枯草芽孢桿菌對海蘭褐商品蛋雞產(chǎn)蛋后期蛋品質(zhì)和蛋殼超微結(jié)構(gòu)的影響

■王翔宇 孫考仲 田 穎 崔 宇 張 磊 柏明娜 張玉科 牛淑玲

（1.吉林大學(xué)動物科學(xué)學(xué)院，吉林長春 130062；2.吉林省永吉縣動物疫病預(yù)防控制中心，吉林永吉 132200；3.遼寧省農(nóng)機(jī)質(zhì)量監(jiān)督管理站，遼寧沈陽 110034；4.遼寧醫(yī)學(xué)院，遼寧錦州 121001）

雞蛋在收集、分級、包裝、運輸、儲藏和加工等作業(yè)環(huán)節(jié)中都不可避免地受到載荷的作用，導(dǎo)致蛋殼產(chǎn)生裂紋和破裂，蛋殼破損所造成的損失率在6%～10%之間。尤其在蛋雞的產(chǎn)蛋后期，所產(chǎn)雞蛋的蛋殼變薄、破軟殼率增加。因此，研究如何提高產(chǎn)蛋后期蛋雞的蛋殼品質(zhì)具有重要的意義?？莶菅挎邨U菌是農(nóng)業(yè)部公布的12種可直接飼喂動物的飼料級微生物添加劑之一。吳俊鋒等(2012)試驗研究表明，枯草芽孢桿菌及其發(fā)酵豆粕能夠極顯著提高蛋黃顏色、降低蛋殼比例，使蛋殼厚度、蛋殼強(qiáng)度及蛋黃比例有所增加。李俊波等(2009)研究指出，在蛋雞日糧中添加枯草芽孢桿菌制劑具有顯著降低雞蛋破損率、提高蛋重和蛋殼厚度的趨勢。本試驗以產(chǎn)蛋后期海蘭褐商品蛋雞為研究對象，通過在基礎(chǔ)日糧中添加枯草芽孢桿菌，研究其對蛋品質(zhì)和蛋殼超微結(jié)構(gòu)的影響，旨在為改善產(chǎn)蛋后期蛋殼結(jié)構(gòu)、提高蛋殼品質(zhì)和降低雞蛋破損率提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗設(shè)計

本試驗在長春市綠園區(qū)鵬宇養(yǎng)殖場內(nèi)進(jìn)行。選取380日齡健康、產(chǎn)蛋均勻的海蘭褐商品蛋雞480只，隨機(jī)分成2組，每組240只雞，組內(nèi)3個重復(fù)。對照組飼喂基礎(chǔ)日糧，試驗組在基礎(chǔ)日糧中添加500 mg/kg的枯草芽孢桿菌。預(yù)飼期為7 d，試驗期45 d。

1.2 試驗日糧

基礎(chǔ)日糧組成及營養(yǎng)水平見表1?？莶菅挎邨U菌由沈陽博善英勝生物科技有限公司提供，其中枯草芽孢桿菌含量＞2.0×1010CFU/g，添加劑量按說明書，為500 mg/kg。

1.3 飼養(yǎng)管理

預(yù)飼期7 d，試驗期45 d，采用人工飼喂，每日喂料3次，喂料時間分別為6：00、11：00、16：00。每天15：00 收蛋。

1.4 測定指標(biāo)及方法

表1 基礎(chǔ)日糧組成及營養(yǎng)水平（風(fēng)干基礎(chǔ)）

1.4.1 蛋品質(zhì)的測定

分別于試驗的第1、3、5周，每周的前3 d，每天以每個重復(fù)為單位，隨機(jī)取蛋10枚，用于測定蛋品質(zhì)。雞蛋重量、蛋白高度、蛋黃顏色和哈氏單位由蛋品質(zhì)測定儀EA-019（以色列奧卡品牌）自動地測量和計算；蛋殼強(qiáng)度用蛋殼強(qiáng)度測定儀EFR-01（以色列奧卡品牌）測定;蛋殼厚度由蛋殼厚度測試儀ESTG-1（以色列奧卡品牌）測試；蛋形指數(shù)用游標(biāo)卡尺進(jìn)行測定；蛋黃重的測定是將雞蛋小心打碎，仔細(xì)分離蛋黃蛋清，剪斷蛋黃上系帶，使其與蛋清完全分開，將蛋黃上的蛋清用濾紙吸干，然后稱重。蛋黃比例是蛋黃重占雞蛋總重的百分比。

