凍干乳酸菌對肉雞生長性能和免疫功能的影響

■尹艷軍 郝延剛

（河北農業(yè)大學生命科學學院，河北保定 071000）

抗生素可非選擇性抑菌或殺菌來抑制腸道內有害微生物的生長[1]，作為具有防病促生長的作用在集約化的畜牧業(yè)、工業(yè)化規(guī)模養(yǎng)殖中的飼料添加劑廣泛應用[2-3]。但也造成了藥物殘留、耐藥細菌的產生、疾病難以控制、大規(guī)模疫病群發(fā)、疾病易感性上升、動物免疫功能下降等危害[2-4]。因此，關于尋求抗生素替代品的研究勢在必行。有研究表明，在動物基礎日糧中添加適量的微生態(tài)制劑可改善腸道內環(huán)境，提高動物的生長性能，增強機體免疫力，保護動物健康生長[5-7]。乳酸菌作為腸道內重要的厭氧菌，具有較強的吸附能力，既能促進免疫器官的快速發(fā)育，又可增強動物的體液免疫和細胞免疫水平，防止疾病的發(fā)生，是制備活菌制劑的優(yōu)良菌種[8-10]。本研究以凍干乳酸菌作為試驗材料，研究其對肉雞生長性能和免疫功能的影響，為合理開發(fā)利用乳酸菌微生態(tài)制劑提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

微生態(tài)制劑：試驗用微生態(tài)制劑為凍干乳酸菌(有效活菌含量≥1.0×109CFU/g)，由山東蔚藍生物科技有限公司提供。

試驗飼料：商品日糧，購于河北康達畜禽養(yǎng)殖有限公司。

動物分組處理：1日齡AA肉仔雞400只（購于北京大風種禽公司），分為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ4個雞舍，每個雞舍100只。其中Ⅰ雞舍為對照組，基礎日糧中不添加活菌微生態(tài)制劑，Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ雞舍分別為低劑量、中劑量、高劑量組，基礎日糧中分別添加0.5%、1.0%、2.0%活菌微生態(tài)制劑凍干乳酸菌，飼養(yǎng)按常規(guī)方法進行，試驗期間各組飼養(yǎng)管理條件一致。

1.2 檢測指標

1.2.1 生產性能

試驗開始后記錄每組肉雞死淘情況，每周日上午以各組為單位空腹稱重，計算每組雞均重、平均日增重、日采食量和料重比。

1.2.2 免疫器官指數(shù)

免疫器官指數(shù)的測定參照謝仲權等[11]的方法。于試驗的第3、6周周日每個組分別隨機選取3只肉雞，剖殺，完整剔出胸腺、脾臟和法氏囊于電子天平上稱鮮重，計算免疫器官指數(shù)。

1.2.3 紅細胞C3b受體花環(huán)率和免疫復合物花環(huán)率的測定

參照易力等[12]測定方法。各組隨機選取3只肉雞分別于試驗第3、6周周日心臟取血抗凝，Hank’s液洗滌紅細胞3次，調整紅細胞懸液濃度為1.25×107個/ml。酵母懸液、血清和紅細胞懸液各50 μl，37℃水浴30 min，搖勻加入25 μl 0.25%戊二醛靜置5 min。推片，干燥，甲醛固定，瑞氏染色10 min，水洗，晾干。計算200個紅細胞中形成花環(huán)的細胞百分率。測定紅細胞免疫復合物花環(huán)率不加血清。

1.2.4 MTT法測定外周血T淋巴細胞轉化能力

于試驗第3、6周周日無菌采集肝素抗凝血2 ml，參照Mosmann T[13]和楊發(fā)龍等[14]研究方法對外周血T淋巴細胞轉化能力進行測定。

1.3 數(shù)據(jù)處理

試驗中所有試驗數(shù)據(jù)均采用SPSS17.0統(tǒng)計處理軟件進行方差分析，差異顯著性用Duncan's新復極差法進行多重比較。

2 結果

2.1 凍干乳酸菌對肉雞生長性能的影響

試驗期間因病死亡情況：對照組死亡只數(shù)17只，低劑量組死亡11只，中、高劑量試驗組分別死亡7只和5只。

2.1.1 不同劑量凍干乳酸菌對肉雞均重的影響(見表1)

