超聲波快速石蠟切片在胃腸鏡活檢黏膜中的應(yīng)用及意義

朱啟淦，孟加榕，戴太監(jiān)，楊立民，潘羨心，林明珠(中國(guó)人民解放軍第一七五醫(yī)院，廈門大學(xué)附屬東南醫(yī)院病理科，漳州 363000;通訊作者;E-mail:mengjiarong@sina．com)

傳統(tǒng)的石蠟切片方法雖然是目前病理診斷中最可靠、最準(zhǔn)確的診斷方法之一，但由于操作時(shí)間較長(zhǎng)(有的醫(yī)院甚至需要2-3 d)，已不能適應(yīng)現(xiàn)代臨床醫(yī)學(xué)快速診斷的要求［1］。超聲波快速石蠟切片因其制片質(zhì)量可與常規(guī)石蠟切片相媲美，并且隨著技術(shù)的不斷改進(jìn)，制片的時(shí)間能滿足術(shù)中快速診斷的需要，使得超聲快速石蠟切片在一些小醫(yī)院的應(yīng)用較為廣泛［2］。隨著胃腸鏡的普及，胃腸鏡活檢小黏膜標(biāo)本數(shù)量也隨著增長(zhǎng)。我院采用超聲波快速石蠟切片技術(shù)制作胃腸鏡活檢石蠟切片，可以當(dāng)天取病理報(bào)告，有效地縮短了病人就診時(shí)間。本文探討應(yīng)用超聲波快速石蠟切片技術(shù)制備胃腸鏡活檢小黏膜石蠟切片予以推廣的可行性、實(shí)用性，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1．1 材料與試劑

收集我院2014-07～2015-07使用超聲波快速石蠟切片技術(shù)制作的胃腸鏡活檢小黏膜石蠟切片1 257例。取材部位包括食管、賁門、胃底、胃體、幽門、十二指腸、回盲部、升結(jié)腸、橫結(jié)腸、降結(jié)腸、乙狀結(jié)腸、直腸等。試劑:4%中性甲醛、丙酮、石蠟等。

1．2 儀器

RM2245切片機(jī)(萊卡);PHY-Ⅲ病理組織漂烘儀(常州市中威電子儀器有限公司);YTG-300E生物組織處理多用機(jī)及程序化控制系統(tǒng)(湖北省孝感市亞光醫(yī)用電子技術(shù)有限公司)，3個(gè)超聲波發(fā)生器，可單獨(dú)使用也可同時(shí)操作，工作性能穩(wěn)定可靠。3個(gè)150 ml的清潔燒杯。

1．3 方法

①取材。將活檢組織分別用編好病理號(hào)的濾紙包裹，置于脫水筐中。②固定。將組織放入50 ml中性甲醛5-8 min。③脫水透明。用吸水紙除去包裹組織表面的殘液，投入50 ml丙酮6-8 min;有學(xué)者認(rèn)為丙酮在脫水的同時(shí)兼有透明的作用［3］。④浸蠟。用吸水紙除去包裹組織表面的殘液，隨即投入50 ml石蠟液中約8-10 min。⑤包埋。將編好病理號(hào)的濾紙包裹的組織打開(kāi)與對(duì)應(yīng)標(biāo)記病理號(hào)的包埋盒進(jìn)行包埋。⑥與常規(guī)石蠟切片相同，切片、烤片。⑦染色。格林環(huán)保染液Ⅰ、Ⅱ染色程序脫蠟［4］各5 min;無(wú)水乙醇和95%乙醇各30 s后流水洗;蘇木精染色5 min，后水洗3 min，分化2 s后充分水洗;伊紅1 min后稍水洗，除浮染液30 s;無(wú)水乙醇Ⅰ、Ⅱ各1 min，除水透明和透明各1 min;GS封片膠封片鏡檢。

②-④步均在YTG-300E生物組織處理多用機(jī)中進(jìn)行，使用150 ml的燒杯盛裝試劑和石蠟，YTG-300E生物組織處理多用機(jī)的水槽溫度為68-72℃。