1.4.2 蛋殼超微結(jié)構(gòu)的觀察

1.4.2.1 雞蛋殼樣品選取和處理

每組隨機(jī)選取6枚雞蛋，將雞蛋敲碎，去除蛋清、蛋黃等內(nèi)容物，先用自來水后用去離子水沖洗干凈，然后自然風(fēng)干后備用。

1.4.2.2 掃描電鏡制樣和觀察

本試驗用zeiss EVO18鎢絲燈掃描電鏡進(jìn)行觀察。將制備好的雞蛋殼小塊樣品，用導(dǎo)電膠帶黏于樣品臺上。黏好的樣品噴金之后，置于電鏡樣品倉中，在高真空下，對樣品各個部位，在不同倍率下分別進(jìn)行觀察拍照。

1.5 數(shù)據(jù)處理與分析

所有數(shù)據(jù)均采用SPSS 13.0軟件進(jìn)行單因素方差分析，用LDS法進(jìn)行多重比較。試驗數(shù)據(jù)用“平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)誤”表示。

2 結(jié)果

2.1 枯草芽孢桿菌添加劑對蛋雞蛋品質(zhì)的影響(見表2)

表2 枯草芽孢桿菌添加劑對蛋雞蛋品質(zhì)的影響

從表2可以看出，試驗組蛋重高于對照組5.28%，且差異極顯著（P＜0.01）；試驗組的蛋殼強(qiáng)度高于對照組22.21%，且差異顯著（P＜0.05）。同時，試驗組的蛋殼顏色、蛋殼厚度、蛋形指數(shù)、蛋黃比例、哈氏單位相比于對照組均有提高的趨勢，但差異均不顯著（P＞0.05）。

2.2 枯草芽孢桿菌添加劑對雞蛋蛋殼超微結(jié)構(gòu)的影響

2.2.1 蛋殼外表面

通過電鏡觀察，兩組的蛋殼外表面如圖1～4所示。兩組的雞蛋殼外表面均有明顯的龜背狀裂紋，其上分布有大小不等的氣孔。在100×的顯微水平，對照組的蛋殼外表面的龜背狀裂紋較少且分布不均；試驗組的蛋殼外表面的龜背狀裂紋多且分布均勻，裂紋細(xì)而密。在1 000×的顯微水平，可以看到對照組蛋殼外表面的裂隙較寬，單位面積里裂隙較少；試驗組的裂隙較窄，單位面積里的裂隙較多。

圖1 對照組雞蛋殼外表面(100×)

圖2 試驗組雞蛋殼外表面(100×)

圖3 對照組雞蛋殼外表面(1 000×)

圖4 試驗組雞蛋殼外表面(1 000×)

2.2.2 蛋殼橫斷面(見圖5～圖6)

圖5 對照組雞蛋蛋殼橫斷面(250×)

圖6 試驗組雞蛋蛋殼橫斷面(250×)

電鏡觀察顯示，雞蛋殼的橫斷面由內(nèi)向外依次可分為：殼膜層、乳錐層、柱狀層、表面晶體層和表層。由圖5～6可看出，在250×的顯微水平，對照組的乳頭較少而且乳頭較寬；試驗組的乳錐層的突起結(jié)構(gòu)更加緊密，乳頭數(shù)較多而且乳頭較窄。柱狀層約占整個蛋殼厚度的二分之一，蛋殼的柱狀層由塊狀晶體單元組成,塊狀晶體單元相互連接增加了蛋殼的整體性,增強(qiáng)了蛋殼的耐壓強(qiáng)度。試驗組的柱狀層的晶體數(shù)明顯增多，排列更加復(fù)雜，為蛋殼強(qiáng)度的增強(qiáng)提供了結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)。表面晶體層約占整個蛋殼厚度的三分之一。該層由緊密排列的晶體組成，本試驗觀察到試驗組的表面晶體層結(jié)構(gòu)更加致密，進(jìn)一步增強(qiáng)了蛋殼的強(qiáng)度。