表1 凍干乳酸菌對肉雞均重的影響(g)

由表1可以得出，與對照組(Ⅰ組)相比，21 d時，低劑量組對肉雞均重影響不顯著（P＞0.05），中、高劑量組肉雞均重顯著提高了3.39%、3.87%，差異顯著（P＜0.05）；42 d時，所有處理組對肉雞均重的影響差異不顯著（P＞0.05）。由此可見，在對肉雞均重的影響方面，中、高劑量組在試驗前期（1～21 d）階段對肉雞均重影響效果較好。

2.1.2 不同劑量凍干乳酸菌對肉雞平均日增重的影響(見表2)

由表2可知，與對照組相比，各處理組對試驗后期(22～42 d)及全期(1～42 d)肉雞平均日增重影響均不顯著(P＞0.05)；試驗前期(1～21 d)，低劑量組對肉雞平均日增重影響差異不顯著(P＞0.05)，中、高劑量組肉雞平均日增重顯著提高了20.54%、18.93%(P＜0.05)。由此可見，在對肉雞平均日增重的影響方面，中、高劑量組在試驗前期（1～21日齡）對肉雞影響效果較好。

表2 凍干乳酸菌對肉雞平均日增重的影響（g）

2.1.3 不同劑量凍干乳酸菌對肉雞料重比的影響（見表3）

由表3可知，與對照組相比，試驗前期（1～21 d）低劑量組對肉雞料重比的影響不顯著（P＞0.05），中、高劑量組肉雞的料重比顯著降低了5.85%、6.43%（P＜0.05）；試驗后期（22～42 d）各處理組肉雞料重比差異均不顯著（P＞0.05）。試驗全期（1～42 d），中劑量組料重比較對照組顯著降低4.90%（P＜0.05）。由此可知，試驗全期中劑量的凍干乳酸菌可以顯著降低肉雞的料重比。

表3 凍干乳酸菌對肉雞料重比的影響

2.2 凍干乳酸菌對肉雞免疫功能的影響

2.2.1 不同劑量凍干乳酸菌對肉雞免疫器官指數(shù)的影響（見表4）

表4 凍干乳酸菌對肉雞免疫器官指數(shù)的影響（g/kg）

由表4可知，與對照組相比，在試驗21 d時，低劑量組對肉雞脾臟指數(shù)、法氏囊指數(shù)顯著提高33.75%、30.00%（P＜0.05）；中劑量組胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)、法氏囊指數(shù)顯著提高了35.69%、23.75%、32.61%（P＜0.05）；高劑量組胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)、法氏囊指數(shù)顯著提高了32.80%、32.50%、29.57%（P＜0.05）。42日齡時，3種劑量組對肉雞法氏囊指數(shù)的影響均不顯著（P＞0.05）；低劑量組對胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)、法氏囊指數(shù)影響均不顯著（P＞0.05），中劑量組胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)顯著提高23.56%、32.95%（P＜0.05），高劑量組胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)顯著提高了20.19%、34.09%（P＜0.05）。由此可見，在肉雞基礎日糧中添加不同劑量的凍干乳酸菌，可不同程度地提高肉雞的免疫器官指數(shù)。

2.2.2 不同劑量凍干乳酸菌對肉雞紅細胞花環(huán)率的影響（見表5）

表5 凍干乳酸菌對肉雞紅細胞花環(huán)率的影響（%）

由表5可知，與對照組相比，21 d時，低劑量組的RBC-CR1顯著提高13.51%（P＜0.05），對RBC-IC的影響差異不顯著（P＞0.05）；中劑量組RBC-CR1顯著提高12.53%（P＜0.05），RBC-IC顯著提高了141.67%（P＜0.05）；高劑量組 RBC-CR1顯著提高 12.78%（P＜0.05），RBC-IC顯著提高了108.10%（P＜0.05）。42日齡時，低劑量組對RBC-CR1、RBC-IC影響差異均不顯著（P＞0.05）；中劑量組RBC-CR1顯著提高52.21%（P＜0.05），RBC-IC顯著提高了28.10%（P＜0.05）；高劑量組RBC-CR1顯著提高57.47%（P＜0.05），RBC-IC顯著提高了50.37%（P＜0.05）。

