熱休克蛋白27在人腦星形膠質(zhì)細(xì)胞瘤中的表達(dá)及意義

陳曉杰 南飛飛 張明智△

1）山東中醫(yī)藥大學(xué)第一臨床醫(yī)學(xué)院 2）鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院 鄭州 450052

熱休克蛋白（heat shock protein，HSP）由美國學(xué)者最初在高溫環(huán)境的細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)。是一個(gè)高度保守的多肽類蛋白質(zhì)家族，其成員眾多、含量豐富、廣泛存在。研究證實(shí)，其合成受很多應(yīng)激因素的影響，如感染、中毒、惡變以及缺血等。目前，其分類主要按照分子量大小劃分，包括HSP110、HSP90、HSP70、HSP60、HSP27等。在其家族中，與腫瘤關(guān)系較為密切的主要有HSP90和HSP27［1-2］。

1 資料與方法

1．1 一般資料 選擇2009-01—2012-12平頂山市第一人民醫(yī)院神經(jīng)外科經(jīng)手術(shù)切除的12例星形膠質(zhì)細(xì)胞瘤手術(shù)標(biāo)本（膠質(zhì)瘤組），診斷全部有病理檢查支持，男7例，女5例；年齡36～72歲。所有患者術(shù)前均未經(jīng)放化療。病理診斷和分級全部按2007年WHO 中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤分類標(biāo)準(zhǔn)確定：Ⅱ級7例，Ⅲ級3例，Ⅳ級2例。另選取12例同期住院的經(jīng)手術(shù)切除的正常腦組織患者（正常腦組織組），男8例，女4例；年齡18～49歲。標(biāo)本切除離體后，6h內(nèi)放入-80 ℃冰箱保存。

1．2 方法

1．2．1 常規(guī)HE染色：二甲苯（Ⅰ）、（Ⅱ）各15min，二甲苯：無水乙醇＝1：1 2min，100%乙醇（Ⅰ）、（Ⅱ）各5min，80%乙醇5min，蒸餾水5min，蘇木精液染色5min，流水稍洗1～3 s，1%鹽酸乙醇1～3s，0．5%伊紅液染色1～3min，蒸餾水稍洗1～2s，80%乙醇稍洗1～2s，95%乙醇（Ⅰ）、（Ⅱ）各3 s，無水乙醇5～10 min，石炭酸二甲苯5～10 min，二甲苯（Ⅰ）、（Ⅱ）、（Ⅲ）各2min，中性樹膠封固［3］。

1．2．2 免疫組織化學(xué)方法：檢測HSP27蛋白在人腦星形膠質(zhì)細(xì)胞瘤、瘤旁以及正常腦組織中表達(dá)情況。①免疫組化二步法：脫蠟、水化組織切片，預(yù)處理組織切片，蒸餾水漂洗，置于TBS 中10 min，一抗孵育10～30 min，TBS 漂洗10 min，EnVisionTM 孵育10～30 min，TBS漂洗10 min，色源底物溶液孵育10min，蒸餾水漂洗，復(fù)染及封片，顯微鏡下觀察［3］。②判定免疫組化結(jié)果的標(biāo)準(zhǔn)：由本院2位病理科醫(yī)師進(jìn)行雙盲閱片，對每張切片進(jìn)行10個(gè)高倍鏡下（×400）視野內(nèi)陽性細(xì)胞隨機(jī)計(jì)數(shù)，陽性細(xì)胞數(shù)為最終判斷標(biāo)準(zhǔn)：沒有著色為0分，淡黃色著色為1分，棕黃色著色為2分，棕褐色著色為3分；判斷陽性范圍：0分為＜5%，1分為5%～25%，2分為26%～50%，3分為51%～75%，4分為＞75%；最終判定結(jié)果為二者相加分?jǐn)?shù)：陰性（-）為＜2分，弱陽性（＋）為2～3分，中度陽性（＋＋）為4～5分，強(qiáng)陽性（＋＋＋）為6～7分［3］。

1．3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 對所有數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS 13．0軟件，配對設(shè)計(jì)等級資料。P＜0．05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2．1 HSP27表達(dá)檢測結(jié)果 根據(jù)免疫組織化學(xué)染色的結(jié)果顯示，細(xì)胞染色定位于胞質(zhì)內(nèi)，呈棕黃色，彌漫狀分布為HSP27表達(dá)陽性。人腦星形膠質(zhì)細(xì)胞瘤組織HSP27總陽性表達(dá)率和強(qiáng)陽性表達(dá)率分別為100．00%（12／12）、50．00%（6／12）；瘤旁組織為100．00%（12／12）、25．00%（3／12）；正常腦組織為91．66%（11／12）、25．00%（3／12）。根據(jù)Wilcoxon符號秩檢驗(yàn)結(jié)果看出，人腦星形膠質(zhì)細(xì)胞瘤旁組織及正常腦組織中HSP27的表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0．05）。但人腦星形膠質(zhì)細(xì)胞瘤組織中分別與二者的表達(dá)相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0．05）。

2．2 HSP27的表達(dá)與臨床病理特征二者之間關(guān)系 腫瘤不同生長部位、腫瘤不同分化程度、腫瘤的體積、周圍衛(wèi)星結(jié)節(jié)轉(zhuǎn)移個(gè)數(shù)等對HSP27的表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0．05）。

