參柏婦炎寧栓質(zhì)量標(biāo)準

馮頌橋，費毅琴

(湖北省食品藥品監(jiān)督檢驗研究院，武漢 430064)

參柏婦炎寧栓質(zhì)量標(biāo)準

馮頌橋，費毅琴

(湖北省食品藥品監(jiān)督檢驗研究院，武漢 430064)

目的建立參柏婦炎寧栓的質(zhì)量標(biāo)準。方法采用薄層色譜法對制劑中苦參、粉萆薢、蛇床子進行定性鑒別；采用高效液相色譜法測定制劑中鹽酸小檗堿含量。結(jié)果薄層斑點清晰，陰性對照無干擾；鹽酸小檗堿進樣量在0.079～0.790 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好(r=0.999 9)，平均回收率為99.3%，RSD值為0.70%(n=6)。結(jié)論該方法準確、可靠，可行及重復(fù)性良好，能有效控制參柏婦炎寧栓的質(zhì)量。

參柏婦炎寧栓；小檗堿，鹽酸；色譜法，薄層；色譜法，高效液相

參柏婦炎寧栓主要由黃柏、苦參、粉萆薢、蒲公英、蛇床子、益母草6味中藥組成，具有清熱解毒、祛濕止帶之功效，主要用于宮頸炎、陰道炎屬濕熱下注者的治療。本品種方中苦參清熱燥濕，利尿；粉萆薢利濕去濁；蒲公英清熱解毒，均為臣藥，因此對方中苦參、粉萆薢、蛇床子進行薄層定性鑒別，并建立高效液相色譜法對黃柏中主要成分鹽酸小檗堿進行定量測定。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 島津LCsolution Lite工作站，LC-15C型高壓輸液泵，SPD-15C型紫外檢測器，CBM-20A控制器(日本島津公司)；AL204型電子天平、AB135-S型電子天平(梅特勒-托利多儀器有限公司，感量：0.1 mg)；JK-250DB型超聲波清洗器(合肥金尼克機械制造有限公司，250W，40 kHz)。

1.2 試藥 苦參堿對照品(批號：110805-200306，供含量測定用)、薯蕷皂苷元對照品(批號：111539-200415，供含量測定用)、蛇床子素對照品(批號：110822-200409，供含量測定用)、鹽酸小檗堿對照品(批號：110713-200910，供含量測定用)均由中國食品藥品檢定研究院提供，參柏婦炎寧栓樣品均由武漢藥谷科技開發(fā)有限公司提供，批號分別為20140801，20140802，20140803，20140804，20140901，20140902。甲醇、乙腈為色譜純，水為雙蒸水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 薄層鑒別

2.1.1 苦參 取本品1粒，剪碎，加水50 mL，80 ℃水浴攪拌使溶解，冷凍10 min，取出，立即濾過，取續(xù)濾液20 mL，用氨試液調(diào)pH值至9～10，加乙醚萃取2次，每次25 mL，合并乙醚液，揮干，殘渣加甲醇1 mL使溶解，作為供試品溶液。取不含苦參的自制樣品1粒，同供試品溶液的制法制備缺苦參的陰性樣品溶液。另取苦參堿對照品，加甲醇制成每毫升含0.5 mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(《中華人民共和國藥典》2010年版一部附錄Ⅵ B)實驗，吸取上述供試品溶液、陰性樣品溶液各10 μL，對照品溶液4 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-甲醇-濃氨(20：1：0.5)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以改良碘化鉍鉀試液[1]。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點，陰性樣品無此斑點，陰性無干擾。結(jié)果見圖1A。

2.1.2 粉萆薢 取本品1粒，剪碎，置150 mL平底燒瓶中，加石油醚(60～90 ℃)50 mL，85 ℃水浴回流30 min，棄去石油醚液，依次加水40 mL，鹽酸10 mL，石油醚(60～90 ℃)50 mL，搖勻，水浴回流2 h，取出，放冷，分取石油醚液，水層再加石油醚(60～90 ℃)振搖提取2次，每次25 mL，合并石油醚液，加無水硫酸鈉5 g，攪拌脫水，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇至1 mL，作為供試品溶液。取不含粉萆薢的自制樣品1粒，同供試品溶液制法制備缺粉萆薢的陰性樣品溶液。另取薯蕷皂苷元對照品，加甲醇制成每毫升含0.4 mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(《中華人民共和國藥典》2010年版一部附錄Ⅵ B)實驗，吸取上述3種溶液各10 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷-乙酸乙酯-甲酸(4：1：0.05)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，加熱至斑點顯色清晰[2]。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點，陰性樣品無此斑點，陰性無干擾。結(jié)果見圖1B。