由此可知，在肉雞基礎日糧中添加中、高劑量的凍干乳酸菌均能提高紅細胞花環(huán)率。

2.2.3 不同劑量凍干乳酸菌對肉雞T淋巴細胞轉化能力的影響（見表6）

表6 凍干乳酸菌對肉雞T淋巴細胞轉化能力的影響(OD570 nm)

由表6可知，與對照組相比，低劑量組在21、42日齡時對T淋巴細胞轉化率差異性影響均不顯著（P＞0.05），21日齡時，中、高劑量組T淋巴細胞轉化率顯著提高20%、12%（P＜0.05）；42日齡時，T淋巴細胞轉化率顯著提高9.80%、8.61%（P＜0.05）。由此可見，在肉雞基礎日糧中添加中、高劑量的凍干乳酸菌，均可顯著提高肉雞的T淋巴細胞轉化能力。

3 討論

3.1 凍干乳酸菌對肉雞生長性能的影響

益生菌被動物攝入后，主要以兩種形式進入動物胃腸道，一種以活菌形式直接進入胃腸道，改善腸道內環(huán)境，維護腸道微生態(tài)平衡；而另一種則以內生孢子形式進入胃腸道，復活后分泌多種酶類和抑制腸道致病菌多肽類物質，參與飼料消化，起到抑菌預防疾病的作用[15]。大量試驗結果表明，在肉雞基礎日糧中添加益生菌可不同程度地提高肉雞均重、平均日增重、降低料重比及死亡率等。唐志剛等[16]的研究結果表明，添加益生菌對肉雞前期（1～21日齡）增重、平均日增重較對照組分別提高了7.2%（P＜0.05），料重比降低了6.04%（P＜0.05）；后期(22～42日齡)平均日增重較對照組提高1.00%(P＜0.05)。趙新海等[17]的研究也得到了類似的結果，在肉雞基礎日糧中添加微生態(tài)制劑，可減少肉雞的死淘率。本研究結果表明，在肉雞基礎日糧中添加乳酸菌，試驗前期(1～21日齡)高劑量組與對照組相比肉雞均重、日增重分別提高了3.87%、18.93%(P＜0.05)，料重比降低 6.43%(P＜0.05)。試驗全期中劑量組料重比較對照組顯著性降低4.90%（P＜0.05）。與唐志剛等[16]、趙新海等[17]的研究結果相一致，肉雞生長前期，消化系統(tǒng)發(fā)育尚未完善，飼料中的乳酸菌在肉雞腸道內定植后，分泌的酶類有助于飼料的消化，因而前期肉雞生產性能較對照組相比提高顯著，肉雞生長后期已具備完善的消化系統(tǒng)，故乳酸菌對肉雞后期生長性能影響效果不明顯。

3.2 凍干乳酸菌對肉雞免疫器官指數(shù)的影響

作為禽類的重要免疫器官，胸腺、脾臟、法氏囊的發(fā)育狀態(tài)和機能的強弱直接決定禽類的免疫水平[18]。免疫器官重量的相對增加，可以反映出機體免疫水平的增強[2，19]。目前，大多數(shù)關于益生菌對免疫器官影響的研究結果都表現(xiàn)為促進作用。張建梅等[2]的研究表明，復合微生態(tài)制劑對肉雞的法氏囊指數(shù)和脾臟指數(shù)均高于對照組。本試驗中劑量組肉雞21日齡時胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)、法氏囊指數(shù)顯著高于對照組35.69%、23.75%、32.61%（P＜0.05），高劑量組3種免疫器官指數(shù)依次較對照組提高32.80%、32.50%、29.75%（P＜0.05），高劑量組對免疫器官指數(shù)的提升幅度更高。本試驗與張建梅等的研究結果相比，免疫器官指數(shù)提高幅度較高，這可能與肉雞的品種、微生態(tài)制劑種類及飼養(yǎng)環(huán)境存在一定的關系。試驗后期各組法氏囊指數(shù)差異性不顯著，可能是42日齡時各組肉雞的法氏囊均處于退化消失階段的原因。