3 討論

腦星形膠質(zhì)細(xì)胞瘤是人類最常見的神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤之一，腦星形膠質(zhì)細(xì)胞瘤的治療以手術(shù)為主，臨床需手術(shù)切除的大多數(shù)患者為中晚期患者，治療效果差，預(yù)后不良，當(dāng)前5a生存率在確診該病患者中僅有50%左右。HSP是一類多肽類蛋白質(zhì)家族，結(jié)構(gòu)復(fù)雜且廣泛存在于各種組織，維持蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性是其主要作用，相當(dāng)于分子伴侶。其與腫瘤的關(guān)系密切，在目前腫瘤學(xué)研究中受到越來越多的重視。HSP27分子量較小，為27kD，在HSP 龐大家族中屬于小分子量的HSP，HSP27在很多腫瘤細(xì)胞中異常高表達(dá)，如卵巢癌、結(jié)腸癌、乳腺癌、腎癌、肝癌、骨癌、前列腺癌、肺（非小細(xì)胞）癌、食管癌、膀胱癌等，特別是起源于腺癌的腫瘤［3］。在這些腫瘤細(xì)胞中，HSP27異常高表達(dá)，因此有可能增加這些腫瘤細(xì)胞對抗人體免疫系統(tǒng)的能力，從而逃離免疫系統(tǒng)介導(dǎo)的凋亡過程。大量對于結(jié)腸癌和卵巢癌等腺癌組織的研究表明，腫瘤細(xì)胞的分化程度、腫瘤的浸潤深度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的數(shù)目與HSP27的異常表達(dá)呈正相關(guān)。分化程度越差、腫瘤浸潤越深、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)目越多則HSP27 的表達(dá)越顯著。肺癌的組織學(xué)類型與HSP27的表達(dá)關(guān)系密切，可通過非小細(xì)胞肺癌組織中HSP27的表達(dá)，判斷其增殖分化的程度，從而為臨床療效和預(yù)后的判斷、治療計(jì)劃的制定提供重要的參考信息。本研究運(yùn)用免疫組化檢測了瘤組織、瘤旁組織以及正常組織HSP27的陽性表達(dá)率，發(fā)現(xiàn)腦星形膠質(zhì)細(xì)胞瘤組織中HSP27的陽性表達(dá)基本高于癌旁組織和正常腦組織，提示隨著腦星形膠質(zhì)細(xì)胞的惡變HSP27的表達(dá)量有所增加。腫瘤不同生長部位、不同分化程度、體積、周圍衛(wèi)星結(jié)節(jié)轉(zhuǎn)移個(gè)數(shù)均不影響HSP27的表達(dá)。腫瘤標(biāo)志物能夠提示機(jī)體腫瘤細(xì)胞的存在。神經(jīng)膠質(zhì)瘤起源于中樞神經(jīng)系統(tǒng)的膠質(zhì)細(xì)胞，成分復(fù)雜，異質(zhì)性很高，包括星形膠質(zhì)細(xì)胞瘤、少突膠質(zhì)細(xì)胞瘤和室管膜瘤等多個(gè)亞型。星形膠質(zhì)細(xì)胞瘤是中樞神經(jīng)系統(tǒng)最常見的一種腫瘤，目前仍缺乏敏感特異的標(biāo)志物分子。尋找精確、非主觀因素決定的分子腫瘤標(biāo)志物對星形膠質(zhì)細(xì)胞瘤的診斷、治療和預(yù)后判斷均具有重要的理論意義［4］。腫瘤標(biāo)志物為星形膠質(zhì)細(xì)胞瘤的早期診斷及預(yù)后提供依據(jù)［5］。根據(jù)周金橋研究［6］我們發(fā)現(xiàn)，HSP27的表達(dá)與腫瘤有極其密切的聯(lián)系，許多腫瘤組織中均HSP27的高表達(dá)，但對其進(jìn)一步的研究，如具體聯(lián)系及機(jī)制有待深入。對于HSP27 與腫瘤的關(guān)系更深入研究有助于更好地了解腫瘤發(fā)病的機(jī)制，并在此基礎(chǔ)上找到一個(gè)以HSP27為目標(biāo)新的檢測和治療腫瘤的方法。

［1］Castro GN，Cayado-Gutiérrez N，Moncalero VL，et al．Hsp27（HSPB1）：apossible surrogate molecular marker for loss of heterozygosity（LOH）of chromosome 1p in oligodendrogliomas but not in astrocytomas［J］．Cell stress ＆ Chaperones，2012，17（6）：779-790．

［2］Alam R，Schultz CR，Golembieski WA，et al．PTEN suppresses SPARC-induced pMAPKAPK2 and inhibits SPARC-induced Ser78HSP27phosphorylation in glioma［J］．Neuro Oncol，2013，15（4）：451-456．

［3］邵少慰．病理學(xué)實(shí)驗(yàn)教程［M］．武漢：華中科技大學(xué)出版社，2010：15-20；72-80．

［4］Vila-Carriles WH，Zhou ZH，Bubien JK，et al．Participation of the chaperone Hsc70in the trafficking and functional expression of ASIC2in glioma cells［J］．J Biol Chem，2007，282（47）：34 381-34 389．

［5］McClung HM，Golembieski WA，Schultz CR，et al．Deletion of the SPARC acidic domain or EGF-like module reduces SPARC-induced migration and signaling through p38 MAPK／HSP27in glioma［J］．Carcinogenesis，2012，33（2）：275-284．

［6］周金橋，王景濤，劉秋紅，等．人腦星形膠質(zhì)細(xì)胞瘤惡性程度相關(guān)蛋白表達(dá)譜的分析與鑒定［J］．中華神經(jīng)醫(yī)學(xué)雜志，2012，11（8）：780-783．