2.1.3 蛇床子 取本品3粒，剪碎，加水25 mL，80 ℃水浴攪拌使溶解，立即冷凍10 min，取出，立即濾過，濾液用石油醚(30～60 ℃)輕輕振搖提取2次，每次25 mL，合并石油醚液，揮干，殘渣加乙酸乙酯1 mL使溶解，作為供試品溶液。取不含蛇床子的自制樣品3粒，同供試品溶液制法制備缺蛇床子的陰性樣品溶液。另取蛇床子素對照品，加甲醇制成每毫升含0.4 mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(《中國人民共和國藥典》2010年版一部附錄Ⅵ B)實驗，吸取上述3種溶液各5 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷-乙酸乙酯(17：3)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，加熱至斑點顯色清晰[3]。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點，陰性樣品無此斑點。結(jié)果見圖1C。

2.2 鹽酸小檗堿含量測定

2.2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性 色譜柱為依利特Kromasil C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流動相為乙腈-0.1%磷酸溶液(50：50)(每100 mL加十二烷基磺酸鈉0.1 g)，流速1.0 mL·min-1，檢測波長265 nm[4-7]。理論板數(shù)按鹽酸小檗堿峰計算不低于2 000。

2.2.2 對照品溶液的制備 精密稱取鹽酸小檗堿對照品適量，加流動相制成每毫升含25 μg的溶液，即得[4-7]。

2.2.3 供試品溶液的制備 取本品1粒，剪碎，精密稱定，置50 mL量瓶中，加水約45 mL，超聲處理20 min(250 W，40 kHz)，放冷，加水稀釋至刻度，搖勻，精密量取5 mL，置50 mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖

A.苦參薄層色譜圖；B.粉萆薢薄層色譜圖；C.蛇床子薄層色譜圖；1.缺苦參陰性；2.苦參堿對照品；3～5.參柏婦炎寧栓供試品；6.缺粉萆薢陰性；7.薯蕷皂苷元對照品；8～10.參柏婦炎寧栓供試品；11.缺蛇床子陰性；12.蛇床子素對照品；13～15.參柏婦炎寧栓供試品

圖1 3種藥材薄層色譜圖(溫度：18 ℃；濕度：62%)

A.TLC chromatogram ofSophoraeflavescentisRadix；B.TLC chromatogram ofRhizomadioscoreaeHypoglaucae；C.TLC chromatogram of cnidii fructus；1.negative control withoutSophoraeflavescentisRadix；2.matrine control；3-5.test samples ofShenboFuyanningsuppositories；6.negative control withoutRhizomadioscoreaehypoglaucae；7.diosgenin control；8-10.test samples ofShenboFuyanningsuppositories；11.negative control without cnidii fructus；12.osthole control；13-15.test samples ofShenboFuyanningsuppositories

Fig.1 TLC chromatograms of three herb(temperature：18 ℃；humidity：62%)

勻，濾過，取續(xù)濾液，即得[4-7]。

2.2.4 陰性樣品溶液的制備 取不含黃柏的陰性樣品1粒，照“2.2.3”項下供試品溶液的制備方法制備缺黃柏陰性樣品溶液。分別精密吸取對照品溶液、陰性樣品溶液、供試品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，記錄液相色譜圖[4-7]。見圖2。經(jīng)專屬性實驗考察，其他成分對鹽酸小檗堿的含測無干擾。

A.陰性樣品溶液；B.對照品溶液；C.供試品溶液；1.鹽酸小檗堿

圖2 3種溶液的高效液相色譜圖

A.negative sample；B.reference substance(berberine hydrochloride) C.test sample；1.berberine hdrochloride

