反相離子對(duì)色譜法測(cè)定飼料中的碘

■樂(lè)紅權(quán) 許增高 陳紅英 胡方圓 丁珊珊

（無(wú)錫華諾威動(dòng)物保健品有限公司，江蘇無(wú)錫 214101）

碘是人們發(fā)現(xiàn)的動(dòng)物第二種必需微量元素，其主要作用是參與機(jī)體甲狀腺素的合成，從而間接影響動(dòng)物機(jī)體的生理功能。動(dòng)物碘缺乏，可使動(dòng)物生長(zhǎng)受阻、繁殖力下降，而碘用量過(guò)大，也可導(dǎo)致高碘甲狀腺腫大，引起動(dòng)物中毒。因此，準(zhǔn)確測(cè)定飼料中碘的含量具有十分重要的意義。

目前，飼料添加劑品種目錄（2013）中含碘化合物僅有碘化鉀、碘化鈉、碘酸鉀、碘酸鈣4種。

飼料中碘的測(cè)定采用GB/T 13882的方法檢測(cè)，但該標(biāo)準(zhǔn)只能測(cè)定飼料中的碘離子，即只能測(cè)定碘化鉀和碘化鈉，對(duì)碘酸鉀和碘酸鈣則不能測(cè)定。因此，我們需要一種能測(cè)定飼料中總碘的方法。因?yàn)榈馑岣谒嵝詶l件下具有強(qiáng)氧化性，所以我們采取在稀硫酸條件下，加入過(guò)量的偏重亞硫酸鈉，使樣品中的碘全部還原成碘離子，再用離子對(duì)色譜法測(cè)定溶液中的碘離子。

1 材料和方法

1.1 儀器與試劑

高效液相色譜儀（島津LC-10AT）；超聲波清洗器（JL-180DT型，上海吉理超聲儀器有限公司）；離心機(jī)（CT14D型，上海天美科學(xué)儀器有限公司）；電子天平（AG285型，梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司）；偏重亞硫酸鈉（分析純）；甲醇（色譜純）；四丁基硫酸氫銨（離子對(duì)試劑）；碘化鉀（分析純）；硫酸（分析純）；色譜用水為去離子水，符合GB/T 6682.1中一級(jí)用水規(guī)定。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 溶液制備

1.2.1.1 稀硫酸：取硫酸57 ml，加水稀釋至1 000 ml，即得。

1.2.1.2 四丁基硫酸氫銨溶液：稱取1.7 g四丁基硫酸氫銨，精確至0.01 g，加入盛有1 000 ml水的燒杯中，攪拌至完全溶解。

1.2.1.3 碘標(biāo)準(zhǔn)貯備溶液(含碘1 mg/ml)：稱取0.130 8 g經(jīng)120℃干燥2 h、于干燥器中冷卻的碘化鉀溶于水，移入100 ml棕色容量瓶中，用水稀釋并定容至刻度，搖勻備用，3個(gè)月內(nèi)有效。

1.2.2 色譜條件

色譜柱：C18柱，柱長(zhǎng)250 mm，內(nèi)徑4.6 mm，粒度5 μm或性能類似的分析柱；柱溫：40℃；流動(dòng)相：四丁基硫酸氫銨溶液+甲醇=85+15；檢測(cè)器：紫外檢測(cè)器；檢測(cè)波長(zhǎng)：225 nm；進(jìn)樣量：20 μl。

1.2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

精密量取碘標(biāo)準(zhǔn)貯備溶液適量，加水稀釋制成含碘量分別為2、5、10、15、20 μg/ml的標(biāo)準(zhǔn)工作液，分別注入色譜儀，測(cè)定各濃度工作液的峰面積。以濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.2.4 樣品的前處理