3.3 凍干乳酸菌對肉雞紅細胞免疫功能的影響

紅細胞免疫系統(tǒng)即通過紅細胞膜上的C3b受體實現(xiàn)紅細胞識別、黏附、殺傷抗原及加速清除免疫復合物的能力[14，20]。目前，關于微生態(tài)制劑對肉雞紅細胞免疫功能影響的研究報道雖然不多，但有關此方面的研究都表明微生態(tài)制劑能夠提高動物機體的紅細胞花環(huán)率。司振書等[21]的研究結果表明，21日齡時，試驗組E-C3bR和E-ICR比對照組高16.24%和19.93%，差異顯著（P＜0.05）。本試驗21日齡時，中劑量試驗組RBC-CR1和RBC-IC分別顯著高出對照組12.53%、141.67%，高劑量試驗組RBC-CR1和RBC-IC分別較對照組提高12.78%、108.10%(P＜0.05)。與司振書等[21]的結果相比，本試驗結果對RBC-CR1和RBC-IC花環(huán)率提升幅度不同，一方面可能是所用肉雞品種不同，紅細胞免疫活性不同；另一方面可能是所用微生態(tài)制劑不同，不同微生態(tài)制劑對紅細胞的刺激程度不同。本試驗中，試驗組RBC-CR1數(shù)值高于對照組，說明乳酸菌提高了機體的非特異性免疫，當外界抗原入侵時，可結合更多的免疫復合物，清除抗原；中、高劑量試驗組RBC-IC顯著高于對照組，說明機體免疫復合物含量高于對照組，因而紅細胞表面吸附的免疫復合物也明顯高于對照組。其原因可能是乳酸菌既作為抗原物質刺激其它免疫器官，同時又改變了紅細胞的免疫功能。

3.4 凍干乳酸菌對肉雞T淋巴細胞轉化能力影響

T淋巴細胞是動物機體內細胞免疫中占主導作用的免疫活性細胞，因此可以把外周血液中T淋巴細胞的數(shù)量作為評價機體細胞免疫功能的重要指標[22]。鐘德金等[23]的研究表明，微生態(tài)制劑的添加可提高蛋雞T淋巴細胞水平。本試驗研究結果中、高劑量凍干乳酸菌的添加在試驗全期均可顯著提高T淋巴細胞轉化能力（P＜0.05），與鐘德金等[23]研究結果相一致。說明乳酸菌能促進肉雞外周血T淋巴細胞的增殖反應，提高肉雞的細胞免疫水平，低劑量組T淋巴細胞水平與對照組差異顯著性不明顯，可能與進入機體后乳酸菌定制劑量有關。

4 結論

①在1～21 d的肉雞基礎日糧中添加中、高劑量的凍干乳酸菌，可顯著提高肉雞的平均日增重和肉雞均重（P＜0.05），且中劑量的凍干乳酸菌可顯著降低試驗全期的料重比（P＜0.05）。

②3種劑量的凍干乳酸菌對不同日齡肉雞的免疫功能有不同程度的提高。其中低劑量凍干乳酸菌對肉雞免疫器官指數(shù)、外周血淋巴細胞轉化率和紅細胞免疫功能無不良影響，與對照組相比較，中、高劑量凍干乳酸菌可顯著提高肉雞胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)、紅細胞花環(huán)率和外周血淋巴細胞轉化能力（P＜0.05）。

③在1～21 d階段，在肉雞基礎日糧中添加凍干乳酸菌對肉雞生長性能及免疫功能提升效果較好。