寬筋藤總生物堿含量測定方法研究

遲森森，韓 丹，劉 斌（北京中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院，北京 100102）

寬筋藤總生物堿含量測定方法研究

遲森森，韓 丹，劉 斌＊（北京中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院，北京 100102）

目的 建立寬筋藤藥材中總生物堿的含量測定方法。方法 以鹽酸藥根堿為對照品，采用紫外－可見分光光度法測定寬筋藤總生物堿的含量，測定波長為430nm。結(jié)果 鹽酸藥根堿在0.001 1～0.006 5mg·mL－1范圍內(nèi)與吸光度呈良好線性關(guān)系，回歸方程：Y＝14.747 X－0.010 7（r＝0.999 5）。鹽酸藥根堿平均回收率為100.4%，RSD＝2.0%（n＝6）。結(jié)論 16批寬筋藤藥材總生物堿含量測定結(jié)果表明，所建立的方法簡便、準(zhǔn)確，可用于寬筋藤藥材總生物堿的含量測定。

寬筋藤；總生物堿；紫外－可見分光光度法；含量測定

寬筋藤是防己科青牛膽屬植物中華青牛膽Tinospora sinensis（Lour.）Merr.的干燥藤莖，又名伸筋藤、舒筋藤、松根藤［1］，其味苦性寒，有舒經(jīng)活絡(luò)、清熱利濕的作用，中醫(yī)用其治療風(fēng)濕痹痛、腰肌勞損、跌打損傷，也用于調(diào)補(bǔ)氣血、鎮(zhèn)靜安神等［2］。寬筋藤亦為常用藏藥，歷代藏醫(yī)文獻(xiàn)對寬筋藤的功效早有詳述，《晶珠本草》記載：“治療隆，赤巴合并癥；培根病、風(fēng)濕病、隆熱病”［3］，是云南藏族和納西族地區(qū)習(xí)用的高原植物藥，主要分布于廣東、海南、廣西和云南等地。

寬筋藤主要含有生物堿類、萜類、黃酮類等化學(xué)成分［4－6］，其提取物具有抗氧化、抗炎和免疫調(diào)節(jié)等作用［68］。而目前有關(guān)寬筋藤藥材總生物堿含量的測定方法未見報(bào)道。本文采用紫外－可見分光光度法［9－11］對寬筋藤藥材總生物堿的含量測定方法進(jìn)行研究，并對其提取方法進(jìn)行單因素考察，優(yōu)選出最佳提取工藝，為寬筋藤藥材質(zhì)量分析、評價(jià)與控制提供依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Hitachi U－2000型紫外－可見分光光度計(jì)（日本日立公司）；Sartorious BT 25S型1／100 000電子分析天平（北京賽多利斯儀器有限公司）；KQ－500DE型超聲波清洗器（昆山超聲儀器有限公司）。

1.2 試藥 寬筋藤藥材分別購自全國14個不同地區(qū)，共16批，經(jīng)鑒定為防己科青牛膽屬植物中華青牛膽Tinospora sinensis（Lour.）Merr.的干燥藤莖；對照品鹽酸藥根堿（批號：0774－20026）購自中國食品藥品檢定研究院；甲醇為色譜純；水為娃哈哈純凈水；其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 溶液的制備

2.1.1 供試品溶液的制備 取寬筋藤藥材（80目）約0.2g，精密稱定，置于圓底燒瓶中，精密加入8mL鹽酸－甲醇（1∶100）混合溶液，密塞，稱定質(zhì)量，回流提取60min，靜置，冷卻，用鹽酸－甲醇（1∶100）混合溶液補(bǔ)足減失的質(zhì)量，過濾，將殘留物揮干，加適量甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至堿性氧化鋁柱（100～200目，1g，干法裝柱）上，用甲醇10mL洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘留物加適量甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至25mL量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻，即得供試品溶液。

2.1.2 對照品溶液的制備 取鹽酸藥根堿對照品約5mg，精密稱定，置于25mL量瓶中，加適量甲醇溶解并定容至刻度，搖勻，得質(zhì)量濃度為0.217mg·mL－1的對照品溶液。

2.2 測定波長的選擇 在200～900nm范圍內(nèi)分別對鹽酸藥根堿對照品溶液和供試品溶液進(jìn)行全波長掃描，發(fā)現(xiàn)兩者均在430nm處有最大吸收，故確定430nm為測定波長。

