雞蛋花水提取物對(duì)小鼠鎮(zhèn)咳及祛痰作用*

覃茜檸，李遠(yuǎn)輝，黃瑩，郭圣奇，黃挺章，李蕓達(dá)，程世嘉，黃彥峰，趙善民

(右江民族醫(yī)學(xué)院1.公共衛(wèi)生與管理學(xué)院；2.臨床學(xué)院；3.應(yīng)用生理教研室，百色 533000)

雞蛋花水提取物對(duì)小鼠鎮(zhèn)咳及祛痰作用*

覃茜檸1，李遠(yuǎn)輝2，黃瑩2，郭圣奇2，黃挺章2，李蕓達(dá)2，程世嘉2，黃彥峰3，趙善民3

(右江民族醫(yī)學(xué)院1.公共衛(wèi)生與管理學(xué)院；2.臨床學(xué)院；3.應(yīng)用生理教研室，百色 533000)

目的探討雞蛋花水提取物對(duì)小鼠的鎮(zhèn)咳、祛痰作用。方法采用小鼠濃氨水引咳法和酚紅排泄法，設(shè)立正常對(duì)照組、雞蛋花水提取物小、中、大劑量組(劑量依次為1.2，2.1，3.0 g·kg-1)、陽(yáng)性對(duì)照組(枸櫞酸噴托維林片組和氯化銨組)，均按每千克體質(zhì)量劑量灌胃給藥。氨水引咳法實(shí)驗(yàn)小鼠給藥5 d后，觀察小鼠咳嗽潛伏期及3 min內(nèi)咳嗽次數(shù)；酚紅排泄實(shí)驗(yàn)小鼠給藥5 d，于末次給藥1 h后腹腔注射2.5%酚紅溶液，觀察小鼠氣管酚紅排泌量。結(jié)果與正常對(duì)照組比較，雞蛋花水提取物3種劑量組均能延長(zhǎng)濃氨水所致小鼠咳嗽的潛伏期(F=13.54，P<0.05)；枸櫞酸噴托維林片組及雞蛋花水提取物小劑量組均能減少濃氨水所致小鼠咳嗽次數(shù)(F=4.98，P<0.05)；雞蛋花水提取物小、大兩種劑量組能使小鼠氣管分泌酚紅量增加(F=6.98，P<0.05)。與枸櫞酸噴托維林片組比較，雞蛋花水提取物小、中兩種劑量組能延長(zhǎng)濃氨水所致小鼠咳嗽的潛伏期(F=11.43，P<0.05)。結(jié)論雞蛋花水提取物有鎮(zhèn)咳、祛痰作用。

雞蛋花水提取物；鎮(zhèn)咳作用；祛痰作用

雞蛋花(Plumierrubra)，別名蛋黃花、擂捶花、大季花、緬梔子，為夾竹桃科雞蛋花屬落葉小喬木或灌木。其花瓣潔白，花心淡黃，極似蛋白包裹著蛋黃，因此得名。它原產(chǎn)于熱帶美洲，現(xiàn)廣泛栽種于全球熱帶地區(qū)，在我國(guó)則主產(chǎn)于廣東、福建、廣西、海南等地。雞蛋花的花朵和樹(shù)皮均可入藥。性平，味稍苦、甘，無(wú)毒，歸經(jīng)入肺、大腸二經(jīng)，具有清熱解暑、止咳化痰之功效。主治感冒發(fā)熱和肺熱咳嗽[1]。中外民間均有廣泛使用，主要具有抗腫瘤、抗真菌、抗病毒以及清熱、潤(rùn)肺解毒等方面的藥理作用[2]。在《廣西本草選編》《福建草藥志》《南寧市藥物雜志》中均記載雞蛋花有清熱利濕、化痰止咳的作用；國(guó)內(nèi)將雞蛋花收錄于植物藥材中，認(rèn)為雞蛋花可用于治療腸炎、細(xì)菌性痢疾、傳染性肝炎及支氣管炎等，臨床上可用于濕熱下痢、里急后重、肺熱咳嗽等癥，療效確切[2-3]。但其鎮(zhèn)咳、祛痰作用效果究竟如何至今鮮見(jiàn)報(bào)道。雞蛋花對(duì)動(dòng)物藥理作用的實(shí)驗(yàn)研究，亦鮮見(jiàn)相關(guān)報(bào)道，為了探討雞蛋花提取物的鎮(zhèn)咳、祛痰的藥理作用，筆者進(jìn)行相關(guān)實(shí)驗(yàn)。現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物 健康昆明種小鼠，雌雄兼用，體質(zhì)量22～28 g，由右江民族醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，動(dòng)物使用許可證號(hào)：SYXK(桂)2011-0010，實(shí)驗(yàn)期間自由飲水、普通飼料喂食。

