大黃酚通過(guò)抗氧化應(yīng)激改善高血氨小鼠學(xué)習(xí)記憶功能障礙

薛占霞，高永山，沈麗霞，薛貴平

（河北北方學(xué)院1．藥學(xué)系藥理教研室、2．附屬第一醫(yī)院心臟外科，河北張家口 075000）

大黃酚通過(guò)抗氧化應(yīng)激改善高血氨小鼠學(xué)習(xí)記憶功能障礙

薛占霞1，高永山2，沈麗霞1，薛貴平1

（河北北方學(xué)院1．藥學(xué)系藥理教研室、2．附屬第一醫(yī)院心臟外科，河北張家口 075000）

Antioxidantsmediatechrysophanol-improved learning and memory impairment in mice induced by ammonium chloride

XUE Zhan-xia1，GAO Yong-shan2，SHEN Li-xia1，XUE Gui-ping1
（1．Dept of Pharmacology，2．Dept of Cardiac Surgery，the First Affiliated Hospital，Hebei North University，Zhangjiakou Hebei 075000，China）

網(wǎng)絡(luò)出版時(shí)間：2015－8－10 14：37 網(wǎng)絡(luò)出版地址：http：／／www．cnki．net／kcms／detail／34．1086．R．20150810．1437．030．html

氨中毒學(xué)說(shuō)在肝性腦?。╤epatic encephalopathy，HE）的發(fā)生發(fā)展中占重要地位。相關(guān)研究已明確氨的中樞神經(jīng)毒性作用［1］，包括學(xué)習(xí)記憶障礙［2］。

研究表明，大黃酚具有改善阿爾茨海默?。ˋlzheimer’s disease，AD）患者的學(xué)習(xí)記憶和認(rèn)知功能、提高抗缺氧化能力等多種藥理作用［3］。本研究先建立高血氨小鼠模型，通過(guò)給予大黃酚，來(lái)探討大黃酚對(duì)氨誘導(dǎo)小鼠學(xué)習(xí)記憶功能障礙的改善作用，報(bào)道如下。

1　材料與方法

1．1材料 昆明種、健康♂小鼠，體質(zhì)量25－30 g，由中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供（許可證編號(hào)：SCXK京2004 －0001）。氯化銨購(gòu)自Sigma（St．Louis，MO，USA），生理鹽水配制濃度為25.0 g·L－1的溶液備用。大黃酚購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所，以N，N－二甲基甲酰胺（DMF）∶吐溫80∶生理鹽水＝1∶1∶8的溶劑助容，配制低、中、高劑量大黃酚單體溶液（0.01、0.1、1.0 g·L－1）［4］。

1．2動(dòng)物分組與給藥 75只小鼠隨機(jī)分為5組，注射藥物體積均為0.1 ml·（10 g）－1。對(duì)照組：腹腔注射生理鹽水，1 h后再次注射相同體積的溶劑（DMF∶吐溫80∶生理鹽水＝1∶1∶8）；模型組：腹腔內(nèi)注射氯化銨，1 h后注射溶劑；治療組：注射氯化銨1 h后注射不同濃度大黃酚。各組均為每周前4 d給藥，連續(xù)4周。

1．3Morris水迷宮實(shí)驗(yàn) 用藥停止后d 2進(jìn)行Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)訓(xùn)練（n＝8）。水迷宮實(shí)驗(yàn)采用平均逃避潛伏期和游泳總距離兩個(gè)參數(shù)反映小鼠空間學(xué)習(xí)記憶成績(jī)。

1．4小鼠血氨及腦氨濃度測(cè)定及腦內(nèi)氧化應(yīng)激指標(biāo)測(cè)定行為學(xué)實(shí)驗(yàn)后，快速斷頸處死小鼠，迅速取其全血和大腦皮層組織。血樣經(jīng)肝素抗凝、離心，收集血漿備用；大腦樣本分成兩份并稱(chēng)重，分別用于腦氨濃度測(cè)定，腦內(nèi)氧化應(yīng)激／硝化應(yīng)激指標(biāo)測(cè)定，包括丙二醛（malonaldehyde，MDA）、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（glutathione peroxidase，GSH-Px）、一氧化氮（nitricoxide，NO）及一氧化氮合酶（nitricoxide synthase，NOS）。

1．5統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 全部數(shù)據(jù)采用SPSS 13．0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，以±s表示，組間比較采用F檢驗(yàn)。

2　結(jié)果

2．1高血氨小鼠血氨及腦氨水平 對(duì)照組血氨及腦氨濃度分別為（0.37±0.07）和（0.72±0.04）μmol·kg－1腦組織，且腦－血氨濃度比值大約是2。與對(duì)照組相比，模型組全血及腦內(nèi)氨濃度分別升高了260%和460%（P＜0.05），且腦－血氨比值增加到3。大黃酚處理組不影響全血及腦內(nèi)氨濃度水平。