2.3 提取條件的優(yōu)化

2.3.1 提取方式考察 取寬筋藤藥材（80目）2份，每份約0.20g，精密稱定，置于圓底燒瓶中，精密加入40倍量鹽酸－甲醇（1∶100）混合溶液，密塞，稱定質(zhì)量，分別采用超聲30min（功率250W，頻率20KHz）和加熱回流60min進(jìn)行提取，按2.1.1項(xiàng)下方法制備供試液，于430nm處測定吸光度，計(jì)算總生物堿的含量，結(jié)果超聲提取法總生物堿含量為3.719mg·g－1，回流提取法總生物堿含量為5.818mg·g－1，說明加熱回流提取法的提取效果優(yōu)于超聲提取法。

2.3.2 藥材粉碎度考察 分別取40，60，80和120目寬筋藤藥材，每份約0.20g，精密稱定，置于圓底燒瓶中，按2.1.1項(xiàng)下方法制備供試液，于430nm處測定吸光度，計(jì)算總生物堿的含量，結(jié)果見表1。由表1可知，寬筋藤藥材粉碎度為80目時(shí)，提取效果最佳。

表1 粉碎度考察結(jié)果Tab.1 Results of grinding degree investigation

2.3.3 溶劑量考察 取寬筋藤藥材（80目）4份，每份約0.20g，精密稱定，置于圓底燒瓶中，分別精密加入20，40，80和160倍量鹽酸－甲醇（1∶100）混合溶液，按2.1.1項(xiàng)下方法制備供試液，于430nm處測定吸光度，計(jì)算總生物堿含量，結(jié)果見表2。由表2可知，用40倍量鹽酸－甲醇（1∶100）混合溶液提取時(shí)總生物堿含量已相對較高，因此選擇40倍量鹽酸－甲醇（1∶100）混合溶液對藥材進(jìn)行提取。

表2 溶劑量考察結(jié)果Tab.2 Results of the solvent amounts investigation

2.3.4 提取時(shí)間考察 取寬筋藤藥材（80目）4份，每份約0.20g，精密稱定，置于圓底燒瓶中，精密加入40倍量鹽酸－甲醇（1∶100）混合溶液，密塞，稱定質(zhì)量，分別回流提取30，60，90和120min，按2.1.1項(xiàng)下方法制備供試液，于430nm處測定吸光度，計(jì)算總生物堿含量，結(jié)果見表3。由表3可知，60min時(shí)總生物堿已經(jīng)提取完全，因此將提取時(shí)間確定為60min。

表3 提取時(shí)間考察結(jié)果Tab.3 Results of extraction time investigation

2.4 線性關(guān)系 精密量取質(zhì)量濃度為0.217mg·mL－1的鹽酸藥根堿對照品溶液0.05，0.10，0.15，0.20，0.25和0.30mL，分別置于10mL量瓶中，加甲醇定容至刻度，于430nm處測定吸光度。以鹽酸藥根堿對照品質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)、吸光度值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算得回歸方程：Y＝14.747 X－0.010 7（r＝0.999 5）。結(jié)果表明鹽酸藥根堿質(zhì)量濃度在0.001 1～0.006 5mg·mL－1范圍內(nèi)與吸光度呈良好線性關(guān)系。

2.5 精密度 取同一批寬筋藤藥材（80目）6份，每份約0.15g，精密稱定，置于圓底燒瓶中，按2.1.1項(xiàng)下方法制備供試液，在430nm波長處測定吸光度，連續(xù)測定6次，計(jì)算RSD值為0.17%（n＝6），表明該方法精密度良好。結(jié)果見表4。

表4 精密度考察結(jié)果Tab.4 Results of accuracy investigation

2.6 穩(wěn)定性 取寬筋藤藥材（80目）6份，每份約0.15g，精密稱定，置于圓底燒瓶中，按2.1.1項(xiàng)下方法制備供試液，于溶液配制后0，2，4，8，12和24h，在430nm波長處測定吸光度，計(jì)算RSD值為0.51%（n＝6），表明該樣品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定。結(jié)果見表5。

表5 穩(wěn)定性考察結(jié)果Tab.5 Results of stability investigation

2.7 重復(fù)性 取同一批寬筋藤藥材（80目）5份，每份約0.15g，精密稱定，置于圓底燒瓶中，按2.1.1項(xiàng)下方法制備供試液，在430nm波長下，測定吸光度，計(jì)算得總生物堿平均含量為5.8mg·g－1，RSD值為1.88%（n＝5），表明該方法重復(fù)性良好。結(jié)果見表6。

表6 重復(fù)性考察結(jié)果Tab.6 Results of repeatability investigation

2.8 回收率 取寬筋藤藥材（80目）6份，每份約0.1g，精密稱定，置于圓底燒瓶中，分別精密加入質(zhì)量濃度為0.217mg·mL－1的鹽酸藥根堿對照品溶液2.5mL，按2.1.1項(xiàng)下方法制備供試液，在430nm波長處測定吸光度，計(jì)算平均回收率為100.38%，RSD值為1.95%（n＝6）。結(jié)果見表7。