2 結(jié)果

超聲波快速石蠟切片整個(gè)過(guò)程約1．5 h，在光鏡下觀察，紅藍(lán)對(duì)比分明，顏色亮麗鮮艷，組織結(jié)構(gòu)清楚，細(xì)胞形態(tài)完整，胞質(zhì)核對(duì)比醒目，胞膜及核膜清晰，對(duì)比度好(圖1，2)。與常規(guī)石蠟切片耗時(shí)2-3 d相比明顯縮短制片時(shí)間，且質(zhì)量與常規(guī)石蠟切片(圖1，2)媲美，符合優(yōu)質(zhì) HE 切片要求［5］。在1 257例病例中惡性159例(12．65%)，其中102例(64．2%)在我院手術(shù)，與術(shù)后常規(guī)石蠟切片相符;交界57例(4．53%)，建議重取或定期復(fù)查;延遲3 例(0．24%)因標(biāo)本太小或夾取組織為黏液，建議重取。

圖1 腺瘤性息肉乙狀結(jié)腸活檢組織(×100)

圖2 腺癌浸潤(rùn)肌層乙狀結(jié)腸活檢組織(×100)

3 討論

我國(guó)消化道腫瘤呈逐年上升趨勢(shì)，消化內(nèi)鏡技術(shù)已廣泛應(yīng)用于臨床。內(nèi)窺鏡下取黏膜活檢技術(shù)已成為胃腸道腫瘤、息肉、炎癥等各種疾病的重要診斷方法［6］。另一方面，隨著社會(huì)發(fā)展，生活節(jié)奏加快，人們對(duì)醫(yī)療護(hù)理質(zhì)量和快捷方便性的醫(yī)療服務(wù)要求越來(lái)越高，醫(yī)療模式隨之發(fā)生了較大變化，為適應(yīng)生物—心理—社會(huì)這一新模式［7］，我院消化內(nèi)鏡室開(kāi)展了日間病房。然而在日常的病理檢驗(yàn)中，黏膜活檢組織主要采用的是常規(guī)石蠟切片技術(shù)，這種技術(shù)病理報(bào)告時(shí)限周期長(zhǎng)，嚴(yán)重影響病人的下一步治療。超聲波快速石蠟切片技術(shù)通過(guò)微波輻射能有效縮短制片過(guò)程中的固定、脫水透明及浸蠟時(shí)間。且操作簡(jiǎn)便，制片質(zhì)量可與常規(guī)石蠟切片相媲美，病人可以當(dāng)天取報(bào)告，對(duì)內(nèi)鏡室開(kāi)展日間病房及平均住院日的縮短起到極大作用，滿足了臨床醫(yī)生和病人對(duì)病理報(bào)告準(zhǔn)確及時(shí)的高標(biāo)準(zhǔn)要求。

超聲波快速石蠟切片在操作的過(guò)程中，需要注意以下事項(xiàng):①當(dāng)前送檢的胃腸鏡黏膜活檢標(biāo)本，普遍存在檢材數(shù)量少、標(biāo)本小、黏膜面不易分辨等問(wèn)題。同時(shí)，由于包埋面不易確定，導(dǎo)致黏膜平包、平切、不能完全呈現(xiàn)黏膜各層組織結(jié)構(gòu)的情況時(shí)有發(fā)生［6］。需要病理技術(shù)人員經(jīng)驗(yàn)豐富，取材時(shí)標(biāo)本需用濾紙包裹，對(duì)于一些包膜完整的圓形息肉，需對(duì)半切開(kāi)，活檢組織過(guò)厚的標(biāo)本按解剖面切薄至0．15 cm左右，并采用正確的包埋方式。②標(biāo)本例數(shù)多時(shí)，在濾紙上用鉛筆標(biāo)記相應(yīng)病理號(hào)，放入脫水筐，包埋時(shí)對(duì)應(yīng)標(biāo)記病理號(hào)的包埋盒。③整個(gè)制作過(guò)程應(yīng)認(rèn)真觀察，間斷翻動(dòng)脫水筐，保證各例標(biāo)本充分浸泡于試劑中，并提前將下一步試劑放在加熱池預(yù)熱，便于在有限時(shí)間內(nèi)發(fā)揮最大的功效。④脫水時(shí)間的掌握，時(shí)間過(guò)短或過(guò)長(zhǎng)都不符合快速石蠟切片的要求，處理時(shí)間的長(zhǎng)短要視活檢黏膜類型、黏膜組織塊的厚薄，標(biāo)本例數(shù)等因素靈活掌握。以脫水筐平鋪滿活檢組織為宜，切不可疊加，影響試劑的浸入，如標(biāo)本多，可分批次進(jìn)行。⑤超聲波處理儀置于通風(fēng)柜中，能有效減少操作過(guò)程中試劑揮發(fā)產(chǎn)生的氣味。

