腹可安片的質(zhì)量標準研究

劉 艷 ，薛非凡(1.襄陽市食品藥品檢驗所藥化室，湖北襄陽 44101;.襄陽市食品藥品監(jiān)督管理局藥品化妝品生產(chǎn)流通監(jiān)管科，湖北 襄陽 44101)

腹可安片可清熱利濕，收斂止痛，用于急性胃腸炎，消化不良引起的腹痛、腹瀉、嘔吐，原標準只有理化鑒別，無含量測定［1］。經(jīng)研究，現(xiàn)增加了扭肚藤、車前草、石榴皮、火炭母的薄層鑒別。相關(guān)文獻報道，腹可安片的含量測定方法有高效液相色譜法(high performance liquid chromatography，HPLC)法測定救必應(yīng)及紫丁香苷的含量［2-4］。由于救必應(yīng)在藥理作用中發(fā)揮作用較小，現(xiàn)改選用腹可安片中的君藥扭肚藤中的主要成分東莨菪內(nèi)酯和石榴皮、火炭母中的主要成分沒食子酸的含量作為藥效成分為檢測指標，建立分析方法。經(jīng)試驗選擇HPLC 法主峰與雜質(zhì)峰達到基線分離，峰形較好，陰性無干擾，能更有效地控制本品質(zhì)量，現(xiàn)報告如下。

1 儀器與試藥

島津LC-10A 高效液相色譜儀;SPD-10AVP 紫外檢測器，CBM-102 工作站;熊果酸對照品:中國藥品生物制品檢定所，批號:110742-200516;東莨菪內(nèi)酯對照品:中國藥品生物制品檢定所，批號:110753-2000413;沒食子酸對照品:中國藥品生物制品檢定所，批號:110831-2003025。腹可安片，珠海正太制藥有限公司，批號20121101、20121102、20121103。

2 方法與結(jié)果

2.1 薄層鑒別

2.1.1 扭肚藤、車前草:取腹可安片10 片，除去糖衣，研細，加乙醇30 ml，超聲處理使其充分溶解，濾過，濾液揮至1 ml 作為供試品溶液。按處方稱取缺扭肚藤、車前草的其他藥材制成陰性樣品。另取東莨菪內(nèi)酯對照品、熊果酸對照品加甲醇制成含1 mg/ml 的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液10 μl，對照品溶液各2 μl，分別點于同一硅膠G 薄層板上，以環(huán)己烷-甲酸乙酯(V∶V=2∶3)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365 nm)下檢視。供試品色譜中，在與東莨菪內(nèi)酯對照品色譜相應(yīng)的位置上顯相同顏色的熒光斑點，見圖1。噴以10%的硫酸乙醇溶液，105 ℃加熱至斑點清晰，供試品色譜中在與熊果酸對照品色譜相應(yīng)的位置上顯相同顏色的斑點，見圖2。

2.1.2 石榴皮、火炭母:取本品10 片，除去糖衣，研細，加50%甲醇50 ml，加熱回流30 min，濾過，濾液揮干，殘渣加水10 ml 使其溶解，用乙酸乙酯提取40 ml 提取，濾液揮至1 ml做為供試品溶液。按處方稱取缺石榴皮、火炭母的其他藥材制備陰性對照溶液。另取沒食子酸對照品加乙酸乙酯制成每1 ml 含1 mg 的溶液作為對照品溶液。照薄層色譜法試驗［5］，吸取供試品溶液和對照品溶液各6 μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以二氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸(V∶V∶V =7∶4∶1)為展開劑，展開，晾干，噴以2%的三氯化鐵乙醇溶液，供試品色譜中在與沒食子酸對照品色譜相應(yīng)的位置上顯相同顏色的斑點，見圖3。

圖1 扭肚藤、車前草紫外光燈下檢視圖Fig 1 Detection diagram of J. elongatum，P.asiatica L. under ultraviolet lamp

圖2 扭肚藤、車前草噴硫酸乙醇加熱顯色圖Fig 2 Coloration diagram of J. elongatum，P.asiatica L. with heating spray of ethanol sulfate