表7 回收率測定結(jié)果Tab.7 Results of recovery test

2.9 樣品含量測定 分別取購自不同地區(qū)的寬筋藤商品藥材（80目）約0.3g，精密稱定，置于圓底燒瓶中，按2.1.1項(xiàng)下方法制備供試液，在430nm波長處測定吸光度，計(jì)算總生物堿含量，結(jié)果見表8。

表8 不同商品藥材含量測定結(jié)果Tab.8 Results of the content determination of medicinal materials from different regions

3 討論

本文采用紫外－可見分光光度法對寬筋藤藥材總生物堿進(jìn)行定量分析，并采用單因素實(shí)驗(yàn)法對寬筋藤藥材提取條件進(jìn)行了優(yōu)化，確定寬筋藤藥材最佳提取工藝為：藥材粉碎至80目，加入40倍量鹽酸－甲醇（1∶100）混合溶液，加熱回流提取60min。以鹽酸藥根堿為對照品對總生物堿進(jìn)行定量分析，鹽酸藥根堿回歸方程為Y＝14.747 X－0.010 7（r＝0.999 5），表明鹽酸藥根堿在0.001 1～0.006 5mg·mL－1范圍內(nèi)與吸光度呈良好線性關(guān)系。

14個不同地區(qū)寬筋藤商品藥材總生物堿含量在2.5～7.6mg·g－1之間，各批次商品藥材總生物堿含量的最高值和最低值相差3倍以上，表明不同地區(qū)寬筋藤藥材質(zhì)量存在較大差別。其中購自玉林、湛江的寬筋藤商品藥材總生物堿含量較高，而購自南京的商品藥材總生物堿含量較低。這可能與寬筋藤藥材生長的地理環(huán)境、采收時(shí)間以及貯藏條件等因素有關(guān)。本文在篩選確定了寬筋藤藥材總生物堿提取工藝的基礎(chǔ)上，建立了總生物堿的含量測定方法，并比較了不同地區(qū)寬筋藤商品藥材總生物堿的含量差異，為寬筋藤藥材的質(zhì)量控制和評價(jià)及其開發(fā)利用奠定了基礎(chǔ)。

［1］廣東省食品藥品監(jiān)督管理局.廣東省中藥材標(biāo)準(zhǔn)（第一冊）［S］.廣州：廣東科技出版社，2004：183.

［2］吳鳳榮，曾聰彥，戴衛(wèi)波.寬筋藤的藥理作用和臨床應(yīng)用研究進(jìn)展［J］.中國執(zhí)業(yè)藥師，2014，11（12）：37－40.

［3］帝瑪爾·丹增彭措.晶珠本草［M］.毛繼祖，譯.上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，2012：329.

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［5］林少紅.寬筋藤根莖部分之化學(xué)成分研究［D］.國立臺灣大學(xué)醫(yī)學(xué)院藥學(xué)研究所，2008.

［6］任艷麗，唐前瑞，張楨，等.中華青牛膽的化學(xué)成分研究［J］.天然產(chǎn)物研究與開發(fā)，2008，20（2）：278－279，282.

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Study on the determination method of total alkaloids in Tinospora sinensis caulis

CHI Sensen，HAN Dan，LIU Bin＊（School of Medicine，Beijing University of Chinese Medicine，Beijing 100102，China）

Objective To establish a method for the determination of total alkaloids in Tinospora sinensis caulis.Method The content of total alkaloids was determined，and hydrochloric jatrorrhizine was selected as a reference substance.Results Hydrochloric jatrorrhizine had a good linear relationship with the absorbance in the range of 0.001 1－0.006 5mg·mL－1and the regression equation was Y＝14.747 X－0.010 7（r＝0.999 5）.The average recovery for hydrochloric jatrorrhizine was 100.4%，RSD＝2.0%（n＝6）.Conclusion The contents determination of the total alkaloids for sixteen batches of medicinal materials showed that the method was easy to operate and accurate，which could be used for the determination of the total alkaloids in Tinospora sinensis caulis.

Tinospora sinensis caulis；total alkaloids；UV－VIS spectrophotometry；content determination

10.3969／j.issn.1004－2407.2015.04.006

R284

A

1004－2407（2015）04－0349－04

2015－02－04）

北京中醫(yī)藥大學(xué)自主選題項(xiàng)目（2013－JYBZZ－XS－116）

遲森森，女，在讀碩士研究生

＊通信作者：劉斌，男，博士，教授，博士生導(dǎo)師