1.2 試藥 雞蛋花(廣西壯族自治區(qū)百色市市售藥材，由右江民族醫(yī)學(xué)院民族醫(yī)學(xué)教研室覃道光副教授鑒定為夾竹桃科雞蛋花屬植物)；枸櫞酸噴托維林片(商品名：咳必清，廣西桂林南藥股份有限公司生產(chǎn)，批號(hào)：H45020346)；酚紅(科昊生物工程有限責(zé)任公司，批號(hào)：W13D03YDG)；氨水(廣東廉江市愛(ài)廉化工試劑有限公司，批號(hào)：060702)；氯化銨(廣州新建精細(xì)化工廠，批號(hào)：041203)；氫氧化鈉(天津市風(fēng)船化學(xué)試劑科技有限公司，分析純)。

1.3 儀器 722 分光光度計(jì)(上海精密科學(xué)儀器有限公司生產(chǎn))，ARI140/C電子天平[奧豪斯(上海)公司生產(chǎn)，感量：0.1 mg]。

1.4 雞蛋花水提取物的制備 稱(chēng)取雞蛋花花朵干品35 g，加干品10倍的雙蒸水浸泡1 h后，煮沸30 min，自然冷卻至室溫后過(guò)濾，保存為濾液Ⅰ；同法再加入8倍的雙蒸水，煮沸30 min后過(guò)濾，保存為濾液Ⅱ；將濾液Ⅰ和Ⅱ混合，文火濃縮至100 mL，即為雞蛋花水提液(相當(dāng)于含生藥0.35 g·mL-1)，置5 ℃冷藏密閉備用，臨用前按劑量配制相應(yīng)藥液[4]。

1.5 小鼠氨水引咳實(shí)驗(yàn) 取小鼠50只，隨機(jī)分為5組，每組10只。即正常對(duì)照組(0.9%氯化鈉溶液組)，雞蛋花水提取物大劑量組(3.0 g·kg-1)、中劑量組(2.1 g·kg-1)、小劑量組(1.2 g·kg-1)及枸櫞酸噴托維林片組(劑量0.03 g·kg-1)，均按每千克體質(zhì)量劑量灌胃給藥，正常對(duì)照組給予等體積的0.9%氯化鈉溶液。實(shí)驗(yàn)前小鼠禁食不禁水8～12 h，灌胃給藥5 d，末次給藥1 h后，分別將小鼠置于倒置的500 mL燒杯中，其內(nèi)放有一小棉球，用1 mL注射器每次吸取28%氨水0.2 mL注入棉球上，5組動(dòng)物隨機(jī)交替進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。觀察并記錄小鼠咳嗽的潛伏期(即從注射氨水開(kāi)始至出現(xiàn)咳嗽的時(shí)間)及3 min內(nèi)的咳嗽次數(shù)(咳嗽標(biāo)準(zhǔn)：表現(xiàn)為小鼠腹肌收縮，同時(shí)張大嘴，有時(shí)可有咳嗽聲音)[5]。

1.6 祛痰作用

1.6.1 繪制酚紅標(biāo)準(zhǔn)曲線 在100 mL量瓶?jī)?nèi)用5%氫氧化鈉溶液精確配制濃度為1 mg·mL-1的酚紅母液，再稀釋成0.0，0.1，0.5，1.0，1.5，10.0 μg·mL-1溶液，分別裝置于5個(gè)10 mL量瓶?jī)?nèi)[6]。將配置的溶液分別在波長(zhǎng)546 nm處測(cè)吸光度A值，結(jié)果依次為0.000，0.002，0.026，0.045，0.070，0.426，線性方程為Y=0.046 9X-0.000 5(r=0.995 4)。6管酚紅含量與A值之間的直線相關(guān)的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。

1.6.2 小鼠氣管酚紅排泄實(shí)驗(yàn) 取小鼠50只，隨機(jī)分為5組，每組10只，即正常對(duì)照組(0.9%氯化鈉溶液組)、雞蛋花水提取物大、中、小劑量組(3.0，2.1，1.2 g·kg-1)及氯化銨組，均按每千克體質(zhì)量劑量灌胃給藥，對(duì)照組給予等體積的0.9%氯化鈉溶液。灌胃給藥5 d，末次給藥1 h后腹腔注射2.5%酚紅0.1 mL·(10 g)-1，30 min后處死動(dòng)物，解剖分離出氣管，剝?nèi)夤苤車(chē)M織，剪下自甲狀軟骨下至氣管分支處的一段氣管，放入盛有0.9%氯化鈉溶液2 mL的試管中，再加入1 mol·L-1氫氧化鈉0.1 mL，避光放置30 min后取上清液，用722分光光度計(jì)于波長(zhǎng)546 nm處測(cè)吸光度(A)值。A越大表示酚紅排泌量越多，提示藥物的祛痰作用越強(qiáng)。據(jù)回歸方程求出濃度(μg·mL-1)，數(shù)據(jù)經(jīng)t檢驗(yàn)[6]。

