體水平尚落后于市售中成藥。在一些醫(yī)院制劑大品種的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提高時(shí)，建議有條件的醫(yī)院引進(jìn)先進(jìn)的中藥質(zhì)量控制技術(shù)，嚴(yán)格控制產(chǎn)品的質(zhì)量，確保制劑的臨床安全性和有效性。

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Studies on Quality Standard of W enyang Tongbi Pills

Xie Qiang,Wang Zhimei，Wu Weikui（Meizhou Institute for Food and Drug Control，Guangdong Meizhou 514071，China）

Objective:To establish the quality standard of wenyang tongbi pills.M ethods:TLC was used to determine Paeonide radix rubra and Ephedrae herba in wenyang tongbi pills，and HPLC was used to determ ine the content of paeoniflorin.A chromatographic column of SHIADZU VP-ODS（250 mm ×4.6 mm，5μm）was used w ith a mobile phase of acetonitrile-water （18∶82）at a flow rate of 1.0 m L/m in,the detection wavelength was at 230 nm and the room temperature was at 30℃.Results:The spots of TLC were fairly clear and the negative control w ithout interference.A good linear relationship of paeoniflorin was from 10.22 to 204.40μg/m L（r= 0.999 9）.The average recovery was 98.45%,RSD was 0.7%（n=6）.Conclusion:The established standard is applicable for the quality control of wenyang tongbi pills.

Wenyang Tongbi Pills；Paeoniflorin；Ephedrin Hydrochloride；TLC；HPLC

10.3969/j.issn.1672-5433.2015.05.007

2015-01-23）

謝強(qiáng)，男，副主任藥師。主要從事藥品質(zhì)量研究工作。E-mail：xqmzmzb@21cn.net

王志梅，女，主管中藥師。主要從事藥品檢驗(yàn)及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究工作。通訊作者E-mail：wangzhimei@gdda.gov.cn