目前，快速石蠟切片染色最常用的還是以二甲苯為脫蠟及透明劑、劇毒黃色氧化汞作為蘇木精氧化劑，其中二甲苯可危害人體健康［8］。我科使用格林環(huán)保染液進(jìn)行染色的快速石蠟切片，切片脫蠟完全徹底，顏色亮麗鮮艷，胞質(zhì)核對(duì)比醒目，胞膜及核膜清晰，切片透明度高。不僅同常規(guī)二甲苯脫蠟透明的HE染色效果相同，而且可以減少二甲苯等有害液體的排放，減少其對(duì)人體危害及環(huán)境污染［9］。

綜上所述，超聲波快速石蠟切片技術(shù)過(guò)程科學(xué)合理，操作簡(jiǎn)便，制片質(zhì)量穩(wěn)定。病理技術(shù)人員通過(guò)培訓(xùn)，嚴(yán)格按照標(biāo)準(zhǔn)操作程序規(guī)范操作，可以為病理醫(yī)生提供高質(zhì)量的切片及清晰的染色保證。胃腸鏡活檢小黏膜快速石蠟制片的開(kāi)展方便了門診急診患者，使他們的疾病得到了及時(shí)診斷及治療，同時(shí)滿足了臨床手術(shù)快速診斷的需要，值得在各醫(yī)院推廣使用。

［1］楚廣民，羅偉，裴素麗，等．超聲波快速石蠟切片的制備［J］．診斷病理學(xué)雜志，2001，8(6):366．

［2］鄭俊，駱利康，何曉燕，等．超聲快速石蠟切片對(duì)免疫組化抗原檢測(cè)的影響［J］．臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志，2008，24(4):497-498．

［3］馬恒輝，徐瑋，孟奎，等．使用超聲波處理儀制備快速石蠟切片的體會(huì)［J］．中華病理學(xué)雜志，2001，30(1):65．

［4］田玉旺，朱紅艷，李琳，等．GS環(huán)保染液在病理制片技術(shù)工作中的應(yīng)用［J］．診斷病理學(xué)雜志，2011，18(4):213-215．

［5］ 中華醫(yī)學(xué)會(huì)．臨床技術(shù)操作規(guī)范:病理學(xué)分冊(cè)［M］．北京:人民軍醫(yī)出版社，2004:6．

［6］徐金永，趙夫娟，陳陽(yáng)，等．胃腸黏膜瓊脂豎式包埋與常規(guī)包埋對(duì)比分析［J］．臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志，2014，30(4):461-462．

［7］鄭成中，張軍，孫玉平，等．兒科留觀15008例分析及啟迪［J］．中國(guó)當(dāng)代兒科雜志，2002，4(6):525-526．

［8］Acton A，Harvey T，Grow M．An examination of non-fomalinbased fixation metho-ds for xenopus embryos［J］．DevDyn，2005，233(147):1464-1469．

［9］宋一民，龐霞，高冬玲，等．格林環(huán)保染液在快速石蠟切片應(yīng)用中的體會(huì)［J］．診斷病理學(xué)雜志，2014，6(6):403．