2 結(jié)果

2.1 雞蛋花水提取物對(duì)小鼠氨水引咳實(shí)驗(yàn)的影響 由表1可知，與正常對(duì)照組比較，雞蛋花水提取物小、中劑量組濃氨水所致小鼠咳嗽的潛伏期顯著延長(zhǎng)(P<0.01)，枸櫞酸噴托維林片組濃氨水所致小鼠咳嗽的潛伏期明顯延長(zhǎng)(P<0.01)，雞蛋花水提取物大劑量組濃氨水所致小鼠咳嗽的潛伏期可延長(zhǎng)(P<0.05)；枸櫞酸噴托維林片組及雞蛋花水提取物小劑量組濃氨水所致小鼠咳嗽次數(shù)均能減少(P<0.01)，雞蛋花水提取物大、中劑量組對(duì)濃氨水所致小鼠咳嗽次數(shù)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。與枸櫞酸噴托維林片組比較，雞蛋花水提取物小劑量組濃氨水所致小鼠咳嗽的潛伏期明顯延長(zhǎng)(P<0.01)，其中劑量組濃氨水所致小鼠咳嗽的潛伏期可延長(zhǎng)(P<0.05)，而其大劑量組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；雞蛋花水提取物小劑量組能減少3 min內(nèi)咳嗽次數(shù)(P<0.05)，其大、中劑量組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)果表明，雞蛋花水提取物對(duì)濃氨水所致的小鼠咳嗽有明顯的鎮(zhèn)咳作用。

2.2 雞蛋花水提取物對(duì)小鼠氣管分泌酚紅的影響 由表2可知，與正常對(duì)照組比較，雞蛋花水提取物小劑量組小鼠氣管分泌酚紅量明顯增加(P<0.01)，雞蛋花

表1 5組小鼠濃氨水所致咳嗽情況的比較

Tab.1 Comparison of cough induced by concentrated ammonia solution among five groups of mice

組別劑量/(g·kg-1)咳嗽潛伏期/s3min內(nèi)咳嗽/次正常對(duì)照組—46．70±11．6241．70±10．96枸櫞酸噴托維林片組0．0377．20±25．62?130．50±5．52?1雞蛋花水提取物 小劑量組1．20119．0±22．26?1?230．00±9．95?1?3 中劑量組2．1093．90±26．11?1?335．50±8．75 大劑量組3．0074．50±36．52?431．60±7．69?4F值13．544．98P值<0．05<0．05

與正常對(duì)照組比較，t=2.78，8.72，4.66，1.70，t=4.11，3.19，2.23，3.37，*1P<0.01，*4P<0.05；與枸櫞酸噴托維林片組比較，F(xiàn)=11.43，t=1.56，1.44，3.89，F(xiàn)=0.90，t=0.47，1.52，2.68，*2P<0.01，*3P<0.05

Compared with normal control group，t=2.78，8.72，4.66，1.07，t=4.11，3.19，2.23，3.37，*1P<0.01，*4P<0.05；compared with carbetapentane citrate group，F(xiàn)=11.43，t=1.56，1.44，3.89，F(xiàn)=0.90，t=0.47，1.52，2.68，*2P<0.01，*3P<0.05

水提取物中劑量組小鼠氣管分泌酚紅量雖有增加，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，雞蛋花水提取物大劑量組小鼠氣管分泌酚紅量增加(P<0.01)。結(jié)果表明，雞蛋花水提取物有祛痰作用。

表2 5組小鼠呼吸道酚紅排泌物的比較

Tab.2 Comparison of phenolsulfonphthalein excretion into respiratory tract among five groups of mice

組別劑量/(g·kg-1)A值酚紅濃度/(μg·mL-1)正常對(duì)照組—0．06±0．031．33±0．56氯化銨組5．000．07±0．021．56±0．35雞蛋花水提取物 小劑量組1．200．16±0．08?13．41±1．73?1 中劑量組2．100．08±0．051．67±1．02 大劑量組3．000．12±0．05?12．31±0．76?1F值6．986．98P值<0．05<0．05