Fig.2 HPLC chromatogram of three kinds of solutions

2.2.5 線性關(guān)系考察 精密稱取鹽酸小檗堿對照品適量，加流動相制得濃度分別為7.9，23.7，39.5，55.3，79.0 μg·mL-1的對照品溶液，分別精密吸取上述溶液各10μL，注入液相色譜儀，按上述色譜條件測定峰面積，記錄色譜圖，以峰面積為縱坐標(biāo)(Y)，以進樣量(μg)為橫坐標(biāo)(X)，繪制標(biāo)準曲線，得回歸方程Y=1 555 267.02X-1 954.09(r=0.999 9)。表明鹽酸小檗堿在0.079～0.790 μg范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系。

2.2.6 精密度實驗 精密吸取對照品溶液10 μL，連續(xù)進樣6次，測得對照品峰面積RSD為0.49%，表明儀器精密度良好。

2.2.7 穩(wěn)定性實驗 精密量取供試品溶液10 μL，分別于0，2，4，6，8，10 h，注入液相色譜儀，測得峰面積RSD為0.72%，表明供試品溶液至少在10 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.2.8 重復(fù)性實驗 稱取同一批號參柏婦炎寧栓(批號：20140801)樣品6份，分別按“2.2.3”項制備供試品溶液，并測定鹽酸小檗堿含量，平均含量為每粒12.2 mg，RSD為1.21%，表明該方法重復(fù)性良好。

2.2.9 加樣回收率實驗 精密稱取鹽酸小檗堿對照品適量，加入已知含量的樣品中，按供試品溶液制備方法制備供試品溶液，測定并計算其回收率。平均回收率為99.3%，RSD為0.70%(n=6)。

2.2.10 含量測定 分別取6批次的樣品，按“2.2.3”項下制備供試品溶液，按上述色譜條件測定，結(jié)果6批樣品鹽酸小檗堿每粒含量分別為： 12.2，12.9，13.1，12.5，12.1，12.5 mg，平均含量為每粒12.5 mg。

3 討論

筆者對參柏婦炎寧栓中苦參、粉萆薢、蛇床子進行了薄層色譜鑒別研究，方法可行，為本品種質(zhì)量控制提供定性依據(jù)。

鹽酸小檗堿為黃柏的有效成分，其含量可以間接反映制劑工藝，因此選擇鹽酸小檗堿含量作為參柏婦炎寧栓的含量測定指標(biāo)[8]。含量測定以乙腈-0.1%磷酸溶液(50：50)(每100 mL加十二烷基磺酸鈉0.1 g)為流動相，鹽酸小檗堿分離效果較好，陰性樣品對本品含量測定無干擾。方法簡便快速，結(jié)果可靠，為制劑質(zhì)量控制提供了定量依據(jù)。

本制劑中黃柏藥味提取工藝為70%乙醇回流提取、經(jīng)減壓濃縮至浸膏，不需酸化即可提出鹽酸小檗堿。為節(jié)約成本，選擇最簡單的供試品處理方法：將樣品水溶、再用流動相稀釋至合適濃度。該方法與《中華人民共和國藥典》2010年版一部黃柏項下鹽酸小檗堿含測提取方法思路一致[4]。

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Quality Standard of Shenbo Fuyanning Suppository

FENG Songqiao, FEI Yiqin

(HubeiInstituteforFoodandDrugControl,Wuhan430064,China)

Objective To establish a method for quality control ofShenboFuyanningsuppositories. MethodsSophoraeflavescentisRadix,RhizomadioscoreaeHypoglaucae, andCnidiifructuswere identified by thin layer chromatography (TLC), and the content of berberine hydrochloride was determined by HPLC. Results The TLC spots were clear and the negative control had no interference.Berberine hydrochloride had a linear relationship in the range of 0.079-0.790 μg, and the average recovery was 99.3%(RSD=0.70%,n=6). Conclusion The method is accurate, reliable and feasible, and can be used in the quality control of theShenboFuyanningsuppository effectively.

ShenboFuyanningsuppositories； Berberine, hydrochlorid； Chromatography, thin layer； Chromatography, high performance liquid

2015-02-06

2015-04-05

馮頌橋(1957-)，男，湖北黃石人，主管藥師，學(xué)士，主要從事藥品質(zhì)量分析及標(biāo)準研究。電話：027-87826017，E-mail：2497863138@qq.com。

R286；R927.2

B

1004-0781(2015)12-1649-04

10.3870/j.issn.1004-0781.2015.12.025