蒙醫(yī)溫針療法對(duì)哮喘大鼠模型病理學(xué)改變的觀察△

秀 蘭 阿古拉

(1.北京中醫(yī)藥大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院在讀博士研究生，北京 100029;2.內(nèi)蒙古民族大學(xué)附屬醫(yī)院，內(nèi)蒙古 通遼 028001;3.內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010010)

支氣管哮喘，是一種發(fā)生頻率極高的呼吸系統(tǒng)疾病，這類(lèi)慢性氣道炎癥由肥大細(xì)胞、T 細(xì)胞及嗜酸性粒細(xì)胞等多種細(xì)胞及其成分直接或間接參與的氣道慢性非特異性炎癥。支氣管哮喘是嚴(yán)重危害人民群眾健康的常見(jiàn)病，多發(fā)病。根據(jù)世衛(wèi)組織統(tǒng)計(jì)，全球哮喘患者已經(jīng)突破3 億以上人，且兒童的發(fā)病率較高，21 世紀(jì)中葉之后以老年人群中哮喘發(fā)病率亦呈上升趨勢(shì)。數(shù)十年來(lái)，對(duì)支氣管哮喘的治療進(jìn)展緩慢，在現(xiàn)階段，溫針?lè)乐蜗呐R床研報(bào)道日益增多［1］;我們?cè)谂R床上采用溫針治療哮喘，取得了較好療效。目前臨床多采用激素(地塞米松)可緩解哮喘臨床癥狀，目前認(rèn)為地塞米松影響Eos(嗜酸性粒細(xì)胞)浸潤(rùn)的主要機(jī)制為抑制Eos(嗜酸性粒細(xì)胞)的趨化和誘導(dǎo)Eos(嗜酸性粒細(xì)胞)凋亡。地塞米松可作為多種炎癥介質(zhì)釋放的抑制劑，而其中許多介質(zhì)可誘導(dǎo)Eos(嗜酸性粒細(xì)胞)的趨化，如PAF(血小板活化因子)、IL-5(白介素-5)等。上皮細(xì)胞是Eos(嗜酸性粒細(xì)胞)趨化因子的主要來(lái)源［2］，亦是激素的主要IE 細(xì)胞，其可使上皮細(xì)胞因子的表達(dá)顯著下降。而溫針治療的干預(yù)機(jī)理目前主要機(jī)制為抑制Eos(嗜酸性粒細(xì)胞)的趨化和誘導(dǎo)Eos(嗜酸性粒細(xì)胞)凋亡有關(guān)，溫針治療支氣管哮喘機(jī)理與激素治療哮喘相似，尚待今后進(jìn)一步的研究。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：由昆明醫(yī)學(xué)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供的體重(250 ～300)g 左右的健康大鼠，雌雄各半，共40 只。隨機(jī)分成正常對(duì)照組(空白組)，陽(yáng)性對(duì)照組(模型組)，溫針組(治療組)，西藥組(地塞米松組)共4 組，每組各10 只。

1.2 材料

1.2.1 主要試劑：卵清白蛋(OVA)(美國(guó)Sigma 公司)，水合氯醛：天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司;40%甲醛：廣州化學(xué)試劑廠;1%鹽酸：廣州化學(xué)試劑廠;1%稀氨水：廣州化學(xué)品試劑廠;二甲苯：天津市富宇精細(xì)化工有限責(zé)任公司;無(wú)水磷酸氧二鈉：廣州市番禹強(qiáng)化工廠;PBS 緩沖液：賽默飛世爾生物化學(xué)制品有限公司;自制10%中性緩沖福爾馬林固定液：10ml 40%甲醛溶液 + 90ml PBS 緩沖液(PH =7.2);其余試劑均化驗(yàn)室提供。

1.2.2 主要儀器設(shè)備：醫(yī)用超聲霧化器(CSW)1AB 型霧化器，廣州汕頭光電子研究所生產(chǎn))，玻璃鐘罩，注射器;JA1203N 型分析天平：上海精密科學(xué)儀器有限責(zé)任公司;電子天平，型號(hào)：BL150/cl;萊卡切片機(jī)Leica RM2135;光學(xué)顯微鏡Olympus U- PMTVC;尼康D90 單反攝像機(jī)(Nikon);MLY-Ⅰ型蒙醫(yī)療術(shù)溫針儀(內(nèi)蒙古醫(yī)學(xué)院蒙醫(yī)藥學(xué)院研制，專利號(hào)ZL201120058078.0);特制蒙醫(yī)銀針(0.5mm×30mm，內(nèi)蒙古元陽(yáng)中蒙醫(yī)科技開(kāi)發(fā)有限責(zé)任公司提供)。