2.2 含量測定方法

圖3 石榴皮、火炭母薄層色譜圖Fig 3 TLC of P． granati and Chinese knotweed herb

2.2.1 東莨菪內(nèi)酯含量測定方法:(1)色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗:用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;以乙腈-水-冰醋酸(V∶V∶V=13∶87∶1)為流動相;檢測波長為345 nm，進樣量10 μl［6-9］。(2)對照品溶液的制備:取東莨菪內(nèi)酯對照品加甲醇制成每1 ml 含20 μg 的溶液。(3)陰性對照溶液:按處方稱取缺扭肚藤的其他藥材，按制備工藝制成缺扭肚藤的陰性對照溶液。(4)供試品溶液的制備:取本品除去糖衣的粉末2 g，精密稱定，加80%乙醇100 ml，濾過，置水浴上蒸至無醇味，用二氯甲烷提取3 次，每次20 ml，合并二氯甲烷液，在80 ℃水浴上蒸干，殘渣用甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至10 ml 量瓶中，用甲醇稀釋至刻度。(5)準確度:取本品除去糖衣的粉末0.5 g(9 份)，精密稱定，置50 ml 容量瓶中，加80%乙醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，精密取續(xù)濾液25 ml 至蒸發(fā)皿中，在水浴上蒸至約5 ml，用二氯甲烷提取3 次，每次20 ml，合并二氯甲烷液，在80 ℃水浴上蒸干，加甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至10 ml 量瓶中，每份分別加入東莨菪內(nèi)酯對照品溶液(34.4 μg/ml)2.00、3.00、4.00 ml 各3 份，用甲醇稀釋至刻度，即得。照含量測定項下操作，測定東莨菪內(nèi)酯的含量，計算回收率，結(jié)果見表1。表1 顯示，加樣回收試驗的回收率為(100.64 ±1.07)%，符合定量要求。(6)專屬性:取缺扭肚藤陰性樣品1 g，照含量測定項下操作，在與主峰保留時間處無吸收峰，在上述條件下，對照品保留時間與峰形均理想，樣品中主峰能與其他峰很好分離，見圖4，說明陰性無干擾。(7)線性與范圍:精密稱取東莨菪內(nèi)酯對照品適量，用甲醇制成每1 ml 含東莨菪內(nèi)酯172 μg/ml 的溶液，取此溶液0.5、1.0、2.0、4.0、6.0 ml，東莨菪內(nèi)酯的量分別為3.44、6.88、13.76、27.52、41.28 μg/ml，測定峰面積(A)分別為190 238.3、355 845.2、706 084.0、1 407 506.0、2 096 181.0，以東莨菪內(nèi)酯的量與峰面積進行線性回歸，得方程Y=50 518.74X+12 734.72;r=0.999 9(n=5)，結(jié)果顯示，本品在3.44 ～41.28 μg/ml 濃度范圍內(nèi)呈線性。

表1 東莨菪內(nèi)酯的加樣回收試驗結(jié)果Tab 1 Test results of recovery of scopoletin

圖4 東莨菪內(nèi)酯的高效液相色譜圖Fig 4 HPLC chromatogram of scopoletin

2.2.2 沒食子酸含量測定方法:(1)色譜條件:用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;以甲醇-0.5%冰醋酸(V∶V =7∶93)為流動相;檢測波長為270 nm，進樣量10 μl［10-14］。(2)對照品溶液的制備:取沒食子酸對照品加50% 甲醇制成每1 ml 含45 μg 的溶液。(3)陰性對照溶液:按處方稱取缺石榴皮、火炭母的其他藥材，按制備工藝制成陰性對照溶液。(4)供試品溶液的制備:取本品除去糖衣，研細，取粉末0.25 g，精密稱定，置50 ml 量瓶中，用50%甲醇稀釋至刻度。(5)準確度:取本品除去糖衣，研細，取粉末0.125 g(9 份)，精密稱定，置50 ml量瓶中，每份分別加入沒食子酸對照品溶液(458.2 μg/ml)2.00、3.00、5.00 ml 各3 份，用50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。照含量測定項下操作，測定沒食子酸的含量，計算回收率，結(jié)果見表2。表2 顯示，加樣回收試驗的回收率為(99.73 ±0.52)%，符合定量要求。(6)專屬性:取缺石榴皮、火炭母陰性樣品0.25 g，照含量測定項下操作，在與主峰保留時間處無吸收峰，在上述條件下，對照品保留時間與峰形均理想，樣品中主峰能與其他峰很好分離，見圖5，說明陰性無干擾。(7)線性與范圍:精密稱取沒食子酸對照品適量，用50%甲醇制成每1 ml 含沒食子酸0.526 mg/ml 的溶液，取此溶液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 ml 分別置25 ml 量瓶中，用50%甲醇稀釋至刻度，沒食子酸量分別為10.52、21.04、31.56、42.08、52.60、63.12 μg/ml，測定峰面積(A)分別為392 255.3、769 573.3、1 169 866.1、1 569 496.7、1 964 646.0、2 361 502.1，以沒食子酸量與峰面積進行線性回歸，得方程Y=375 64.0X-118 85，r=0.999 93(n=6)，結(jié)果表明，本品在10.52 ～63.12 μg/ml 濃度范圍內(nèi)呈線性。

表2 沒食子酸的加樣回收試驗結(jié)果Tab 2 Test results of recovery of scopoletin

圖5 沒食子酸的高效液相色譜圖Fig 5 HPLC chromatogram of gallic acid

3 討論

賈強［15］用現(xiàn)代藥效學評價模型對腹可安片進行了現(xiàn)代藥效學再評價研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)石榴皮對治療細菌性腹瀉起著較重要的作用，其它藥材起協(xié)同或拮抗作用。用均勻設(shè)計對腹可安進行整體研究出火炭母在藥效中作用最明顯，具有君藥的地位，扭肚藤藥效在鎮(zhèn)痛方面，也起著君藥的作用，而救必應(yīng)在各個藥效模型中均沒有明顯的作用。石榴皮在各個藥效中起著相對重要的作用，應(yīng)該是臣藥的地位。本研究采用君、臣藥扭肚藤藥材中東莨菪內(nèi)酯和火炭母、石榴皮藥材中沒食子酸為含量測定指標，符合藥效學為含量測定指標的要求，能充分體現(xiàn)腹可安片的功效。

綜上所述，高效液相色譜法簡便、準確、可靠、專屬性強、重現(xiàn)性好，可作為腹可安片的質(zhì)量標準。

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