高效液相色譜法同時測定潔陰靈洗劑中苦參堿和蛇床子素的含量

肖衛(wèi)紅，楊全偉，徐宏峰，胡松，張耕

(武漢市第一醫(yī)院藥學(xué)部，武漢 430022)

高效液相色譜法同時測定潔陰靈洗劑中苦參堿和蛇床子素的含量

肖衛(wèi)紅，楊全偉，徐宏峰，胡松，張耕

(武漢市第一醫(yī)院藥學(xué)部，武漢 430022)

目的建立潔陰靈洗劑中苦參堿和蛇床子素的含量測定方法，更全面控制其質(zhì)量。方法采用高效液相色譜(HPLC)法測定潔陰靈洗劑中苦參堿和蛇床子素的含量。色譜柱為Hypersil BDS C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)，流動相為乙腈-0.2%磷酸(11：89)，檢測波長206 nm，流速1.0 mL·min-1，柱溫30 ℃。結(jié)果苦參堿和蛇床子素線性范圍分別為24.35～243.52 μg·mL-1(r=0.999 8)、37.10～242.24 μg·mL-1(r=0.999 9)；苦參堿平均回收率為97.10%(RSD=2.09%，n=9)，蛇床子素平均回收率為96.77%(RSD=2.32%，n=9)。結(jié)論該方法可同時測定潔陰靈洗劑中苦參堿和蛇床子素的含量，操作簡單，結(jié)果可靠，重復(fù)性好，可用于潔陰靈洗劑的質(zhì)量控制。

潔陰靈洗劑；苦參堿；蛇床子素；含量測定；色譜法，高效液相

潔陰靈洗劑處方收載于國家藥品標準中藥標準(外科婦科分冊)WS-11007(ZD-1007)-2002，由苦參、蛇床子、黃柏、土茯苓等藥材提取制成，具有清熱解毒、殺蟲止癢的功效，用于婦女濕毒下注引起的陰癢、外陰紅腫、灼痛等癥，以及真菌性、滴蟲性、細菌性陰道病見以上癥狀者。其中苦參具有抗菌消炎及免疫抑制的作用[1]，蛇床子具有抗菌殺蟲、抗炎鎮(zhèn)痛的作用[2]，主要成分分別是苦參堿和蛇床子素。原標準中是測定黃柏中鹽酸小檗堿的含量。筆者采用高效液相色譜法同時測定苦參堿和蛇床子素的含量，為更加有效全面地控制該制劑的質(zhì)量提供依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 高效液相色譜儀Agilent 1100(美國)；電子天平Sartorius ME215S，感量：0.01 mg(德國)。

1.2 試藥 苦參堿(中國食品藥品檢定研究院，批號：110805-200906)；蛇床子素(中國食品藥品檢定研究院，批號：110822-201005)；潔陰靈洗劑(貴州金橋藥業(yè)有限公司，批準文號：國藥準字Z20043618，批號：201111004，201204002，201206001)；乙腈為色譜純，水為重蒸水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：Hypersil BDS C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流動相：乙腈-0.2%磷酸(11：89)；流速1.0 mL·min-1；檢測波長206 nm；柱溫30 ℃；進樣量：20 μL。理論板數(shù)按苦參堿峰計算應(yīng)不低于2 000，蛇床子素不低于3 000，分離度>1.5。

2.2 對照品溶液的制備 分別精密稱定苦參堿、蛇床子素對照品適量，加甲醇制成每1 mL含苦參堿60 μg、蛇床子素90 μg的溶液，即得。

2.3 供試品溶液的制備 精密量取本品10 mL，置分液漏斗中，加入濃氨試液1 mL，搖勻，用三氯甲烷萃取3次，每次20 mL，合并三氯甲烷液，蒸干，殘渣加甲醇溶解，轉(zhuǎn)移至50 mL量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.4 專屬性實驗 取處方比例制備不含苦參和蛇床子的陰性對照樣品，依據(jù)“2.3”項下制備方法制得陰性對照溶液。分別取對照品溶液、供試品溶液、陰性對照溶液，在擬定的色譜條件下進行測定，結(jié)果顯示供試品溶液與對照品溶液主峰的保留時間一致，陰性對照溶液在相應(yīng)的保留時間處沒有色譜峰出現(xiàn)，樣品中其他組分對兩種成分的含量測定無干擾。見圖1。

2.5 線性關(guān)系考察 分別取苦參堿和蛇床子素對照品15.22和15.14 mg，精密稱定，置25 mL量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，得對照品儲備液。精密吸取該儲備液1，2，3，4，5，10 mL置25 mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，制備成1～6號不同濃度對照品溶液，分別吸取20 μL注入液相色譜儀，以對照品濃度為橫坐標，對照品峰面積為縱坐標，得回歸方程?？鄥A回歸方程：Y=72 346+13 471X(r=0.999 8)，苦參堿在24.35～243.52 μg·mL-1范圍內(nèi)，與峰面積呈良好線性關(guān)系。蛇床子素回歸方程：Y=97 264-2 234X(r=0.999 9)，蛇床子素在37.10～242.24 μg·mL-1范圍內(nèi)，與峰面積呈良好線性關(guān)系。