3 討論

3.1 枯草芽孢桿菌添加劑對蛋雞蛋品質(zhì)的影響

本研究結(jié)果表明，試驗組的蛋重極顯著高于對照組（P＜0.01），試驗組的蛋殼顏色、蛋殼厚度、蛋形指數(shù)、蛋黃比例、哈氏單位均優(yōu)于對照組,但差異均不顯著（P＞0.05）,這與李麗紅(2004)的試驗結(jié)果相一致。芽孢桿菌在腸道內(nèi)生長繁殖過程產(chǎn)生了乳酸或VFA,能使腸道內(nèi)pH值降低，而酸性環(huán)境促進(jìn)了Ca和P兩種礦物元素的電離，這是他們被吸收的必要條件。Ab?delqader A等(2013)發(fā)現(xiàn)，用1 g/kg的枯草芽孢桿菌飼喂產(chǎn)蛋后期的白殼蛋雞,其產(chǎn)蛋量、蛋重、蛋殼重量、蛋殼厚度、蛋殼密度相比于對照組都有所提高，這可能是添加枯草芽孢桿菌后，蛋雞的消化道環(huán)境更有利于Ca、P的吸收。本試驗發(fā)現(xiàn)：試驗組與對照組的蛋殼厚度雖無顯著差異,但試驗組的蛋殼強(qiáng)度顯著高于對照組（P＜0.05），關(guān)于枯草芽孢桿菌對蛋殼強(qiáng)度影響機(jī)理有待于進(jìn)一步探究。

3.2 枯草芽孢桿菌添加劑對雞蛋蛋殼超微結(jié)構(gòu)的影響

通過蛋殼外表面的照片看到，蛋殼在產(chǎn)出時就有裂紋區(qū),這些裂紋區(qū)很可能成為以后破裂的始點。通過電鏡觀察發(fā)現(xiàn)：試驗組蛋殼的外表面有明顯的程度不一的龜背狀裂紋,且裂紋細(xì)而密,對照組的裂紋稀而少。試驗組的乳錐層的突起結(jié)構(gòu)較緊密，乳頭數(shù)較多而且乳頭較窄，對照組的乳頭較少而且乳頭較寬；試驗組的柱狀層的晶體數(shù)明顯增多，排列更加復(fù)雜；而對照組的柱狀晶體數(shù)則較少；且試驗組的表面晶體層也更加致密。萬秋蓓等(2006)曾通過對海賽克斯雞蛋殼掃描電鏡的觀察來探索影響蛋殼強(qiáng)度的機(jī)理，試驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)雞蛋殼強(qiáng)度的大小可能與殼膜層殼膜的厚度、殼膜纖維的粗細(xì),錐體層乳頭間空隙的大小以及覆蓋層上裂隙的深淺和數(shù)量有關(guān)。李琦章等(2011)對蛋殼超微結(jié)構(gòu)觀測記錄與蛋殼常規(guī)質(zhì)量指標(biāo)相關(guān)分析結(jié)果表明，蛋殼外表面的裂隙數(shù)、乳頭數(shù)均與蛋殼強(qiáng)度呈極顯著正相關(guān)；而裂隙寬、乳頭寬與蛋殼強(qiáng)度呈顯著負(fù)相關(guān)。本試驗也發(fā)現(xiàn)試驗組蛋殼超微結(jié)構(gòu)的變化對蛋殼強(qiáng)度有一定的影響，而關(guān)于枯草芽孢桿菌對蛋殼超微結(jié)構(gòu)影響的作用機(jī)制，也有待于進(jìn)一步探究。

4 結(jié)論

日糧中添加枯草芽孢桿菌可以提高雞蛋蛋殼厚度、改變蛋殼超微結(jié)構(gòu)、增強(qiáng)蛋殼強(qiáng)度?？梢?，日糧中添加適宜劑量的枯草芽孢桿菌對改善產(chǎn)蛋后期雞蛋的蛋品質(zhì)有一定的促進(jìn)作用。

（參考文獻(xiàn)11篇，刊略，需者可函索）