1.3 實(shí)驗(yàn)步驟

1.3.1 參照OVA 致敏法制備大鼠哮喘模型［2］，將40 只健康大鼠隨機(jī)分為空白組、陽(yáng)性對(duì)照組(模型組)、溫針組(治療組)、西藥組(地塞米松組)，每組10 只。用10%的卵清白蛋白生理鹽水1ml 腹腔注射，2 周后將致敏大鼠放入半密閉的玻璃鐘罩內(nèi)，以超聲霧化器噴1%的卵清白蛋白溶液霧化吸入20min，以大鼠腹肌出現(xiàn)明顯收縮(用力呼吸的標(biāo)志)，呼吸頻率增快、鼻翼煽動(dòng)為陽(yáng)性，連續(xù)14 天，每天1次，。陽(yáng)性對(duì)照組、溫針組，西藥組均按此方法復(fù)制哮喘大鼠模型。

1.3.2 穴位選擇：穴位的定位參照《蒙醫(yī)傳統(tǒng)療法》赫依穴、母肺穴、子肺穴分別取第1、4、5 胸椎上凹正中處。

1.3.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.3.1 空白組：不給予任何處理，至第30 天開(kāi)始予蒸餾水2ml/只灌胃。

1.3.3.2 陽(yáng)性對(duì)照組(模型組)：制備哮喘氣道重建模型，使大鼠處于致敏狀態(tài)14 天。自第15 天起幵始霧化吸入1%卵清蛋白生理鹽水溶液以激發(fā)支氣管哮喘，隔日1 次，每次激發(fā)時(shí)間為20 分鐘。

1.3.3.3 治療組(溫針組)：哮喘氣道重塑模型大鼠，于注射抗原液第15 天開(kāi)始溫針刺激，每次溫針治療均在霧化前進(jìn)行。穴位選取“赫依穴”“母肺穴”“子肺穴”，將大鼠固定后，用特制銀針(直徑0.5mm，長(zhǎng)度3 cm)斜刺后，再接蒙醫(yī)溫針儀，電流強(qiáng)度為100mA，溫度為40℃，留針15min 隔日1 次，7 次1 療程，2 療程后取材檢驗(yàn)。

1.3.3.4 西藥組(地塞米松組)：每次霧化前30 分鐘給予地塞米松0.5 mg/kg 腹腔內(nèi)注射，其佘均同模型組。

1.3.4 取材：實(shí)驗(yàn)結(jié)束后以10%水合氯醛(30mg/kg)腹腔注射麻醉大鼠，每組均迅速解剖截取上肺部組織進(jìn)行固定后送病理科做切片。

2 結(jié) 果

各組大鼠支氣管肺組織石蠟切片病理觀察結(jié)果表明［3］：光學(xué)顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)，正常組(空白組)大鼠支氣管-肺組織各層結(jié)構(gòu)清晰，黏膜層下未見(jiàn)明顯炎癥細(xì)胞和嗜酸性粒細(xì)胞浸潤(rùn)。陽(yáng)性對(duì)照組(模型組)［4］支氣管-肺組織黏膜層下有明顯炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)及嗜酸性粒細(xì)胞浸潤(rùn)，黏膜層及黏膜下有水腫，少量充血。治療組(溫針組)和西藥組(地塞米松組)大鼠支氣管一肺組織結(jié)構(gòu)較清晰，黏膜及黏膜下層充血、水腫明顯減輕，黏膜層下可見(jiàn)少量炎癥細(xì)胞及嗜酸性粒細(xì)胞浸潤(rùn)。