與正常對(duì)照組比較，t=1.08，3.25，0.93，3.62，*1P<0.01

Compared with normal control group，t=1.08，3.25，0.93，3.62，*1P<0.01

3 討論

雞蛋花是嶺南地區(qū)習(xí)用草藥，也是廣東涼茶中的主要原料藥材之一，市場(chǎng)銷(xiāo)售的著名品牌涼茶“王老吉涼茶”“五花茶”等也以雞蛋花為主要組成原料[3]。相關(guān)人士已從雞蛋花中提取多種化學(xué)成分，有環(huán)烯醚萜類(lèi)、三萜類(lèi)、黃酮醇類(lèi)、醇類(lèi)、醛類(lèi)、脂肪酸類(lèi)等成分[7]。黃酮類(lèi)化合物是廣泛存在于藥用植物中的一類(lèi)化合物，大多與糖類(lèi)結(jié)合為苷存在，多具有調(diào)血脂、擴(kuò)張冠脈、止血、鎮(zhèn)咳、祛痰、降低血管脆性等活性。黃酮類(lèi)化合物中的抗菌成分較多，對(duì)細(xì)菌有廣泛性的抑制作用[8]。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，雞蛋花水提取物小、中、大劑量組均能延長(zhǎng)濃氨水所致小鼠咳嗽的潛伏期，其小劑量組可減少濃氨水所致小鼠咳嗽次數(shù)；其小、大兩種劑量組能使小鼠氣管分泌酚紅量增加；提示雞蛋花水提取物有鎮(zhèn)咳祛痰作用。因此，推測(cè)雞蛋花水提取物的鎮(zhèn)咳祛痰作用可能是雞蛋花水提取物中的某種成分發(fā)揮作用，保護(hù)了呼吸道感受器，使之免受氨水的刺激，延長(zhǎng)氨水引發(fā)小鼠咳嗽的潛伏期，從而減少濃氨水所致小鼠咳嗽次數(shù)，且通過(guò)促進(jìn)呼吸道黏液腺的分泌功能，促進(jìn)酚紅的排出量增加，使痰液變稀，易于咯出有關(guān)，是否與黃酮類(lèi)成分發(fā)揮作用有關(guān)，其作用機(jī)制有待進(jìn)一步研究。雞蛋花水提取物具有鎮(zhèn)咳、祛痰作用，為臨床治療肺部疾病提供藥理實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

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Antitussive and Expectorant Effects of Water Extract of Plumeria rubra in Mice

QIN Xining1, LI Yuanhui2, HUANG Ying2, GUO Shengqi2, HUANG Tingzhang2, LI Yunda2, CHENG Shijia2, HUANG Yanfeng3, ZHAO Shanmin3

(1.SchoolofPublicHealthManagement； 2.CollegeofClinicalMedicine； 3.DepartmentofPhysiology,YoujiangMedicalUniversityforNationalities,Baise533000,China)

Objective To explore the antitussive and expectorant effects of water extract ofPlumeriarubrain mice. Methods The antitussive and expectorant effects in mice were observed by concentrated ammonia induced cough model and phenol red excretion method.The mice were divided into normal control group,Plumeriarubrawater extract group (1.2, 2.1, 3.0 g·kg-1), and positive control group (carbetapentane citrate group and ammonium chloride group).The mice were intragastrically administrated according to per kg body weight dose.After corresponding drug administration for five days, latent phase of cough and cough frequency per 3 min were recorded in mice.The mice of phenol sulfonphthalein excretion test were administered for 5 days, and 1 h after final adminstration, 2.5% phenol sulfonphthalein solution was intraperitoneally injected to detect the concentration of tracheal phenol sulfonphthalein. Results Compared with normal control group, the latent phase was significantly longer in low, middle and highPlumeriarubrawater extract group (F=13.54,P<0.05).The cough frequency per 3 min was significantly reduced in lowPlumeriarubrawater extract group and the carbetapentane citrate group (F=4.98，P<0.05)； the concentration of phenol sulfonphthalein of mouse trachea in low and highPlumeriarubrawater extract group was significantly increased (F=6.98，P<0.05).Latent phase of cough was longer in low and middlePlumeriarubrawater extract group than in carbetapentane citrate group (F=11.43，P<0.05). ConclusionPlumeriarubrawater extract has significant antititussive and expectorant efficacy.

Extracts ofPlumierrubra； Antitussive effect； Expectorant

2014-11-28

2015-03-13

*右江民族醫(yī)學(xué)院2014年度校級(jí)大學(xué)生創(chuàng)新訓(xùn)練計(jì)劃立項(xiàng)項(xiàng)目(右醫(yī)教字[2014]5號(hào)XJCXB201401)

覃茜檸(1991-)，女，廣西河池人，在讀學(xué)士，主要從事中草藥方向的研究。電話：(0)18276635657，E-mail：18276635657@163.com。

黃彥峰(1977-)，女，廣西百色人，實(shí)驗(yàn)師，學(xué)士，主要從事生理學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)及中草藥藥效學(xué)研究。電話：(0)13877696995，E-mail：huangyf238@126.com。

R285.5；R563

A

1004-0781(2015)12-1569-03

10.3870/j.issn.1004-0781.2015.12.005