2．2Morris水迷宮實(shí)驗(yàn) 對(duì)照組小鼠平均逃避潛伏期（35.4±7.2）s，游泳總路徑（548.3±200.7）cm。與對(duì)照組比較，模型組小鼠平均逃避潛伏期和游泳總路徑分別明顯延長(zhǎng)了52%和67%（P＜0.01）；與模型組比較，大黃酚0.1和1.0 g·L－1組小鼠平均逃避潛伏期縮短了29%和43%，游泳總路徑縮短了29%和33%（P＜0.01）；大黃酚0.01 g·L－1組小鼠學(xué)習(xí)記憶功能下降無(wú)明顯改善作用。

2．3大黃酚對(duì)高血氨小鼠腦內(nèi)氧化應(yīng)激指標(biāo)的影響 對(duì)照組MDA、GSH-Px、SOD和NO含量分別為（0.85±0.05）mmol·g－1蛋白、（18.14±6.37）kU·g－1蛋白、（29.18± 1.15）kU·g－1蛋白和（3.93±0.78）μmol·g－1蛋白，NOS活性為（1.29±0.37）kU·g－1蛋白。與對(duì)照組比較，模型組MDA和NO含量及NOS活性分別升高了414%、54%和200%（P＜0.01），SOD及GSH-Px含量分別下降了48%和49%（P＜0.01）；與模型組比較，大黃酚0.1和1.0 g·L－1組MDA和NO含量及NOS活性分別降低了34%、46%、21%、30%、37%和58%（P＜0.01），SOD及GSH-Px含量分別升高了66%、74%、45%和72%（P＜0.01）。而大黃酚

0.01g·L－1組不引起上述指標(biāo)的改變。

3　討論

本實(shí)驗(yàn)采用多次腹腔注射小劑量氯化銨建立小鼠高血氨模型［2］。腦組織對(duì)氨極敏感，并能迅速攝取氨，腦－血氨濃度比在正常情況大約是2，在急、慢性肝衰竭比值可達(dá)到3 ～8［5］。本研究結(jié)果與上述報(bào)道一致。此外，本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，模型組小鼠出現(xiàn)空間學(xué)習(xí)記憶功能障礙。大黃酚并不能降低腦氨或血氨濃度，卻可以改善高血氨誘導(dǎo)小鼠空間學(xué)習(xí)記憶障礙，提示大黃酚改善高血氨小鼠學(xué)習(xí)記憶障礙的機(jī)制不是直接降低腦氨或血氨濃度，可能與拮抗氨誘導(dǎo)氧化應(yīng)激／硝化應(yīng)激有關(guān)。

模型組小鼠腦組織中MDA和NO含量及NOS活性明顯增加，GSH-Px、SOD含量明顯下降。MDA是氧自由基損害細(xì)胞后產(chǎn)生的過(guò)氧化物，其在組織中的水平與細(xì)胞氧化損傷的程度呈正相關(guān)［6］。GSH-Px、SOD等抗氧化物可清除自由基，但隨自由基產(chǎn)生增加，GSH-Px、SOD等抗氧化物消耗相應(yīng)增多，組織內(nèi)含量降低。另外，氨誘導(dǎo)NOS活性升高及NO生成增加，進(jìn)一步增強(qiáng)氨誘導(dǎo)超氧陰離子增加及抗氧化物含量下降的作用。上述指標(biāo)的改變揭示高血氨導(dǎo)致細(xì)胞氧化／抗氧化動(dòng)態(tài)平衡紊亂，可能影響神經(jīng)遞質(zhì)谷氨酸代謝紊亂，并損害長(zhǎng)時(shí)程增強(qiáng)的產(chǎn)生或維持，從而影響學(xué)習(xí)記憶功能。大黃酚通過(guò)拮抗氨誘導(dǎo)小鼠氧化應(yīng)激／硝化應(yīng)激來(lái)改善氨誘導(dǎo)小鼠學(xué)習(xí)記憶功能障礙。

綜上所述，大黃酚改善高血氨誘導(dǎo)小鼠學(xué)習(xí)記憶功能障礙的機(jī)制可能包括氧化應(yīng)激、硝化應(yīng)激及其它。但是否還涉及其他方面的機(jī)制還有待進(jìn)一步闡述。

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中國(guó)圖書(shū)分類(lèi)號(hào)：R-332；R284．1；R338．64；R349．1；R916.3

關(guān)鍵詞：大黃酚；高血氨；氧化應(yīng)激；硝化應(yīng)激；Morris水迷宮；學(xué)習(xí)記憶

Key words：chrysophanol；hyperammonemia；oxidative stress；nitrosative stress；Morris water maze；learning and memory

作者簡(jiǎn)介：薛占霞（1982－），女，博士，講師，研究方向：神經(jīng)藥理學(xué)，E-mail：xuezhanxia412＠163．com；沈麗霞（1970－），女，博士，教授，碩士生導(dǎo)師，研究方向：中藥生化作用機(jī)制，通訊作者，E-mail：shenlixiacn＠sina．com

基金項(xiàng)目：河北省教育廳優(yōu)秀青年基金資助項(xiàng)目（No Y2012002）

收稿日期：2015－05－09，修回日期：2015－06－26

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

文章編號(hào)：1001－1978（2015）09－1330－02

doi：10．3969／j．issn．1001－1978．2015．09．030