3 討 論

支氣管哮喘從癥侯分析屬于蒙醫(yī)“赫依”性疾病范疇內(nèi)［5］。是由于長(zhǎng)期環(huán)境污染及氣候的驟變等誘因?qū)е氯厥プ杂械纳砥胶猓榷?、赫?氣)的功能紊亂而發(fā)本病。治宜以調(diào)體素，行赫依(氣)為總則。以蒙醫(yī)學(xué)理論赫依(氣)具有主司心靈開(kāi)竅、五官清晰、促發(fā)欲望，具有調(diào)節(jié)希拉與巴達(dá)干的功能活動(dòng)的作用。而赫依(氣)的正常生理功能失調(diào)是本病的主要致病因素。

蒙醫(yī)溫針療術(shù)是一種行之有效的外治方法［6］，其結(jié)合現(xiàn)代電子技術(shù)研制而成的溫針儀，可以達(dá)到傳統(tǒng)蒙醫(yī)溫針的作用。通過(guò)體外穴位刺激后相關(guān)臟腑功能得以恢復(fù)。具有改善氣血循行、調(diào)節(jié)赫依、提高機(jī)體免疫功能，激發(fā)調(diào)動(dòng)和增強(qiáng)機(jī)體的抗病能力很好的抗炎等作用。阿古拉［7］等研究的蒙醫(yī)溫針可對(duì)足腫脹炎癥模型大鼠明顯減輕作用，表明蒙醫(yī)溫針可明顯抗炎作用。

通過(guò)實(shí)驗(yàn)，溫針組和西藥組大鼠支氣管一肺組織和模型組比較結(jié)構(gòu)較清晰，黏膜及黏膜下層充血、水腫明顯減輕，黏膜層下面可見(jiàn)少量炎癥細(xì)胞和嗜酸性粒細(xì)胞浸潤(rùn)，而溫針組的炎性細(xì)胞浸潤(rùn)情況較西藥組(地塞米松組)更為減輕。說(shuō)明我們釆用的溫針、及地塞米松(西藥)干預(yù)后均能使EOS(嗜酸性粒細(xì)胞)的浸潤(rùn)明顯減輕，而溫針的作用更為明顯。目前認(rèn)為地塞米松類(lèi)影藥物響Eos(嗜酸性粒細(xì)胞)浸潤(rùn)的主要機(jī)制為抑制Eos(嗜酸性粒細(xì)胞)的趨化和誘導(dǎo)嗜酸性粒細(xì)胞凋亡。地塞米松可作為多種炎癥介質(zhì)釋放的抑制劑，而其中許多介質(zhì)可誘導(dǎo)Eos(嗜酸性粒細(xì)胞)的趨化，如PAF(血小板活性因子)和IL-5(白介素-5)等。上皮細(xì)胞是Eos(嗜酸性粒細(xì)胞)趨化因子的主要來(lái)源，亦是激素的主要IE 細(xì)胞，其可使上皮細(xì)胞因子的表達(dá)明顯下調(diào)。而溫針治療支氣管哮喘機(jī)理有可能與激素治療哮喘相似，尚待今后進(jìn)一步的研究。

［1］孫濱.哮喘的發(fā)病機(jī)理與治療進(jìn)展［J］. 中華結(jié)核和呼吸雜志，1994，(4)：197

［2］劉旭，張愛(ài)玲. 血小板活化因子病理、生理學(xué)研究進(jìn)展［J］.國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2008，8，29(8)：710-712.

［3］陳永輝，王民集. 支氣管哮喘的中西醫(yī)診斷與治療［M］.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2008，34.

［4］馬萍，邪杰，閆玉文. 過(guò)敏性支氣管哮喘動(dòng)物模型研究現(xiàn)狀［J］.武警醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2010，19 (8)：677-680.

［5］安官布，金玉等.蒙醫(yī)學(xué)概述［M］.赤峰：內(nèi)蒙古科學(xué)技術(shù)出版社，1995，11：13-14.

［6］博·阿古拉. 蒙醫(yī)傳統(tǒng)療法大成〔M〕. 赤峰：內(nèi)蒙古科學(xué)技術(shù)出版社，2000.62.

［7］阿古拉、吳七柱，等. 蒙醫(yī)溫針對(duì)炎癥大鼠抗炎鎮(zhèn)痛作用研究〔J〕中國(guó)民族醫(yī)藥雜志，2010，11(11)：41-43