2.6 精密度實驗 精密吸取濃度為6號對照品溶液20 μL，在擬定的色譜條件下重復(fù)進樣6次，以苦參堿和蛇床子素峰面積計算RSD(n=6)，分別為0.79%，1.14%，結(jié)果表明精密度符合要求。

2.7 穩(wěn)定性實驗 取潔陰靈洗劑樣品(批號：20131104)制備得供試品溶液，分別于0，2，4，6，8，12 h內(nèi)取樣20 μL注入液相色譜儀，記錄苦參堿和蛇床子素峰面積，計算RSD結(jié)果分別為1.38%，1.76%。結(jié)果表明供試品溶液在12 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.8 重復(fù)性實驗 分別取同一批號樣品(批號：20131104)10 mL，精密量取，共6份，照“2.3”項下供試品溶液制備方法，在擬定色譜條件下進行含量測定，結(jié)果苦參堿含量為0.13 mg·mL-1，RSD=1.45%；蛇床子素含量為0.17 mg·mL-1，RSD=1.13%。表明該方法法重復(fù)性良好。

2.9 加樣回收率實驗 精密吸取已知成分含量的樣品9份(批號：20131104，含苦參堿0.13 mg·mL-1；蛇床子素0.17 mg·mL-1)，每份5 mL，各組分別加入苦參堿和蛇床子素對照品儲備液適量，按“2.3”項下相同方法制備供試溶液，測定其中指標成分含量，進而計算加樣回收率，結(jié)果苦參堿、蛇床子素平均回收率分別為97.10%，96.77%，RSD為2.09%，2.32%。見表1。

2.10 樣品含量測定 取供試品3批，按“2.3”項下供試品溶液制備方法處理，并按擬定的色譜條件測定并計算含量，結(jié)果見表2。

1.苦參堿；2.蛇床子素

表1 苦參堿和蛇床子素加樣回收實驗結(jié)果

3 討論

實驗曾采用甲醇、酸性甲醇和三氯甲烷作為溶劑，結(jié)果使用甲醇峰形較好，三氯甲烷毒性偏大，綜合考慮選用甲醇作為溶劑[3]。

比較甲醇-乙腈-pH7.6磷酸鹽-三乙胺(15：25：65：0.1)[3]、甲醇-水-三乙胺(65：35：0.2)[4]、乙腈-0.2%磷酸(11：89)[5]，結(jié)果乙腈-磷酸系統(tǒng)洗脫能力

表2 3批樣品含量測定結(jié)果

較好，且黏度小，柱壓較低，分離效果較好，保留時間適中，綜合各因素考慮未采用其他成分較多的流動相體系。

對苦參堿和蛇床子素對照品在190～500 nm進行波長掃描，最大吸收波長分別在210和203 nm，由于蛇床子素與苦參堿的色譜峰面積相比較小，選擇206 nm后兩個主峰面積適中，其他雜質(zhì)對檢測無干擾。

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[2] 陳艷，張國剛，余仲平.蛇床子的化學(xué)成分及藥理作用的研究進展[J].沈陽藥科大學(xué)學(xué)報，2006，23(4)：133-135.

[3] 徐玲笑，周靜安.高效液相色譜法同時測定苦參堿和蛇床子素的含量[J].中國醫(yī)院藥學(xué)雜志，2005，25(11)：1097-1098.

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《醫(yī)藥導(dǎo)報》論文摘要的寫作要求

《醫(yī)藥導(dǎo)報》的論文除“藥學(xué)進展”“新藥介紹”“藥事管理”等欄目的綜述與述評類文章，采用指示性摘要(是對文章內(nèi)容進行概括總結(jié)，提出主要觀點)外，其他原創(chuàng)性、第一手資料的研究性論文均采用報道性摘要 。報道性摘要包括四要素為：目的 (Objective)簡要介紹研究的目的，說明提出問題的緣由，研究的范圍及重要性。應(yīng)與正文前言相一致，與結(jié)論相呼應(yīng)。方法 (Method) 簡要說明課題的基本設(shè)計、材料與方法或給藥方法，如何分組，研究范圍及精確程度，如何取得數(shù)據(jù)。結(jié)果 (Result) 簡要列出與研究結(jié)論相關(guān)的主要結(jié)果、數(shù)據(jù)及統(tǒng)計學(xué)顯著性檢驗值。數(shù)據(jù)應(yīng)與正文內(nèi)結(jié)果核實無誤。結(jié)論 (Conclusion) 簡要說明經(jīng)驗證、論證取得的正確觀點、理論價值或應(yīng)用價值。應(yīng)與研究目的相呼應(yīng)。四要素要求言簡意賅，用第三人稱書寫，一般300～500字，英文摘要應(yīng)與中文相呼應(yīng)。

2014-05-23

2014-08-19

肖衛(wèi)紅(1978-)，男，湖北監(jiān)利人，主管中藥師，學(xué)士，從事醫(yī)院制劑工作。電話：027-85332523，E-mail：xiaoweihong2005@sina.com。

R286；R927.2

B

1004-0781(2015)12-1654-03

10.3870/j.issn.1004-0781.2015.12.027