稱取樣品0.5～5 g，精確至0.000 1 g，于100 ml棕色容量瓶中。加0.5 g偏重亞硫酸鈉，60 ml水，再加10 ml稀硫酸，置超聲提取器中超聲提取30 min（中間旋搖一次以防樣品附著瓶底），待溫度降至室溫后用水稀釋并定容至刻度，過(guò)濾（若濾液渾濁則需離心）。取部分清澈的溶液過(guò)0.45 μm濾膜,控制濃度在2.0～20 μg/ml，待上機(jī)。

1.2.5 回收率與精密度的測(cè)定

1.2.5.1 樣品的制備

①稱取1000 g空白飼料，分別添加一定量的碘化鉀，混合均勻，使樣品含碘量分別為100、400、800、1 200 mg/kg。

②稱取1 000 g空白飼料，分別添加一定量的碘酸鈣，混合均勻，使樣品含碘量分別為100、400、800、1 200 mg/kg。

1.2.5.2 按1.2.4節(jié)的方法對(duì)樣品處理和測(cè)定，根據(jù)峰面積計(jì)算其濃度和添加回收率。每個(gè)濃度的樣品設(shè)置3個(gè)重復(fù)。

1.2.6 穩(wěn)定性的測(cè)定

樣品制備好后，間隔24 h復(fù)測(cè)，比較兩次結(jié)果。

2 結(jié)果

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線

碘標(biāo)準(zhǔn)工作液濃度在2～20 μg/ml范圍內(nèi)時(shí)，色譜峰面積與碘離子濃度呈良好的線性關(guān)系。回歸曲線和方程見圖1。

圖1 碘的標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.2 添加回收率與精密度

標(biāo)準(zhǔn)工作液色譜圖，空白飼料加碘化鉀及空白飼料加碘酸鈣按1.2.4處理色譜圖見圖2。添加回收率和變異系數(shù)見表1。

圖2 標(biāo)準(zhǔn)工作液及樣品色譜

表1 添加回收率和變異系數(shù)（n=3）

從表1可看出，平均加樣回收率為88.4%～102.8%，變異系數(shù)為0.8%～2.4%,說(shuō)明本方法具有較高的準(zhǔn)確度及精密度，可以滿足檢測(cè)要求。

2.3 穩(wěn)定性試驗(yàn)（見表2）

樣品按1.2.4節(jié)處理后，第一次檢測(cè)結(jié)果與24 h后復(fù)測(cè)結(jié)果見表2。從表2可看出，兩次檢測(cè)結(jié)果無(wú)顯著性差異。

3 討論

3.1 方法的適用范圍

實(shí)際上，飼料中的碘化鈉、碘酸鉀亦可用此方法測(cè)定，本文只舉例了碘化鉀、碘酸鈣說(shuō)明方法的可靠性。由于飼料中有很多組分具有氧化性，因此，不論飼料中添加的是碘化鉀、碘化鈉，還是碘酸鉀、碘酸鈣，在樣品處理時(shí)，均需加入過(guò)量的偏重亞硫酸鈉，以保證樣品中的碘全部變?yōu)槭虦y(cè)的碘離子。

3.2 還原劑的選擇和用量

在樣品前處理中，我們發(fā)現(xiàn)加入0.2 g的偏重亞硫酸鈉可將碘完全還原為碘離子，為防止某些樣品中氧化劑含量過(guò)高，不能將碘完全還原，將偏重亞硫酸鈉的用量提升到0.5 g。

3.3 酸的選擇和用量

在剛開始時(shí)，樣品前處理中加入的酸為冰乙酸，用量為10 ml，結(jié)果不能將碘完全還原為碘離子，后將冰乙酸用量改為20 ml，仍不能將碘完全還原為碘離子。我們分析應(yīng)該是冰乙酸的酸性太弱的原因，故將冰乙酸改為稀硫酸，試驗(yàn)表明，稀硫酸用量為10 ml時(shí)，碘可完全被還原為碘離子。

4 結(jié)論

本方法操作簡(jiǎn)單，分析速度快，重現(xiàn)性強(qiáng)，準(zhǔn)確度高，可用于飼料（微量元素預(yù)混料、復(fù)合預(yù)混料、配合飼料）中碘的測(cè)定。